不同保存条件对人脂肪干细胞条件培养基中PDGF-AA浓度的影响

摘要

前言:脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)具有显著分泌功能，其可分泌多种生物活性因子[2]，其中血小板衍化生长因子AA(Platelet-derived growth factor-AA，PDGF-AA)能够促进骨骼发育和骨折愈合[11]，加速伤口闭合[12]，促进髓鞘再生[13]，在毛发生长周期中发挥重要作用[14]。不同保存条件及时间，将导致ADSC-CM中有效成分损失，造成实验的可重复性降低，应用前景受到影响。本实验通过对不同保存条件下条件培养基中PDGF-AA浓度的检测，明确其含量变化，寻找条件培养基最佳保存条件以及划定条件培养基有效使用时间，减少因条件培养基保存温度及时间不同导致的有效成分含量差距过大引起的相关实验可重复性及可对比性下降。
　　材料和方法:1.ADSCs分离提取、原代及传代培养。2.ADSCs的体外多向诱导分化。3.ADSC-CM提取及保存。4.实验分组:分为4℃保存组，-20℃保存组和-80℃保存组。5.检测各样品有效成分浓度。6.统计学处理:本实验使用GraphPad Prism6软件进行统计学分析。
　　结果:1.提取的原代ADSCs12h后部分贴壁生长，24h后大部分ADSCs均已贴壁，镜下形态呈圆形，椭圆形或多边形。第3代ADSCs呈均一的长梭形。2.ADSCs在经过成骨诱导3周后经茜素红染色，镜下表现为细小橙红色颗粒聚集成团，为染色的钙化结节。ADSC在经成脂诱导2周后经油红O染色，镜下表现为细胞胞浆内布满大小不一亮红色颗粒，为染色的脂肪小滴。3.ADSC-CM中PDGF-AA含量变化:2周之前，4℃条件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量最高，从第3周开始，-20℃及-80℃条件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量开始高于4℃条件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量，从第13周开始，-80℃条件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量开始高于-20℃条件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量。
　　结论:1.ADSC-CM中PDG-AA含量随保存时间增加而减少。2.若以保存ADSC-CM中PDGF-AA含量为目的:保存时间小于2周时，4℃条件下保存;保存时间为3-13周之间，-20℃及-80℃保存;保存时间大于13周时，-80℃保存。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1 实验材料

2．1．1 实验试剂

2．1．2 实验仪器及材料

2．2 实验方法

2．2．1 ADSCs分离提取、原代及传代培养

2．2．2 ADSCs的体外多向诱导分化

2．2．3 ADSC-CM提取及保存

2．2．4 实验步骤

2．2．5 技术路线

2．2．6 统计学处理

3．1 ADSCs的形态特征

3．2 ADSC的体外多向诱导分化

3．2．1 成骨诱导

3．2．2 成脂诱导

3．3 ADSC-CM中PDGF-AA含量变化

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 脂肪干细胞的特性与应用的研究进展

致谢

个人简历