微小RNA 423-5p调控三叶因子1基因表达及对胃黏膜上皮细胞生物学行为影响

摘要

背景：TFFs是胃肠道黏液细胞分泌的一类小分子多肽，在黏膜损伤、炎症保护及肿瘤发展中具有重要作用，是潜在肿瘤标志物，其表达及调控对胃肠道肿瘤诊治具有重要意义。其中TFF1在黏膜损伤后的上皮修复中扮演着重要的角色，这个修复过程与黏膜上皮细胞的增殖、凋亡以及迁移能力都密切相关。microRNA家族在基因表达调控网络中具有关键作用，影响着多条信号传导通路。课题组前期研究表明，三叶因子1（TFF1）受RNA423-5p（miRNA-423-5p）的负性调控，是其下游靶基因。
　　目的：进一步探索miRNA-423-5p在正常胃黏膜上皮细胞中负性调控TFF1，及其对胃黏膜上皮细胞损伤修复能力的影响。
　　方法：首先通过荧光定量PCR方法检测正常胃黏膜上皮细胞与胃癌细胞株、正常组织与胃癌组织中miRNA-423-5p的差异表达，通过免疫组化以及Western blotting检测正常组织与胃癌组织中TFF1的差异表达。随后，人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中过表达miRNA-423-5p，应用MTT、EdU以及平板集落实验检测细胞增殖能力，应用激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡核皱缩，应用Wound healing划痕、Transwell小室检测细胞迁移能力。
　　结果：miRNA-423-5p在正常胃黏膜上皮细胞和正常组织中低表达，而TFF1在正常胃黏膜上皮细胞和正常组织中高表达，二者表达呈负相关。在GES-1细胞中过表达miRNA-423-5p后，TFF1的表达量下调，并促使胃黏膜细胞的增殖能力增强，而胃黏膜细胞的凋亡和迁移能力受抑制。
　　结论：我们研究证明miRNA-423-5p可能通过负性调节TFF1的方式参与调节正常胃黏膜上皮细胞的增殖、凋亡和迁移能力，进而调控胃黏膜的损伤修复能力。

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第1章 前言

1.1 三叶因子

1.1.1 三叶因子家族（TFFs）

1.1.2 TFFs与黏膜保护修复

1.1.3 三叶因子1（TFF1）结构和分布

1.1.4 TFF1与黏膜保护修复

1.2 miRNA与TFFs表达调控

第2章 材料与方法

2.1实验材料

2.1.1 组织标本

2.1.2 细胞株

2.1.3 引物

2.1.4 主要实验试剂

2.1.5 主要仪器耗材

2.1.6 主要试剂的制备

2.2 实验方法

2.2.1 细胞培养

2.2.2 瞬时转染

2.2.3 RNA提取与RT-PCR

2.2.4 实时荧光定量PCR

2.2.5 Western blot蛋白印迹

2.2.6 HE染色技术

2.2.7 免疫组织化学技术

2.2.8 MTT

2.2.9 EdU

2.2.10 集落形成

2.2.11 划痕实验

2.2.12 Transwell实验

第3章 结果与分析

3.1 miR-423-5p在人正常胃黏膜上皮细胞和正常组织中低表达

3.2 miR-423-5p下调TFF1的表达

3.3 过表达miR-423-5p能够提高细胞的增殖能力

3.4 miR-423-5p能够抑制细胞的凋亡和迁移能力

第4章 讨论和结论

结论

参考文献

综述

致谢

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