共表达基因Ⅰ型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3和GP5蛋白DNA疫苗的构建及免疫活性测定

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型(PRRSV基因Ⅰ型)最近在中国被发现。基因Ⅰ、Ⅱ型PRRSV毒株的共存对PRRSV诊断和管理造成严重的影响。现有疫苗不能保护猪完全免受PRRSV的感染,且存在可遗传的缺点。目前已研制出基因工程疫苗,包括DNA疫苗和活载体工程疫苗。本试验旨在通过对小鼠免疫基因Ⅰ型PRRSV GP3和GP5蛋白共表达的DNA疫苗,测定其增强免疫反应。为评价欧洲型PRRSV GP3和GP5蛋白的免疫原性,试验以基因Ⅰ型PRRSV LV株(GenBank登录号:M96262)为基础,构建pVAX1-EU-ORF3-ORF5、pVAX1-EU-ORF3、pVAX1-EU-ORF5 3个DNA疫苗,采用以壳聚糖基因纳米粒子形式转运的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,为了增强免疫效果,以Quil A(Quillaja)为免疫佐剂;检测了免疫小鼠血清中的GP3和GP5特异性抗体、中和抗体和细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、IFNγ)及其他免疫参数,包括脾脏T淋巴细胞增殖反应和T淋巴细胞亚型。结果显示,基因Ⅰ型PRRSV的ORF3和ORF5蛋白诱导GP3和GP5特异性抗体,能中和病毒;加强免疫之后试验组IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ的水平均显著高于对照组(P<0.05),且诱导CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞的产生。T淋巴细胞增殖试验结果显示,PRRSV LV株能刺激试验组小鼠T淋巴细胞的增殖。以Quil A为佐剂,基因Ⅰ型PRRSV GP3、GP5蛋白有良好的免疫原性和反应性。更重要的是,与免疫单独任何一个蛋白DNA疫苗的小鼠相比,免疫共表达GP3和GP5蛋白DNA疫苗的小鼠具有较好的PRRSV特异性中和抗体滴度和细胞介导的免疫反应。本试验结果表明小鼠共免疫GP3和GP5后诱导免疫反应效果较好。