Caspr与β-淀粉样前体蛋白在体外相互作用减少了β-淀粉样蛋白的产生

摘要

目的:
　　研究Caspr(Contactin associated protein)与β-淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)之间的关系,探讨Caspr抑制β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)产生的机制,揭示Caspr在阿尔茨海默病病理机制中可能发挥的作用。
　　方法:
　　利用免疫荧光技术(Immunofluorescence staining)观察Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠脑内的分布情况;通过免疫印迹法(western blot)观察Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠和同窝野生型小鼠脑内的蛋白表达情况;以稳定表达印第安纳突变的APP的HEK-293细胞(V717F,HEK-APP)和表达内源性APP的CHO细胞为研究对象,利用细胞转染技术将质粒PCMV-Caspr-myc及它的空载体转染进细胞中,通过免疫印迹法观察细胞内APP的蛋白表达情况,并利用实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)的方法检测APP的mRNA表达情况;利用免疫荧光技术观察Caspr和APP在细胞中和C57BL/6J成年小鼠(雄性)大脑皮层中的共定位情况;用免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)研究Caspr和APP的相互作用关系;将质粒PCMV-Caspr-myc转染进HEK-APP细胞中,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)研究Caspr对APP的酶切产物Aβ(Aβ40和Aβ42)的影响;用MTT比色法检测转染Caspr后对细胞活性的影响。
　　结果:
　　免疫荧光法显示,在APP/PS1老年痴呆模型小鼠的大脑皮层中,Caspr高度聚集在老年斑周围;Western blot显示,与对照组相比,Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠的大脑皮层中表达增加;Western blot和qPCR结果表明,在HEK-APP和CHO细胞中,过表达Caspr使APP蛋白的表达量下降,但并不影响APP的mRNA水平;通过免疫荧光技术发现,不论是在小鼠大脑皮层还是细胞系中,Caspr和APP都共定位于细胞膜上,并且Co-IP证实它们是有相互作用的;ELISA结果显示,Caspr能抑制APP的酶切产物Aβ(Aβ40和Aβ42)的产生,但是Aβ42/Aβ40的比值不受影响;MTT比色法证实转染Caspr后细胞活性并没有受到明显影响。
　　结论:
　　在APP/PS1模型小鼠皮层中,Caspr表达增加并聚集在老年斑周围。Caspr与APP相互结合,Caspr通过转录后调控机制减少了APP蛋白的表达,并且抑制导致老年斑形成的Aβ的产生。由此,我们的研究发现Caspr参与了阿尔茨海默病病理机制,其有可能是治疗AD的一个新的药物靶点。

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封面

中文摘要

英文摘要

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研究背景

材料和方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠的大脑皮层中有异常表达

2 Caspr对APP表达水平的影响

3 Caspr与APP是有相互作用的

4 过表达Caspr能抑制Aβ的产生

讨论

结论

综述

1 阿尔茨海默病的介绍

2 APP及它的功能：

3 APP的酶切过程

4Aβ

5 临床意义

6 挑战与局限

7 结论

参考文献

中英文对照缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