DQ方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中IL-1β、PPARγ及SM-α-actin表达的实验研究

摘要

目的：通过观察DQ方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中IL-1β、PPAR Y及SM-α-actin表达的影响,探讨DQ方抑制AS形成的作用机制. 方法：取8周龄雄性SPF级ApoE-/-小鼠60只,持续高脂饲料喂养,于第4周随机处死4只,取材后组织形态学染色观察发现AS斑块已形成.同时另取同品系(C57BL/6J小鼠)8周龄正常雄性小鼠15只,普通饲料喂养,作为空白对照组,于第4周随机处死1只,取材后组织形态学染色观察发现无AS斑块形成,继续普通饲料喂养.为提高ApoE-/-小鼠造模成功率,造模成功后继续高脂饲料喂养2周后,将剩余的56只ApoE基因敲除AS小鼠模型随机分为4组,每组14只,随机确立为模型组、DQ方高、中、低剂量组,模型组给予生理盐水灌胃,DQ方3组分别给予高、中、低3种浓度的DQ方水煎剂灌胃.连续灌胃30天后,采集血液和主动脉根标本.通过酶联免疫吸附法检测各组血浆脂质水平变化,通过HE染色观察AS斑块的形态,免疫组织化学染色测定AS斑块中IL-1β、PPAR Y及SM-α-actin表达情况,应用SPSS20.0统计软件对实验所得数据进行统计学分析. 结果：(1)空白对照组小鼠主动脉根部血管HE染色结果显示：血管内膜光滑,内膜下无单核巨噬细胞、平滑肌细胞聚集、增生,无脂质条纹及泡沫细胞形成,未见AS斑块形成.(2)与空白对照组比较,模型组和DQ方高、中、低剂量治疗组小鼠主动脉根部血管HE染色均可见成熟的AS斑块形成.(3)模型组、DQ方高、中、低剂量组组间比较粥样硬化斑块总面积大小无明显差异,P＞0.05;而与模型组比较,DQ方中、低剂量治疗组主动脉根部斑块内的细胞外脂质面积占斑块总面积百分比明显降低,P＜0.05,差异有统计学意义;DQ方高剂量组与模型组比较,细胞外脂质面积占斑块总面积百分比无明显差别,P＞0.05;而DQ方中、低剂量组组间比较,细胞外脂质面积占斑块总面积百分比无明显差别,P＞0.05.(4)与模型组比较,DQ方治疗组斑块内IL-1β表达明显下降,P＜0.05,治疗组组间比较无差异,P＞0.05.(5)与模型组比较,DQ方治疗组斑块内PPARγ表达明显增强,P＜0.05,治疗组组间比较无差异,P＞0.05.(6)与模型组比较,DQ方治疗组斑块内SM-α-actin表达增强,P＜0.05,治疗组组间比较无差异,P＞0.05. 结论：(1)DQ方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化中IL-1β的表达有明显的抑制作用,而对PPARγ和SM-α-actin的表达有明显的增强作用,从而表现出了明显的抗动脉粥样硬化形成的作用.(2)以祛痰、化瘀、解毒为治法的DQ方疗效确切,证明了动脉粥样硬化中医“痰瘀毒”理论的科学性.