抗高血压大豆肽营养液的开发研究——抗高血压肽的分离提纯及体内外活性研究

摘要

本论文是在上届论文确定的酶解条件基础之上，将大豆蛋白酶解液进行预处理，上样后通过单因素试验确定凝胶过滤色谱最适分离条件，绘制分子量标准曲线，并对分离液进行血管紧张素转化酶(Angioensin Converting Enzyme，简称ACE)体外抑制实验，最终确定分离出的抑制活性高的组分的分子量范围，完成降血压肽的分离过程。在凝胶分离上采用SephadexG-25进行分组分离和SephadexG-15进行成分分离连续顺次性的分离方法。本论文还进行了自发性高血压症大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats，简称SHR)动物实验，对酶解产物的稳定性进行了研究。研究结果表明：
　　 确定了凝胶过滤色谱的最适分离条件。在分组分离中，SephadexG-25 Medium分离的最适条件为：上样量5mL，酶解液2倍浓缩，洗脱流速2mL/6min，单管收集量2mL。后改用SephadexG-25 Super fine分组分离，其最适分离条件为：上样量5mL，酶解液2倍浓缩，洗脱流速2mL/7min，单管收集量2mL。进行组分分离，使用Sephadex G-15分离的最适分离条件为：上样量2mL，分组分离样4倍浓缩，洗脱流速2mL/8min，单管收集量2mL。
　　 绘制分子量标准曲线并进行体外ACE抑制实验。SephadexG-25 Medium分组分离的洗脱曲线将组分分成6组，效果最好组别的ACE抑制率为86.70％，分子量范围为1440～780Da。之后改用SephadexG-25 Super fine分组分离，对应的最好组别ACE抑制率为92.78％，分子量范围为1440～710Da，分离曲线得到很大程度的改善。使用SephadexG-15组分分离，分成6个洗脱峰确定抑制效果最好的为第3个洗脱峰，ACE抑制率为71.04％，分子量范围为1060～790。分析其成分为8～10个左右氨基酸残基的多肽。通过管数计算酶解产物的分离最终产率为4.55％。
　　 通过分离实验和体外ACE抑制实验发现，降血压肽并不是集中在某一个肽段，其分子量分布在一个很广的范围内均有ACE抑制活性，只是抑制率高低不同。
　　 SHR动物实验表明：木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白1h的水解物的降血压活性最高，SHR灌胃2h后血压下降为18.4mmHg。酶解产物的稳定性研究表明：样品分别采用常温和高温杀菌处理，SHR灌胃2h后血压分别下降了13.5mmHg和10.2mmHg；对样品调酸后杀菌与不杀菌，SHR灌胃2h后血压分别下降1～3mmHg和18mmHg左右。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.1大豆多肽的概况

1.1.1大豆的介绍及大豆多肽的定义

1.1.2大豆多肽的生理活性功能

1.1.3降血压肽的简要介绍

1.2降血压肽的作用机制

1.2.1高血压的发病机理

1.2.2降血压肽的作用机理

1.2.3降血压肽的构效关系

1.2.4 ACE抑制肽

1.3降血压肽分离的研究现状

1.3.1降血压肽分离的重要性

1.3.2降血压肽分离的方法

1.3.3降血压肽分离的国内外研究现状

1.3.4分离过程中存在的几个问题

1.4降血压肽的活性研究

1.4.1抗高血压肽的活性检测方法

1.4.2体外ACE抑制活性和体内降压作用之间关系的研究

1.5本课题研究的目的及意义

1.6本论文研究的主要内容

第三章实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验原料及药品

2.1.2实验仪器

2.2实验方法

2.2.1原材料的准备与处理

2.2.2实验装置的安装

2.2.3实验的操作方法

2.2.4实验条件的优化

2.2.5 ACE抑制的体外检测

2.2.6绘制分子量标准曲线

2.2.7确定分子量与抑制率的关系

2.2.8分组分离与组分分离

2.2.9产率的计算

2.2.10动物(体内)抑制试验

第三章结果与讨论

3.1大豆蛋白酶解液真空浓缩

3.2 SephadexG-25 Medium分离条件的优化及分离组分ACE抑制效果

3.2.1 SephadexG-25 Medium凝胶分离参数的确定结果

3.2.2 Sephadex G-25 Medium分离的最适条件

3.2.3 Sephadex G-25 Medium分离分子量标准曲线的绘制

3.2.4 Sephadex G-25 Medium分离组别ACE抑制结果

3.2.5 Sephadex G-25 Medium分离的小结

3.3 SephadexG-25 Super fine分离条件的确定及分离组分ACE抑制效果

3.3.1 Sephadex G-25 super fine分离最适条件的确定

3.3.2 Sephadex G-25 Super fine分离分子量标准曲线的绘制

3.3.3 Sephadex G-25 Super fine体外ACE抑制结果

3.3.4使用Sephadex G-25 Super fine分离的小结

3.4 Sephadex G-15分离条件的确定及分离组分ACE抑制结果

3.4.1使用SephadexG-15分离条件的确定

3.4.2 Sephadex G-15分离分子量标准曲线的绘制

3.4.3分离洗脱液体外ACE抑制结果

3.4.4产率的计算

3.4.5分离部分小结

3.5动物实验(SHR实验)

3.5.1大豆蛋白不同水解时间降压效果的检测结果

3.5.2常温杀菌和高温杀菌处理样品后SHR实验的结果

3.5.3样品的调酸处理后SHR实验的结果

3.5.4普通大白鼠的持续灌胃实验结果

3.5.5 SHR动物实验小结

第四章结论

参考文献

附 录

致谢