结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗的构建及免疫原性研究

摘要

目的：构建结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗,并评价其免疫原性.rn 方法：以基因H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv2190c基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv2190c.50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、微卡菌苗(C组)、Ag85A DNA疫苗(D组)和Rv2190c DNA疫苗(E组),每2周肌肉注射1次,共3次,以研究Rv2190c DNA疫苗的免疫原性.最后1次免疫后3周杀死小鼠.用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)水平;应用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-γ的Th1细胞百分比和分泌IL-4的Th2细胞百分比以及Th1/Th2细胞比值.rn 结果：PCR扩增获得长1177bp的Rv2190c基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv2190c经双酶切及DNA测序证明构建成功.E组[(126.03±221.46) pg/ml]IFN-γ水平高于A[(15.69±17.57) pg/ml]、B[(10.23±17.78) pg/ml]、C组[(8.25±23.87) pg/ml](P＜0.05),略高于D[(77.22±153.92) pg/ml]组,但无统计学意义.E组Th1细胞百分比(3.01％±2.07％)显著高于A组(0.19％±0.12％)和B组(0.22％±0.09％)(P＜0.01),但与C组(2.44％±1.17％)、D组(2.56％±0.86％)无统计学差异;Th1/Th2细胞比值E组(1.86±2.03)高于A(0.32±0.19)、B(0.48±0.22)和C组(1.13±0.41),但无统计学意义,显著低于D组(3.47±3.11)(P＜0.05).rn 结论：成功构建了结核分枝杆菌DNA疫苗,并且证明此疫苗有较强的免疫原性,主要刺激Th1型细胞介导的免疫应答.