1.小鼠大脑中PPARγ的表达分布研究；2.非人类灵长类动物RYGB术后肠道重建的研究

摘要

第一部分、小鼠大脑中PPARγ的表达分布研究
　　目的：越来越多的证据表明PPARγ信号通路在中枢神经系统内发挥着重要的作用：PPARγ激动剂可以调节神经元脂肪酸代谢相关与脑损伤相关基因的表达，同时该通路也参与了葡萄糖的中枢控制，摄食行为和能量的体内平衡。研究其中枢神经系统内的表达位点和表达细胞类型将大大有利于我们理解脑损伤修复的机制和中枢控制代谢功能的机制。目前，中枢神经系统内PPARγ的分布和表达水平存在一定的争议，所以本研究旨在全面系统的研究成年小鼠大脑内PPARγ的完整表达。
　　方法：本研究采用多种ISH和组织学技术描绘了PPARγ在成年小鼠大脑内的表达。首先我们使用了标记S35的核糖核酸探针利用放射性ISH初步定位大脑内表达PPARγ的区域。接着我们使用了一种基本没有背景干扰的新技术Chromogenic ISH辨别表达PPARγ细胞。然后我们使用组织化学技术和蛋白印记技术再次评估大脑内PPARγ的免疫活性。下一步使用qPCR技术测定下丘脑中PPARγmRNA的表达。最后我们还使用多重荧光ISH技术进一步定位表达PPARγ的细胞，研究了其与泛神经元标记物Rbof3和脂蛋白脂肪酶Lpl的共表达。
　　结果：经具体测定，PPARγmRNA在整个皮质层，终板下器官，和穹窿下器官内高表达。除此以外，在嗅球、下丘脑的视交叉上核、海马、选择丘脑核、后内侧杏仁核、小脑、脉络丛以及第三脑室内低度至中度表达。在其余部分的脑实质组织中，包括与进食相关的相关下丘脑核群，PPARγ的表达水平非常低，几乎超出了可检测水平。同时，我们还证明了在下丘脑的视交叉上核内PPARγmRNA的表达水平会随着禁食的影响而上调，但在进食反馈相关的丘脑核中PPARγmRNA水平并不会随着禁食或饲喂高脂饲料而变化。我们还使用了双重原位杂交技术进一步证明PPARγ表达在整个脑实质的神经元中。我们在室管膜细胞中也发现了PPARγ的表达，特别是高表达于室管膜血管内终板和穹隆下器，在后者中PPARγ与Lpl广泛共表达。
　　结论：总的来说，我们的实验结果完整的描述了PPARγ在成年小鼠大脑的分布，为理解大脑中脂质代谢提供了新的途径。
　　第二部分、非人类灵长类动物RYGB术后肠道重建的研究
　　目的：目前认为Roux-en-Y胃分流术（RYGB）有减肥和缓解糖尿病的作用。因此，研究 RYGB引起的肠道形态学改变可以使我们更好的理解减肥手术的代谢学作用的机制。目前，所有的实验室研究都是在大鼠身上进行的，所以RYGB是否可以在其他动物模型中引起肠道增生还难以下结论。我们的研究使用了非人类灵长类动物（NHPs）的肥胖模型作为研究对象，使实验结果更易于转化到人类身上。
　　方法：我们的研究对象是恒河猴肥胖模型RYGB术后28天的肠道样本，分别取自9只RYGB手术组和8只假手术组动物。我们系统的研究了RYGB术后肠道的形态学改变，重点讨论了病理性和适应性肠道增生的几个指标。我们主要检测了以下参数：1)肠管横截面的周长；2)肌层以及粘膜厚度,粘膜横截面积；3) Peripherin免疫活性；4)肠道截面Iba1计数；5)杯状细胞计数及胞体大小的测量;6) Ki67阳性率;7)有丝分裂指数。
　　结果：RYGB手术引起了胃-空肠吻合口附近Roux袢肌层的增厚，同时Peripherin免疫活性的增高以及巨噬细胞的浸润提示了组织的损伤和修复。我们没有发现肠道粘膜的增生，这与我们预测的结果不一致。上皮细胞的有丝分裂指数和回肠内L细胞在两组间均无差别，进一步证实了NHP-RYGB模型并未发生粘膜的增生。两个实验组间粘膜组织最大的区别是手术组靠近胃-空肠吻合口处的杯状细胞数的增加。
　　结论：实验结果可以帮助我们理解RYGB手术的代谢学效用以及它的副作用：RYGB术后早期糖尿病症状缓解和体重减轻的原因可能包括术后的食欲不振，肠-脑轴活性和胆汁代谢等改变，但并不伴随着组织的肥大或细胞增殖的加强。

目录

声明

英文缩略词表

第一部分 小鼠大脑中PPARγ的表达分布研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分 非人类灵长类动物RYGB术后肠道重建的研究

前 言

材料与方法

结果

讨 论

参考文献

综述：膝关节后外侧结构的研究进展

附录

致谢