高效液相色谱法测定杜仲中主要成分和食品中大豆异黄酮

摘要

高效液相色谱法(HPLC)是在气相色谱法和经典液相色谱法的基础上发展起来的新型分析分离技术。鉴于其快速、准确、灵敏、简便的特点，至今，已在食品工业、环境监测、生物工程、制药工业、石油化工等领域获得广泛的应用。本文由绪论和研究报告两部分组成。绪论部分简单概述了高效液相色谱法、色谱技术方面的进展、高效液相色谱在杜仲有效成分分析中的应用和大豆异黄酮的研究进展。研究报告部分建立了杜仲中绿原酸和芦丁HPLC法测定和食品中大豆异黄酮含量的HPLC法测定，包括：HPLC法测定豆奶粉中四种大豆异黄酮含量；不同豆类中四种大豆异黄酮的HPLC法测定；HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量。
　　 ⑴HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁。建立HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁含量，并对不同产地杜仲中绿原酸和芦丁含量进行测定。采用phenomenex C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，以甲醇-冰醋酸(pH=3.10)(45∶55)为流动相洗脱，体积流量为0.8 mL/min，紫外检测波长为327 nm，采用外标法测定不同产地杜仲中绿原酸和芦丁的含量。绿原酸和芦丁分别在0.1275～24.0000μg/mL(r=0.9996)、0.1250～25.0000μg/mL(r=0.9996)线性关系良好，平均回收率分别为99.23％和97.13％，RSD分别为1.02％和2.98％。本方法简便、快速、灵敏度高、重现性好，为不同产地杜仲质量标准的进一步研究提供了科学依据。
　　 ⑵HPLC法测定豆奶粉中四种大豆异黄酮含量。本文建立了同时测定豆奶粉中四种大豆异黄酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色谱法，同时对从豆奶粉中提取大豆异黄酮的工艺进行了优化。采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪进行测定的色谱条件为：色谱柱为phenomenex C18(150mm×4.6 mm，5.0μm)，采用乙腈-0.2％甲酸为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8 mL/min，检测波长为260 nm。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的线性范围分别是0.74～100.00μg/mL，0.74～200.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，线性关系良好；加样回收率(n=9)分别为100.01％，100.01％，99.48％，99.91％，方法简便、灵敏、准确，适用于豆奶粉中这四种大豆异黄酮成分的含量测定和产品质量控制。从豆奶粉中提取大豆异黄酮的最佳工艺为：用70％的乙醇在60℃条件下超声提取40 min。
　　 ⑶不同豆类中4种大豆异黄酮的HPLC法测定。建立同时测定豆类中大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素四种大豆异黄酮成分含量的高效液相色谱法，色谱柱为phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)，采用流动相乙腈-0.2％甲酸进行梯度洗脱，流速为0.8 mL/min，检测波长为260 nm。探讨了提取黑豆中四种大豆异黄酮的最佳条件，结果显示，70％的乙醇在60℃超声提取40 min，效果最佳。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的线性范围分别是0.74～100.00μg/mL，0.74～400.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，线性关系良好；加样回收率(n=9)分别为99.81％，99.99％，99.49％，99.89％，本方法简便、灵敏、准确，适用于豆类中这四种大豆异黄酮成分的含量测定和产品质量控制。
　　 ⑷HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量。本文建立了同时测定绿豆芽中四种大豆异酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色谱方法，对从绿豆芽中提取四种大豆异黄酮的工艺进行了优化，最佳工艺为：用60％的乙醇在55℃条件下超声提取60 min，料液比为1:12，同时探究了绿豆发芽不同天数四种大豆异黄酮的含量。采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪进行测定的色谱条件为：色谱柱为phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)，采用乙腈-0.2％甲酸为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8 mL/min，检测波长为260 nm。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的线性范围分别是0.74～100.00μg/mL，0.74～200.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，线性关系良好；加样回收率(n=9)分别为99.99％，100.01％，100.07％，99.81％，该方法简便、灵敏、准确，为日常生活中绿豆芽的最佳食用时间提供了科学依据。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1高效液相色谱概述

1.1高效液相色谱法发展简史

1.2高效液相色谱分离原理

1.3高效液相色谱的分类

1.4高效液相色谱法的特点

1.5高效液相色谱的应用范围

2色谱技术的研究进展

2.1固定相的研究进展

2.2流动相的研究进展

2.3检测器的研究进展

3高效液相色谱在杜仲有效成分含量测定中的应用

3.1苯丙素类(phenylpropanoids)

3.2木脂素类(lignans)

3.3黄酮类(flavonoids)

3.4环烯醚萜类(iridoids)

3.5萜类化合物(terpenes)

3.6杜仲胶(gutta-percha)

3.7多糖类(polysaccharides)

3.8杜仲抗真菌蛋白(Eucommia Antifungal Protein)

3.9营养成分

4大豆异黄酮(soy isoflavones)的研究进展

4.1大豆异黄酮的化学组成、结构及在体内的代谢

4.2大豆异黄酮对人体的生理功能及作用

第二章 研究报告

第一节HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁

1实验部分

2结果与讨论

3结论

第二节HPLC法测定豆奶粉中四种大豆异黄酮含量

1实验部分

2结果与分析

3小结

第三节不同豆类中四种大豆异黄酮的HPLC法测定

1实验部分

2结果与分析

3讨论

第四节HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量

1实验部分

2结果与分析

3结论

参考文献

附录：硕士期间发表的论文题录

致谢