免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞

摘要

目的使用免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞),为进一步建立BALB/c小鼠ES细胞系打下基础.方法用免疫外科法从45枚BALB/c 小鼠囊胚中分离得到20枚去除滋养层细胞的 ICM,接种在MEF饲养层上,使用DMEM(高糖)+15% FBS+0.1 mmol/Lβ-巯基乙醇+0.01 mmol/L非必需氨基酸+1 000 IU/ml LIF+100 IU/mL青霉素+100 IU/ml链霉素培养液, 17枚形成典型的ICM集落(85.0%),有一枚胚胎传至第10代.用于全胚培养的BALB/c 小鼠胚胎共102枚,使用与免疫外科相同的培养方法,66枚形成典型的ICM集落(64.7%),其中一枚胚胎传至第8代.结果免疫外科法较全胚培养法有利于小鼠ES细胞的分离与克隆;添加LIF(1 000 IU/ml)有利于小鼠ES细胞的分离与传代(P<0.05);0.05% 胰酶+0.008% EDTA是较好的ES细胞消化液,对细胞综合损伤力小,且传代后ES细胞集落形成能力也较高(P<0.05).结论分离得到的ES细胞经形态学观察,AKP染色,体外分化实验,核型分析等证明其具有胚胎干细胞的诸多特性.