基于氧化应激探讨和胃汤对糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞凋亡的影响

摘要

糖尿病具有多种并发症，糖尿病胃轻瘫（diabetic gastroparesis，DGP）就是其中常见的并发症之一，并且对患者的生活质量有非常严重的影响。目前，多种研究发现DGP患者体内多存在高氧化应激状态，并且具有胃平滑肌细胞凋亡的改变，这些因素导致的胃排空功能失调在糖尿病胃轻瘫的发病机制中扮演了十分重要的角色。胃窦平滑肌细胞是胃收缩、排空的直接动力来源，氧化应激导致的胃窦平滑肌细胞的凋亡是胃排空功能失调的重要病理生理基础。目前，现代医学主要是通过促胃肠动力药来改善糖尿病胃轻瘫患者胃排空障碍的症状，但存在着疗效不持久、具有一定副作用等问题。和胃汤（由生地黄、麦冬、玉竹、北沙参、生白术、佛手、莱菔子组成）是导师夏教授的经验方，根据DGP患者胃阴不足、脾气虚弱的病机拟定，在临床上取得了很好的治疗效果，但和胃汤发挥药效具体的作用机制尚不十分明确。课题组在前期研究中发现，该方在促进糖尿病胃轻瘫大鼠胃排空和增加胃血流量方面具有十分重要的作用，同时可通过上调SCF-Kit信号途径增加DGP大鼠胃窦Cajal间质细胞的数量，可以有效改善糖尿病胃轻瘫大鼠的胃起搏功能，具有促进胃动力的作用。但和胃汤能否通过改善机体氧化应激水平，减少胃窦平滑肌细胞的凋亡，从而改善胃排空，仍需进一步验证。 目的: 探讨和胃汤治疗糖尿病胃轻瘫大鼠的靶点，明确是否可通过改善氧化应激状态，减少胃平滑肌细胞的凋亡，从而逆转DGP胃排空障碍，为中药和胃汤多靶点治疗糖尿病胃轻瘫的机制阐明提供实验依据。 方法: 健康清洁级体重201-205g成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病胃轻瘫模型组，模型组按照70mg/kg一次性腹腔注射1％链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病胃轻瘫大鼠模型。造模完成后，将糖尿病胃轻瘫模型组大鼠随机分为三组，分别为模型对照组、和胃汤组和莫沙比利组。然后，按照体重分别予和胃汤组和莫沙比利组等量和胃汤和莫沙比利混悬液灌胃，正常对照组和糖尿病胃轻瘫模型组予等量蒸馏水灌胃。给药结束后，眼球取血，离心分离血浆，检测血浆MDA、SOD含量，行酚红灌胃实验检测胃排空率，留取胃部组织，部分用于TUNEL检测胃窦平滑肌细胞凋亡的情况，部分用于提取蛋白Western blot检测胃窦组织bcl-2蛋白、bax蛋白、HO-1蛋白的表达。 结果: 1、一般情况比较 正常对照组大鼠皮肤完好、毛发柔软有光泽、活泼好动、对外界刺激反应灵敏、精神状态佳。模型组大鼠皮肤出现局部缺损感染溃烂、毛发粗糙晦暗无光泽、不善运动活动度差、对外界刺激反应迟钝、精神差。各给药组大鼠以上这些情况都优于模型组，但与正常对照组比较仍有差距。 2、各组大鼠体重比较 正常对照组大鼠在体重持续增长一段时间后维持稳定;给药前，DGP模型组、和胃汤组和枸橼酸莫沙比利组大鼠之间的体重无明显差异(P＞0.05)。给药结束后，与DGP模型组相比，和胃汤组大鼠体重明显升高（P＜0.05），枸橼酸莫沙比利组大鼠体重也明显升高（P＜0.05）。与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠体重减轻(P＜0.05)。 3、各组大鼠血糖比较 给药结束后，DGP模型组和正常对照组大鼠的血糖与给药前相比无明显变化，DGP模型组大鼠的血糖仍显著高于正常对照组(P＜0.01)。和胃汤组的血糖与给药前相比有明显的下降（P＜0.05），但仍高于正常水平;枸橼酸莫沙比利组大鼠血糖与给药前相比无统计学差异（P＞0.05），仍高于正常对照组的水平。 4、各组大鼠胃排空率比较 与正常对照组相比，DGP模型组大鼠的胃排空障碍十分明显胃排空率显著降低（P＜0.01）。经药物干预后，和胃汤组和枸橼酸莫沙比利组大鼠的胃排空障碍得到部分纠正胃排空率较DGP模型组均有提高(P＜0.05);与枸橼酸莫沙比利组大鼠相比较，和胃汤组大鼠的胃排空率略低于枸橼酸莫沙比利组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。 5、各组大鼠血浆MDA、SOD含量比较 与正常对照组相比，DGP模型组大鼠和药物干预后大鼠血浆中MDA含量明显升高(P＜0.05);与DGP模型组比较，枸橼酸莫沙比利组大鼠与和胃汤组大鼠MDA含量明显都显著降低(P＜0.05);与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠血浆MDA含量明显较低(P＜0.05)。与正常对照组相比，DGP模型组大鼠和给药组大鼠血浆SOD活力显著较低(P＜0.05);与DGP模型组比较，枸橼酸莫沙比利组大鼠与和胃汤组大鼠SOD活力明显较高(P＜0.05);与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠血浆SOD活力明显较高(P＜0.05)。 6、各组大鼠胃窦组织bax、bcl-2、HO-1蛋白含量变化 与正常对照组相比，DGP模型组和给药组大鼠胃窦组织bax蛋白含量均显著升高（P＜0.05）;与DGP模型组比较，给药组bax大鼠胃窦组织蛋白含量明显降低（P＜0.05）;与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠胃窦组织bax蛋白含量较低，但无统计学差异（P＞0.05）。与正常对照组相比，DGP模型组和给药组大鼠胃窦组织bcl-2蛋白含量明显较低(P＜0.05);与DGP模型组比较，给药组大鼠胃窦组织bcl-2蛋白较高（P＜0.05）;与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠胃窦组织bcl-2蛋白含量较高，但无统计学差异（P＞0.05）。与正常对照组相比，DGP模型组和给药组大鼠HO-1蛋白含量均显著升高（P＜0.05）;与DGP模型组比较，给药组大鼠HO-1蛋白含量经药物作用后明显升高（P＜0.05）;与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠HO-1蛋白含量较高，但无统计学差异（P＞0.05）。 7、各组大鼠胃窦平滑肌细胞凋亡情况 正常对照组大鼠胃窦平滑肌组织结构紧密排列整齐细胞凋亡较少，几乎未见。与正常对照组相比，DGP模型组和给药组大鼠胃窦平滑肌组织可见不同程度的结构疏松排列紊乱等改变凋亡细胞数量明显增多（P＜0.05）。与DGP模型组比较，给药组大鼠胃窦平滑肌组织结构有不同程度的改善凋亡细胞明显减少(P＜0.05)。与枸橼酸莫沙比利组相比，和胃汤组大鼠平滑肌凋亡细胞较少，但不具有统计学差异(P＞0.05)。 结论: 实验研究表明和胃汤可显著降低机体氧化损伤的程度，增强机体抗氧化能力，减少机体胃窦平滑肌细胞的凋亡，从而改善胃排空障碍增加胃动力，这可能是其治疗DGP的机制路径之一。

