抗戾饮对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的实验研究

摘要

严重急性呼吸综合征(SARS)是由新型冠状病毒引起的一种发病急、传播快、病死率高的呼吸道传染病，曾在世界上32个国家和地区流行，给人类造成巨大的经济损失，虽然目前已成功地控制了SARS，但仍然面临病毒是否变异及再次侵袭人类的挑战。 流行性感冒(流感)是发病率很高、有一定病死率的家喻户晓的疾病，但人们包括医疗工作者对其重视不够。20世纪以来全球已有4次流感大流行夺去几千万人的生命，死亡人数超过第一、二次世界大战死亡人数的总和。 禽流行性感冒(禽流感)在禽类中流行已有超过100年的历史，可累及各种家禽与野生禽类，也累及少数哺乳动物。但直到1997年5月才在我国香港发现首例人类直接感染禽流感病毒。目前已经发现能使人类致病的禽流感病毒有H5N1、H9N2、H7N7、H7N3等血清型，它们都属于甲型流感病毒，感染H5N1者有50％左右发生肺炎，病死率30％左右，超过SARS，今年我国已发现数例因禽流感致人死亡的个案。值得庆幸的是，目前尚没有人类间传播禽流感的证据，致病性强的病毒如H5N1型一旦获得人传人的能力，其结果的严重性可能不逊于SARS带来的威胁。 SARS冠状病毒、禽流感病毒和流感病毒都是通过呼吸道侵入人体引起呼吸道和(或)全身感染的病毒。面对呼吸道病毒感染逐渐增多、传染性逐渐增强、病情逐渐加重的趋势，如何寻找有效的预防和治疗对策，减轻呼吸道病毒感染造成的损害，是中西医学者共同面临的挑战。 一、文献研究SARS是由变异的冠状病毒(SARS-CoV)感染所致。冠状病毒(CoV)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒，在分类上属于冠状病毒科，冠状病毒属。在SARS的发病过程中，SARS-CoV病毒本身不是决定性的因素，SARS-CoV侵入人体导致免疫功能失调才是发病的主要因素。SARS-CoV的靶器官主要是肺脏和免疫系统。一方面既可以引起机体的免疫反应对抗SARS-CoV，另一方面也可以造成宿主免疫抑制或免疫损伤，主要与以下环节有关。(1)人体非特异性免疫细胞反应；(2)T细胞免疫失衡；(3)免疫反应过强和自身免疫反应；(4)细胞因子如TNF-α、IL-2、IL-6的参与和细胞调亡。 流行性感冒病毒(influenzavirus)简称流感病毒，属于正粘病毒科，为分节段的单负股RNA病毒。根据核蛋白和基质蛋白抗原性及基因特征的差异，流感病毒可分为甲型(A)、乙型(B)、丙型(C)三种。同型流感病毒又根据血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性不同分为若干亚型，甲型流感病毒的HA抗原有15个亚型(H1～H15)，其中H1～H3与人流感病毒相关；NA抗原有9个亚型(N1～N9)，其中仅N1和N2是人流感病毒所特有。感染禽类的甲型流感病毒即称为禽流感病毒(AIV)，由H5和H7亚型毒株(以H5N1和H7N7为代表)所引起的禽类疾病称为高致病性禽流感。通过对流感病毒感染机制的研究发现，呼吸道抗原呈递细胞和CD4+、CD8+T细胞及相关的细胞因子的产生在病变发生发展中起着关键作用，病毒感染后可刺激单核细胞、巨噬细胞、白细胞等分泌3种细胞因子：趋化因子(如IP-10)、炎性因子(如HIL-6、IL-18)、TNF-α，进一步诱导免疫细胞聚集，而导致细胞因子调节失控。高致病性AIV突破种属屏障，经呼吸道感染人体后，可在机体内复制、扩散，不仅可以直接损伤组织、细胞，而且可以诱导机体免疫系统产生病理性免疫反应、间接地导致机体组织、细胞产生病理损伤。因此，三种呼吸道病毒的一个共同致病机理是导致机体免疫功能的失衡。 中医将SARS归于“温病”的范畴。病因主要为感受“疫毒时邪”，病机与“湿、热、毒、瘀、虚”等有关。导师彭胜权教授认为，该病可诊断为“风温”，病因为风热夹湿之疫病病邪，病机主要为病邪闭阻肺络，肺气失于宣发与肃降，传变是由表及里。总的治疗原则是谨守病机，或祛风于热外，或渗湿于热下。临床拟抗戾饮方为主加减治疗SARS，取得较好的疗效，临床观察38例，病人退热时间为5天，平均住院18天，明显优于单纯西医治疗。流感的病因为感受时行戾气所致，病机为感受时邪，营卫失和，邪毒入里，肺热壅盛，可有卫、气、营、血传变规律。