小鼠胚胎干细胞的分离与克隆

摘要

采用昆白小鼠原代胎儿成纤维细胞饲养层,以高糖DMEM+10％NBS+0.1 mM 2-巯基乙醇+双抗为培养基,抑制分化培养89枚昆白小鼠囊胚,其中有3枚类ES细胞传5代.经体外培养分化实验,该类ES细胞形成简单胚体.部分分化为典型的神经细胞和有节律性收缩的心肌细胞.同时,观察了ES细胞的生长行为.小鼠ES细胞向上生长,集落形似鸟巢状、山丘状和卵圆柱状等.细胞小,核大,细胞排列紧密,界限不清.ES细胞集落推开饲养层细胞.培养4-5 d初次传代.传代后除类ES细胞集落出现外,还观察到滋养层细胞集落、上皮样细胞集落和内皮样细胞集落等.