目录

声明

摘要

前言

第一部分理论研究

1．现代医学对糖尿病胃轻瘫的认识、研究与治疗

1．1糖尿病胃轻瘫的发现与诊断

1．2糖尿病胃轻瘫发生的病理生理基础

1．3现代医学对糖尿病胃轻瘫的治疗手段

2．祖国传统医学对糖尿病胃轻瘫的认识

2．1对病名的认识

2．2对病因病机的认识

3．2辨证论治

1．实验所需主要材料

1．1实验动物的选择

1．2实验所需药物

1．3实验所需试剂

1．4主要试剂配制

1．5本次实验所需设备

2．实验方法

2．1糖尿病胃轻瘫大鼠实验动物模型的建立

2．2分组和给药

2．3评价指标和方法

2．4统计方法

3．实验结果

3．1各组大鼠一般情况比较

3．2体重给药前后变化

3．3给药后大鼠血糖检测结果

3．4各组大鼠胃排空率的影响

3．6各组大鼠胃窦bax、bcl-2、HO-1蛋白含量变化

3．7对大鼠胃窦平滑肌细胞凋亡的影响

4．讨论

4．1DGP对大鼠的影响

4．2和胃汤对大鼠胃排空率的影响

4．3和胃汤对大鼠体内氧化应激水平的影响

4．4和胃汤对凋亡相关基因bax、bcl-2表达的影响

4．5和胃汤对DGP大鼠平滑肌细胞凋亡的影响

4．6不足与展望

结论

参考文献

附录

致谢