骨髓源性脂肪祖细胞培养及生物学特征研究

摘要

目的：体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型、成脂肪分化能力及相关基因表达方面的差别. 方法：脱臼处死SD大鼠,取骨髓制作细胞悬液,EBM-2培养基差速贴壁法培养第三次贴壁细胞,取3到5代细胞用于实验.流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45以及CDg0表达;STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测过氧化物酶体增殖激活受体γ(Ppaγ),脂肪酸结合蛋白4(Fabp4),脂蛋白脂肪酶(Lpl),CCAAT/增强子结合蛋白α[(Cebpa),葡萄糖转运蛋白4(S1c2a4)以及前脂肪细胞因子1(pread1)mRNA表达. 结果：传代接种培养24h,BMSCs形态上呈宽大、扁平状,而BMAPs大部呈长三角状,接种48h后BMSCs排列更为有序,而BMAPs多交织成网状.BMAP表达CD34、CD44、CD45以及CD90,BMSC仅表达CD44以及CD90.诱导培养后第4天,BMAPs成脂率显著高于BMSCs组(P＜0.01),到第8天,BMAPs与BMSCs组相差更为显著(P＜0.01).在未进行诱导分化前,Cebpa、Ppaγ和Fabp4mRNA,特别是Fabp4mRNA在BMAPs的表达已显著高于BMSCs组(P＜0.01),诱导分化第4、8天,Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4mRNA在BMAPs表达均显著高于在BMSCs的表达(P＜0.01). 结论：本次实验培养的细胞具有干细胞的生物学特性,同时也高表达脂肪分化相关的特异性基因,因此认为实验所培养的细胞可以定义为BMAPs.