百日咳毒素S1亚单位截短片段在大肠杆菌中的表达纯化与初步应用

摘要

目的：克隆百日咳毒素S1亚单位C端截短片段S146,构建表达重组子,在大肠杆菌中表达并纯化目的蛋白,利用其自制抗体进行包被初步建立特异性检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA方法。方法 PCR扩增得到S146基因产物,将其亚克隆入载体pUC18,通过转化测序,筛选到阳性重组体pUC18-S146,双酶切获得S146编码基因,连接入载体pET16b,转化大肠杆菌BL21<,DE3>,经IPTG.诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定。纯化S146蛋白免疫家兔获得抗血清,经Protein G柱纯化后,作为包被抗体与抗天然百日咳毒素抗体联合特异性检测无细胞百日咳原液中的百日咳毒素。结果 成功表达和纯化S146蛋白,用纯化PTS146片段免疫家兔产生的抗体可特异性识别天然PT;将抗S146抗体与抗天然PT抗体联合组建双抗体夹心ELISA法能够检测天然PT,而与白喉类毒素、破伤风类毒素和FHA无交叉反应,为研制特异性检测试剂,提供一种疫苗的质量控制方法奠定基础。