治疗当辨清表里内外，邪未入里者，当以清解透表为法；邪气内陷入里者，法以清热解毒、透邪外出。 二、实验研究1、实验模型及方法本实验以流感病毒滴鼻造成小鼠病毒性肺炎为模型，采用抗戾饮煎剂进行小鼠体内外试验。体内实验所选指标分别为肺指数、死亡保护率、延长生命率、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、T细胞亚群、吞噬指数α等。将小白鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组(病毒唑组)、抗戾饮大、小剂量组，每组10只。在乙醚轻度麻醉下，用流感病毒液滴鼻感染，在病毒攻击前一天开始给药。共给药4天，然后进行相关指标的检测。 2、实验结果(1)抗戾饮对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的作用结果显示，抗戾饮能降低甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的肺指数值，对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎具有较好的保护作用，且能明显减轻甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的肺组织病变程度。但抗戾饮无毒浓度在体外对甲1型流感病毒FM1株无抑制作用。 (2)抗戾饮对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α的影响 结果显示，流感病毒肺炎小鼠的血浆IL-2及IFN-γ水平降低，而IL-6、TNF-α水平明显升高，提示病毒感染后引起了机体免疫功能的失调。经抗戾饮治疗后，血浆中IL-2、IFN-γ水平均明显升高，说明该药可促进病毒感染小鼠IL-2及IFN-γ的产生。这两种细胞因子均能增强细胞毒性T细胞(CTL)作用，并激活自然杀伤细胞(NK)，而机体内NK细胞、IFN-γ和IL-2相互作用，可形成免疫网络，增强抗病毒和免疫调节作用。结果还显示，经抗戾饮治疗后，血浆中IL-6、TNF-α水平明显降低，这对于减轻机体免疫病理损害具有重要意义。因为IL-6、TNF-α是致炎因子，它们是构成免疫性病理损害的重要因素，阻断TNF-α等的过量产生，可以减轻或清除其对器官的有害作用。据报道在腺病毒感染小鼠模型中，早期浸润阶段的鼠肺及血浆中均检测到较高效价的TNF-α、IL-1、IL-6，提示这些细胞因子在炎症产生过程中具有重要作用。 (3)抗戾饮对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎T淋巴细胞亚群的影响结果显示，流感病毒感染小鼠后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显降低，CD8+显著升高，均为T细胞免疫抑制的表现，可认为是流感病毒感染所致暂时性细胞免疫缺陷，提示细胞免疫参与了流感病毒的感染过程。经抗戾饮治疗后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+升高，CD8+降低，说明抗戾饮具有调节细胞免疫的功能，可能在流感病毒感染中起主要保护作用，从而阻止疾病的发展，促进病变的恢复。且结果还显示抗戾饮能增强小鼠单核吞噬细胞的吞噬功能。 本实验提示，抗戾饮在体外对流感病毒无抑制作用，但体内试验结果表明抗戾饮对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎具有良好的治疗效果。说明抗戾饮不是直接通过抑制或杀灭流感病毒来起作用，而是主要通过改善或调整流感病毒肺炎小鼠的免疫功能，达到减轻流感病毒肺炎的病变程度，从而降低小鼠死亡率。因呼吸道病毒的致病机理有一共同点即引起机体免疫反应失调，据此可推测，抗戾饮治疗SARS的机理可能也是通过调节机体的免疫功能，而不是直接通过抑制或杀灭病毒来起作用，因此抗戾饮治疗呼吸道病毒感染性疾病具有独特的优势和发展前景。

目录

文摘

英文文摘

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引言

第一章文献研究

第二章实验研究

第三章讨论

结语

参考文献

附录

致谢