蛛网膜下腔出血后不对称二甲基精氨酸(ADMA)的表达水平及与脑血管痉挛的相关性研究

摘要

研究背景和目的:
　　 蛛网膜下腔出血(SAH)后并发脑血管痉挛(CVS)在临床中发生率较高,是SAH后致死和致残的主要原因之一,严重影响患者的预后,如何预防以及逆转脑血管痉挛是临床亟待解决的重要课题,对改善病人的生活质量意义重大。
　　 脑血管痉挛的研究已有多年历史,近年的基础研究已证实,一些介质在CVS发生机制中起着重要作用,包括亚铁血红蛋白、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、蛋白激酶C(PKC)和激酶ρ等。多数学者逐渐达成共识,认为CVS是多因素多环节共同作用的结果,但触发、维持脑血管痉挛发生、发展进程的因子并未全部为人们所认识。
　　 目前研究表明,脑血管痉挛的发生与出血后蛛网膜下腔内的舒血管物质一氧化氮(NO)的减少密切相关,其水平在出血后呈规律性变化。NO可通过激活cGMP依赖或非cGMP依赖途径引起其它血管活性物质(如ET-1、前列环素)水平的变化,使平滑肌细胞超极化而导致平滑肌细胞舒张。作为细胞间信息交换的重要载体,其参与脑血管舒张活动,对于脑血流调节意义重大。
　　 NO水平下降的原因主要有两方面:一是SAH后红细胞溶解释放的氧合血红蛋白(OxyHb)对NO的“化学沉淀”作用;二为内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)合成NO能力下降。其中后者对NO的生成调控机制更是成为目前的研究热点。
　　 作为内皮细胞产生的eNOS特异性抑制剂,ADMA能竞争性抑制内皮细胞及巨噬细胞NOS活性,阻断NO合成。近年来通过在心血管系统和的。肾脏系统疾病研究中已得到广泛的重视,被公认为一种新的血管内皮功能障碍的预测因子,但迄今为止其在颅内血管性疾病致病机理研究中仍鲜有涉及。本研究旨在观察ADMA在SAH后体液中的表达规律以及与NO水平、基底动脉eNOS表达情况的动态关系,探讨其在脑血管痉挛中的可能作用及机制。
　　 方法:
　　 1、采用穿刺兔枕大池首次枕大池注入自体动脉血,此后48h二次注血的方法,建立兔SAH后CVS模型;
　　 2、将实验动物随机分为正常对照组、假手术组和SAH组;
　　 3、观察模型动物SAH后行为学变化;
　　 4、按照设定的时相点于术后1d、4d、7d行经颅多普勒(TCD)检测基底动脉(BA)血流速度;
　　 5、随机抽取各时相点实验动物行心脏灌注,行基底动脉普通HE染色及电镜检查,明确SAH后基底动脉血管病理及形态学变化;
　　 6、采集各组动物脑脊液(CSF)及静脉血标本,通过酶联免疫法(ELISA)测定相应时相点脑脊液及血浆中不对称二甲基精氨酸(ADMA)水平;
　　 7、按各时相点采集各时相点脑脊液,以硝酸还原法测定脑脊液中NO水平;
　　 8、采用免疫组织化学法(IHC)方法研究SAH后基底动脉内膜组织中eNOS的表达情况。
　　 结果:
　　 1、经皮枕大池穿刺二次注血后可成功建立兔脑血管痉挛动物模型,成功率可达71.9％:
　　 2、SAH组模型动物行为学表现不同于正常对照组与假手术组,出现毛发蓬松及自洁性差,摄食减少,呈头低位蜷缩状,活动明显减少。
　　 3、正常对照组与假手术组实验动物TCD检测基底动脉血流速度无明显差异(P＞0.05),SAH组TCD检测显示血流流速明显高于正常对照组,以二次注血后第4d为最高峰(P＜0.05);
　　 4、HE染色及透射电镜证实SAH后基底动脉血管壁增厚,管腔狭窄,内皮细胞不同程度的变性、肿胀,空泡形成,线粒体固缩;内弹力膜迂曲皱褶或断裂,厚薄不均;中膜增厚,平滑肌细胞(VSMC)排列紊乱。
　　 5、SAH组各时相点血浆ADMA水平表达无明显差异,与对照组和假手术组亦无明显统计学意义(P＞0.05);而SAH组脑脊液中ADMA水平呈规律性改变,以二次注血后4d为最高峰(P＜0.05),与脑血管痉挛时相一致,与基底动脉血流速度正相关,与对照组和假手术组差异明显(P＜0.05)。
　　 6、SAH组各时相点脑脊液NO水平呈规律性变化,以二次注血后4d水平降至最低(P＜0.05),ADMA水平呈显著负相关(P＜0.05);
　　 7、SAH组术后各时相点免疫组化染色结果显示eNOS表达无明显统计学差异(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1、枕大池二次注血法成功建立兔CVS动物模型,其动物行为学较正常对照组有特征性表现;
　　 2、SAH后模型动物基底动脉流速明显增高,呈规律性改变,术后4d能达到最高峰值;
　　 3、SAH后模型动物的基底动脉形态学可发生增厚、狭窄改变,其内膜及平滑肌细胞病理学亦有明显损害性表现;
　　 4、SAH后CSF中ADMA表达水平上升,4d可达到最高峰,而血浆中ADMA变化水平无明显变化趋势;
　　 5、免疫组化显示兔枕大池穿刺二次注血后基底动脉eNOS表达较术前有所下降,但其在术后7d内各时相点表达量无明显变化;
　　 6、SAH后CSF中NO表达水平与CVS密切相关,呈下降趋势,4d可降至最低水平,与CSF中ADMA水平呈负相关,ADMA可能为SAH后引发NO水平下调的重要调控因素。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩写一览表

前言

第一部分 脑血管痉挛动物模型建立与鉴定

材料和方法

结果

讨论

第二部分 不对称二甲基精氨酸(ADMA)在蛛网膜下腔出血(SAH)后的表达研究

引言

材料和方法

结果

讨论

第三部分 蛛网膜下腔出血(SAH)后脑脊液ADMA水平与脑血管痉挛的相关性研究

引言

材料和方法

结果

讨论

致谢

全文结论

照片

参考文献

文献综述 自发性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛发生机制研究及进展

研究生期间主要发表论文