结核分枝杆菌DNA疫苗的构建及免疫原性研究

摘要

目的：构建结核分枝杆菌Rv1419 DNA疫苗(pVAX1-Rv1419重组质粒),并评价其免疫原性.rn 方法：以基因H37Rv基因组为模板,PCR扩增rv1419基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv1419.50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、微卡菌苗(C组)、Ag85A DNA疫苗(D组)和Rv1419 DNA疫苗(E组),每2周肌肉注射1次,共3次,以研究Rv1419 DNA疫苗的免疫原性.第3次免疫后3周杀死小鼠,通过ELISA方法检测小鼠血清中抗Rv1419的IgG抗体;用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平;应用流式细胞术检测全血单个核细胞内分泌IFN-γ的Th1和IL-4的Th2细胞百分比以及Th1/Th2比值.rn 结果：PCR扩增获得长401bp的rv1419基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv1419经双酶切及DNA测序证明构建成功.E组小鼠特异性抗体IgG高于A组和B组(p＜0.05),与C组无显著性差异.E组IFN-γ水平高于A、B、C组(p＜0.05),低于D组.E组Th1细胞百分比和Th1/Th2细胞比值显著高于A和B组(p＜0.01),但与C、D组无统计学差异.rn 结论：成功构建了结核分枝杆菌DNA疫苗,即pVAX1-Rv1419重组质粒,并且证明此疫苗有较强的免疫原性,主要刺激Th1型细胞介导的免疫应答.