心脏营养素-1促进5-氮胞苷诱导脐带间充质干细胞分化为

摘要

目的：观察脐带间充质干细胞(UCMSCS)生长特性及心脏营养素-1(CT-1)是否能促进诱导分化剂5-氮胞苷(5-aza)诱导UCMSCS分化为心肌样细胞,并进行鉴定分析.方法：自健康足月妊娠孕妇脐带分离、纯化UCMSCS,培养后分析细胞生长曲线及流式细胞仪测定细胞生长周期.取第4代UCMSCS分别以普通培养基(A组)、加入含0.1nmol/L心脏营养素-1(CT-1)的培养基(B组)、经10umol/L5-aza诱导后加入普通培养基(C组)及10umol/L 5-aza加入含不同浓度CT-1的培养基D组(包括D1 0.01nmol/L、D2 0.1 nmol/L、D3 1nmol/L)培养.观察细胞形态的变化,并通过免疫细胞化学染色分析分化后的细胞是否表达心肌特异性肌钙蛋白T(cTNT);透射电镜观察分化后细胞的超微结构及有无肌丝、肌束表达.结果：细胞贴壁后逐渐由圆形变为长纤维样,细胞倍增时间为15h,细胞周期分析显示:80.2％处于G0/G1期和19.8％细胞处于S+G2+M期.细胞诱导分化后未观察到自发性搏动的心肌细胞.免疫组化染色示:cTnT阳性率A组2％,B组10％,C组66％,D1组90％、D2组63％、D3组43％.透射电镜结果示A组无肌丝;B组少量幼稚肌丝;C组肌丝明显增多,仍偏幼稚;D组肌丝数量多,清晰,排列整齐,其中以D1组表达率最高.结论：从脐带分离培养的细胞具有UCMSCS的生物学特性.UCMSCS可自发分化为少量心肌样细胞,CT-1可明显促进5-aza诱导UCMSCS分化为心肌样细胞,且以浓度为0.01mmol/L促进作用最明显,随CT-1浓度升高,细胞成熟度增高,但细胞分化率下降.