鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒双重RT-PCR检测方法的建立

摘要

建立可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒的双重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的双重RT-PCR.优化后的双重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,加ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95℃ 5 min; 95℃ 1 min,54.4℃ 1 min,72℃ 1 min,35个循环;72℃ 10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500 fg和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.建立的双重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.