反相离子对色谱法测定注射用核糖核酸酶解产物中的5'-核苷酸

摘要

注射用核糖核酸能提高机体细胞免疫功能，可用于肝炎、肝硬化等肝脏疾病;癌症辅助治疗以及与免疫功能低下有关的疾病。目的:建立反相离子对色谱法同时测定注射用核糖核酸酶解产物中4种5'-核苷酸的方法,根据核苷酸的含量计算样品中核糖核酸的含量.方法：用蛇毒磷酸二酯酶将样品中的核糖核酸水解为5'-核苷酸,采用岛津VP-ODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相A为甲醇-水(5:95,含20mmol·L-1KH2PO4和1％(v/v)四丁基氢氧化铵(TBAOH)溶液,pH6.5),流动相B为甲醇-水(80:20,含1％(v/v)TBAOH溶液,pH6.5),梯度洗脱,检测波长为254nm.结果：建立的色谱法能将4种核苷酸良好分离,4种核苷酸在0.50～15μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9998、0.9999、0.9999、0.9999.平均回收率(n=6)均在95.1％～106.3％之间,RSD均小于3.5％.结论：该方法专属性好,具有一定的准确性,可用于检测注射用核糖核酸中核糖核酸的含量,测定结果可为注射用核糖核酸的质量研究和评价提供依据.