甲胺磷、甲拌磷在犬体内的死后再分布研究

摘要

目的:
　　 1.建立甲胺磷、甲拌磷在灌胃染毒犬体内死后再分布的同体(动物)模型；
　　 2.研究甲胺磷、甲拌磷在犬体内的死后再分布规律,观察是否存在位置依赖和时间依赖的死后浓度变化,为甲胺磷及甲拌磷中毒死亡案件的法医学鉴定提供实验依据。
　　 方法:
　　 1.甲胺磷在犬体内的死后再分布研究:取犬4只,隔夜禁食,随机分为实验组(3只)和对照组(1只)。实验组犬,按8LD50甲胺磷(7.4mg／kg)灌胃。对照组犬,以相同的方法以等量生理盐水灌胃,各对应组织器官样品为空白对照。待实验组犬心跳和呼吸等生命体征全部消失时,迅速解剖动物,分别取心血、周围血、肝脏、脑和右后肢肌肉,并于死后不同时间(2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h)在同一尸体取心血、肝脏、脑和右后肢肌肉,按方法3提取,检测其中甲胺磷含量。
　　 2.甲拌磷在犬体内的死后再分布研究:取犬4只,隔夜禁食,随机分为实验组(3只)和对照组(1只)。实验组犬,按40LD50(0.7mg／kg)甲拌磷灌胃。对照组犬,以相同的方法以等量生理盐水灌胃,各对应组织器官样品为空白对照。待实验组犬心跳和呼吸等生命体征全部消失时,迅速解剖动物,分别取心血、周围血、肝脏、脑和右后肢肌肉,并于死后不同时间(2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h)在同一尸体取心血、肝脏、脑和右后肢肌肉,按方法3提取,检测其中甲拌磷含量。
　　 3.提取和检测:按照本课题组所建立的生物检材中甲胺磷及甲拌磷的检测方法,生物样本经二氯甲烷萃取,气相色谱和气相色谱／质谱联用检测,分别根据甲胺磷、甲拌磷的特征离子峰、保留时间定性与内标法、工作曲线法定量。
　　 4.采用SPSS11.5统计软件处理实验数据,结果以均数±标准差(X)±S表示。
　　 结果:
　　 1.症状:实验组犬:8LD50甲胺磷灌胃后,约28.0±2.5min出现呕吐、流涎、瞳孔缩小、呼吸道分泌物增多、肌束震颤、抽搐、大小便失禁等症状,灌胃后约75.0min死亡；40LD50甲拌磷灌胃后,约17.0±2.8min出现呕吐、流涎、瞳孔缩小、呼吸道分泌物增多、肌束震颤、抽搐、大小便失禁等症状,灌胃后约30.0min死亡；对照组犬:两组实验的对照组均无中毒症状。
　　 2.GC和GC／MS检测
　　 2.1甲胺磷GC／MS定性分析中,甲胺磷m／z特征离子碎片为126、111、94。GC定量分析中,甲胺磷的保留时间为4.681min,内标磷酸三丁酯的保留时间为7.239min。甲胺磷在心血和肝组织中的回归方程、线性检测范围、最低检出浓度分别为Y血=0.0347X+0.0184(R2=0.994)、0.8-64μg／mL、0.1μg／mL；Y肝=0.0422X-0.0202(R2=0.998)、0.8-64.0μg／g、0.1μg／g。
　　 2.2甲拌磷GC／MS定性分析中,甲拌磷m／z特征离子碎片为231、121、97、75。GC定量分析中,甲拌磷的保留时间为8.037min,内标磷酸三丁酯的保留时间为7.349min。甲拌磷在心血和肝组织中的回归方程、线性检测范围、最低检出浓度分别为Y血=0.6374X-0.0705(R2=0.9992)、0.1.10μg／L、0.01μg／mL；Y肝=0.8178X-0.1448(R2=0.9990)、0.1-10.0μg／g、0.012μg／g。
　　 3.甲胺磷死后再分布:8LD50甲胺磷在灌胃致死犬心血和组织中的浓度呈升高趋势。死亡当时心血中甲胺磷含量高于周围血,心血与周围血甲胺磷浓度比(C心血／C周围血)达1.77；心血中甲胺磷含量在死后4h之内稳定,8h-144h内显著升高(P<0.05),死后与死亡当时心血甲胺磷浓度比(C死后血／C死亡当时血)达1.81～2.09；肝脏中甲胺磷含量在12h之内稳定,24h-144h内显著升高(P<0.05),死后与死亡当时肝脏甲胺磷浓度比(C死后肝／C死亡当时肝)达1.22～1.70；脑组织中甲胺磷含量在8h-48h内显著升高(P<0.05),死后与死亡当时脑甲胺磷浓度比(C死后脑／C死亡当时脑)达1.23～1.54；肌肉中甲胺磷含量变化不明显(P>0.05)。
　　 4.甲拌磷死后再分布:40LD50甲拌磷在灌胃致死犬心血和组织中的浓度呈升高趋势。死亡当时心血中甲拌磷含量高于周围血,心血与周围血甲拌磷浓度比(C心血／C周围血)达1.24；心血中甲拌磷含量在死后8h之内稳定,12h-24h内显著升高(P<0.05),死后与死亡当时心血甲拌磷浓度比(C死后血／C死亡当时血)达1.23～1.34；肝脏中甲拌磷含量在24h之内稳定,48h-96h内显著升高(P<0.05),死后与死亡当时肝脏甲拌磷浓度比(C死后肝／C死亡当时肝)达1.27～1.44；在染毒犬死后96h内,肌肉和脑组织中甲拌磷含量变化不明显(P>0.05)。
　　 结论:
　　 1.本实验采用8LD50甲胺磷、40LD50甲拌磷灌胃,建立了甲胺磷、甲拌磷在灌胃染毒犬体内死后再分布的同体(动物)模型,可应用于甲胺磷、甲拌磷中毒(死)的法医毒物动力学研究。
　　 2.8LD50甲胺磷中毒死亡犬死亡当时心血与周围血甲胺磷浓度比达1.77,死后与死亡当时心血甲胺磷浓度比可达1.81～2.09,死后与死亡当时肝和脑甲胺磷浓度比达1.22～1.70和1.23～1.54,肌肉中甲胺磷含量变化不大。提示甲胺磷在染毒致死犬体内存在死后位置依赖的血浓度变化和死后时间依赖的血与脏器浓度变化,可发生死后再分布,肌肉受影响较小。
　　 3.40LD50甲拌磷中毒死亡犬死亡当时心血与周围血甲拌磷浓度比达1.24,死后与死亡当时心血甲拌磷浓度比可达1.23～1.34,死后与死亡当时肝甲拌磷浓度比达1.27～1.44,脑和肌肉中含量变化不大。提示甲拌磷在染毒致死犬体内存在死后位置依赖的血浓度变化和死后时间依赖的血与脏器浓度变化,可发生死后再分布,肌肉和脑组织受影响较小。
　　 4.较大剂量甲胺磷(8LD50)、甲拌磷(40LD50)在犬体内均可发生死后再分布。甲胺磷、甲拌磷中毒(死)案件法医学鉴定中应考虑死后再分布的影响,除采取心血、周围血、肝脏等常规检材外,还应取受死后再分布影响较小的肌肉和脑组织进行定性、定量分析。