复方甘草酸苷对暴发性肝衰竭保护作用的实验和临床研究

摘要

目的：探讨暴发性肝衰竭的发病机理及复方甘草酸苷(SNMC)对暴发性肝衰竭的保护作用和可能机制。方法：(1)用D一氨基半乳糖和脂多糖腹腔注射构建暴发性肝衰竭(FHF)的小鼠模型。观察SNMC对小鼠实验性肝损伤各组血浆谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、胆红素(TBIL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(N0)、内皮素-1(ET-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肝脏病理情况及小鼠存活率的影响；电镜下观察细胞超微结构的改变。(2)将昆明种小鼠70只随机分为A，B，C三组，分别为正常对照组(5只)、模型组(5只)和SNMC保护组(60只)，A组和B组小鼠于给药后6 h全部断颈处死，C组于给药后6h，1d，3d，5d和7d各断颈处死5只，留取肝组织，应用末端转移酶标记技术(TUNE)检测肝细胞原位凋亡的情况：应用免疫组化法分别检测肝组织中Fas，Fas配体(FasL)和天冬氨酸半光氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达。(3)选择2004年3月至2005年3月哈医大一、二院、黑龙江省医院、哈尔滨传染病院住院的暴发性肝衰竭病人(急性、亚急性重型肝炎)，共86人。其中治疗组每天静脉注射SNMC120ml，同时常规保肝支持对症治疗，对照组则仅用保肝支持对症治疗。对比观察两组血浆谷丙转氨酶(ALT)、胆固醇(CHOL)、胆红素(TBIL)、凝血酶原活动度(PTA)、肿瘤坏死因子- α(TNF-α)、一氧化氮(NO ),白细胞介素-6 (IL-6)的变化情况及病情转归。结果:(1) D-氨基半乳糖和脂多糖可以构建暴发性肝坏死模型，SNMC大、中、小剂量组及不同给药时间组在降低酶学指标及血浆TNF- α、N0, ET-1, IL-6水平，改善肝组织的损伤程度方面与模型组比较均有非常显著的差异(P<0. 01)。SNMC大、中、小剂量以小剂量较好，不同给药时间以同时给药较好，但不同剂量和不同给药时间之间无显著意义(P>0. 05 ).模型组和保护组之间的存活率有非常显著的差别(P<0. 01 )。电镜可见典型的肝细胞凋亡，表现随治疗时间的延长明显改善.(2) SNMC治疗组随着SNMC治疗时间的延长，凋亡指数逐渐降低，由6h的32. 3%降至7d的5％(33．2±4．4 vs 26，6±4．7，t=-4．1P<0.01)：Fas及caspase-3在A组有少量表达，Fasl。未见表达。B组Fas，Fasl配体及caspase-3、细胞色素c阳性表达细胞明显增加，C组随治疗时间的延长，表达逐渐减少(80．1±11．3 vs 64．7±10．9，P(0．01：60．9±7．5 vs 43．1±7．8，P0．01；84．0±5．5 vs 72．3±5．2，P(0．01；58．5±3．8 vs 46．3±5．5，P<0．01)。(3)SNMC在降低酶学指标、改善肝功能情况及对有关炎症介质水平变化的影响方面，与对照组比较有非常显著的差异(p<0．01)，且对病人的临床表现及病情转归亦有非常显著的作用(p<0．01)。结论：(1)SNMC对小鼠暴发性肝衰竭有明显的保护作用，可改善D一氨基半乳糖和脂多糖所致的肝细胞病理性凋亡及坏死，并抑制各种因素所介导的炎症反应，从而降低暴发性肝坏死的病死率。(2)肝细胞异常凋亡在小鼠暴发性肝衰竭的发病中具有重要作用，其机理可能是通过Fas／Fasl，系统活化所介导的肝细胞凋亡，细胞色素c和线粒体在肝细胞凋亡中也具有一定作用：同时也证明SNMC对抑制细胞凋亡有一定作用。(3)SNMC对暴发性肝衰竭病人有明显的保护作用，并抑制各种因素所介导的炎症反应，从而减少或缓解肝坏死的并发症，降低病人的病死率。