骨髓源性脂肪祖细胞培养及生物学特性研究

摘要

目的 体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型特征、成脂肪分化能力以及脂肪分化相关基因表达方面的差异.方法 无菌取1～2月龄雄性SD大鼠的股骨和胫骨骨髓制作细胞悬液,EBM-2(含20％FBS、15 μg/ml ECGs)培养基差速贴壁法培养第3次贴壁细胞,取传代至第3～5代细胞用于实验.流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45及CD90表达;STEMPRO(R) Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测过氧化物酶体增殖激活受体γ(Ppaγ)、脂肪酸结合蛋白4(Fabp4)、脂蛋白脂肪酶(Lpl)、CCAAT增强子结合蛋白α(Cebpa)、葡萄糖转运蛋白4(Slc2a4)及前脂肪细胞因子1(pread1) mRNA表达水平.结果 传代接种培养24 h后,BMSCs形态上呈宽大、扁平状,而BMAPs大部呈长三角状;接种48 h后,BMSCs排列更为有序,而BMAPs多交织成网状.BMAP表达CD34、CD44、CD45及CD90,BMSC表达CD44及CD90,未检测到CD34和CD45表达.诱导培养后第4d,BMAPs成脂率显著高于BMSCs(P＜ 0.01);到第8d,BMAPs成脂率为(87.2±11.67)％,BMSCs成脂率为(18.5±10.2)％,差异具有统计学意义(P＜0.01).诱导分化后第4、8d,Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4 mRNA在BMAPs表达水平均显著高于BMSCs(P＜ 0.01).结论 本实验获得了1种具有干细胞的生物学特性,高表达脂肪分化相关的特异性基因,可高效均质性地分化为脂肪细胞的BMAPs.