摘要
第一章 非病毒基因治疗可控研究概述
一、基因治疗概述
1. 基因治疗的概念
2. 基因治疗的途径
3. 基因治疗中的几个关键问题
二、非病毒载体介导的基因治疗
1. 基因治疗的基因导入系统
2. 非病毒载体的特点
3. 基因输送的靶向性
三、可控基因治疗的研究
1. 可控基因治疗实现的原理
2. 几种应用于基因治疗的诱导型启动子
四、本课题的内容
第二章 实验仪器 材料
一、实验材料
二、实验仪器
第三章 实验方法
一、质粒的构建
1. 质粒酶切
2. 凝胶中回收DNA片断
3. DNA片断连接
4. 重组质粒酶切鉴定
5. 重组质粒大规模制备
二、细胞培养
三、细胞基因转染
四、体内基因转染
五、细胞和体内热诱导基因表达
六、诱导后基因表达的测定
1. Luciferase活性测定
2. 比色法(Bradford法)测定细胞总蛋白质浓度
七、肌肉损伤检测
八、小鼠加热红外图像
第四章 实验结果
一、重组质粒构建
二、热诱导基因治疗的细胞实验
1. 比色法测定蛋白浓度标准曲线
2. 热诱导基因表达的时间曲线
3.热诱导基因重复表达的细胞实验(on-off-on)
4. 不同时间点诱导基因表达的细胞实验
5. 热诱导作为基因表达的"开关"
三、热诱导基因治疗的在体实验
1. 加热温度对基因诱导表达的影响
2. 体内热诱导基因表达时间曲线
3. 不同时间点在体热诱导基因表达(on-on)
4. 体内热诱导基因重复表达(on-off-on)
四、加热小鼠的体表温度分布
1. 加热后立即拍摄
2. 加热后散热
五、热对肌肉的损伤情况
1. 加热后立即的肌肉损伤情况(39oC 、41oC)
2. 加热后一天的肌肉损伤情况
3. 加热后三天肌肉损伤
第五章 讨论
一、表达质粒的差异
二、加热温度
三、加热系统
四、热诱导作为基因开关
五、展望
致 谢
参考文献
攻读硕士学位期间完成论文目录
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