分光光度法及反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠方法的研究

摘要

硫氰酸钠常作为牛乳中保鲜剂使用，可以有效的延长牛乳采集及运输过程的保质期，但硫氰酸钠是一种有毒化学试剂，其产生的氰根离子易与细胞色素氧化酶中三价铁离子结合，使组织利用氧功能障碍，当人体摄入后，会产生急慢性中毒等一系列症状。2008年卫生部颁布的《食品中可能违法添加的非食用物质名单》第一批已将其列为违禁添加物质，但至今国家并无出台确切的检测标准。本研究根据硫氰酸钠自身结构性质，对已有的分光光度法进行优化，并建立了反相离子对色谱法进行牛乳中硫氰酸钠含量测定。主要研究内容如下:
　　1.优化了分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠的单因素最佳条件。通过对比三氯化铁、硫酸铁铵、硝酸铁三种显色剂的灵敏度确定最佳显色剂。同时对三氯乙酸浓度、冷藏抽提时间、超声辅助提取时间、离心转速的前处理条件及硝酸用量、显色剂用量、稳定剂选择、显色时间的显色条件进行优化，并进行了线性关系考察、最低检出限、精密度、重复性、稳定性、加标回收率、样品验证实验，提高了方法的准确性与灵敏度。结果表明:最佳显色剂为硝酸铁80g/L，三氯乙酸浓度为200g/L，冷藏抽提时间为10min，超声辅助提取时间为10min，离心转速为3000r/min，硝酸用量为2.0mL，显色剂用量为2.0mL，稳定剂为1％阿拉伯树胶1mL，显色时间为15min。此方法在0.0000g/L-0.0500g/L内线性关系良好，线性回归方程为Y=29.897×X+0.0222(r=0.9993)最低检出限为2.2476mg/L，加标回收率为90.1％-103％，RSD为0.556％-2.009％。该方法操作简便，精确度好，适用于中小型企业应用。
　　2.研究并建立了反相离子对色谱法。样品经乙腈进行蛋白质沉淀提取后，上清液过膜待测。此法对进样量、流动相组成比例、柱温、最大吸收波长、流速、流动相pH、离子对试剂浓度影响因素进行筛选，得到反相离子对色谱条件:Eclipse XDB C18柱(150×4.6mm，5μm)为色谱柱，进样量5μL，流动相为甲醇:0.20％氢氧化四丁基铵溶液(v∶v)=30∶70，柱温为35℃，最大吸收波长为210nm，流速为1.2mL/min，8.5％磷酸溶液调pH，流动相pH为5.0，离子对试剂浓度为0.20％氢氧化四丁基铵溶液。上述条件下，该法在0.0000g/L-0.0200g/L呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=1.0×107×X-492.6(r=0.9995)。最低检出限为0.0144mg/L，加标回收率为95％-101％，RSD为1.730％-1.780％。
　　3.对比了分光光度法及反相离子对色谱法的优劣。通过对两种方法灵敏度、最低检出限、精密度、重复性、稳定性、平均加标回收率及样品处理时间、样品检测时间及分析成本的比较，得出后者灵敏度较高，前者与后者最低检出限分别为2.2476mg/L、0.0144mg/L，精密度RSD分别为1.741％、1.499％，重复性RSD分别为1.939％，1.687％，稳定性RSD分别为1.298％，1.547％，平均加标回收率分别为96.4％、98.7％，样品处理时间分别为40min、60min，样品检测时间分别为10s、6.382min，分析成本后者较高。通过抽取市场乳制品进行验证，对比两种方法测定结果相对标准偏差在5％以内。

目录

声明

摘要

1 文献综述

1．1 硫氰酸钠性质、用途及危害

1．1．1 硫氰酸钠性质

1．1．2 硫氰酸钠用途

1．1．3 硫氰酸钠的毒害性

1．2 硫氰酸钠用于牛乳保鲜原理

1．2．1 乳过氧化物酶(LP)与乳过氧化物酶体系(LPS)

1．2．2 乳过氧化物酶体系(LPS)抑菌保鲜

1．3 硫氰酸钠用于牛乳保鲜研究及使用现状

1．3．1 国外研究及使用现状

1．3．2 国内研究现状

1．4 硫氰酸钠常用检测方法

1．4．1 硫氰酸钠的光谱法测定

1．4．2 硫氰酸钠的色谱法测定

1．4．3 硫氰酸钠的电化学方法测定

1．5 立题背景及意义

2 材料与方法

2．1 鲜乳材料

2．2 主要药品试剂

2．3 主要设备和仪器

2．4 研究方法

2．4．1 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠方法建立

2．4．2 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠预处理条件优化

2．4．3 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠检测条件优化

2．4．4 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠方法建立

2．4．5 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠色谱条件优化

2．4．6 两种定量测定方法的方法学评价

3 结果与分析

3．1 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠方法建立与方法学评价

3．1．1 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠预处理条件优化

3．1．2 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠检测条件优化

3．1．3 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠方法的方法学考察

3．2 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠方法建立与方法学评价

3．2．1 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠色谱条件优化

3．2．2 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠方法的方法学评价

3．3 分光光度法与反相离子对色谱法两种测定牛乳中硫氰酸钠方法的对比评价

4 讨论

4．1 分光光度法测定硫氰酸钠的影响因素探讨

4．1．1 蛋白质沉淀剂确定选择

4．1．2 显色稳定性及显色条件的选择

4．2 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠的影响因素探讨

4．3 分光光度法与反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠两种方法的比较

5．结论

5．1 分光光度法测定牛乳中硫氰酸钠方法的条件选择

5．2 反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠方法的研究建立

5．3 分光光度法与反相离子对色谱法测定牛乳中硫氰酸钠的方法比较

参考文献

致谢