脱细胞软骨支架材料修复兔关节软骨缺损

摘要

目的 探讨异种异体脱细胞软骨支架材料(acellular cartilage material，ACM)复合同种异体兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone marrow-derived mesenchymal stem cells，rBMSCs)修复兔股骨内髁关节软骨缺损的效果。方法 ①密度梯度离心和差速贴壁法获得原代兔BMSCs．选择第三代BMSCs作为种子细胞;②利用冷冻干燥、胰酶消化和化学去垢剂等方法制备脱细胞软骨支架材料：⑨3月龄新西兰兔股骨内髁制备直径4mm，深3mm关节软骨缺损模型，24只新西兰兔以2个时间段随机分为3组，Ⅰ ACM-BMSCs组：第三代BMSCs 1×106个／mL与ACM于37度5％CO2饱和湿度复合48h：Ⅱ ACM组;Ⅲ空白对照组。④移植6，12周后大体及组织学观察，免疫组化染色观察修复组织Ⅱ型胶原，Wakitani评分评估修复效果。结果①大体观察及组织学观察：6和12周Ⅰ组再生组织与正常关节软骨面平齐，修复部位表面较平整，界限模糊，接近正常软骨。Ⅱ组修复组织表面不平整并有明显下陷，修复组织全层可见成纤维样细胞，深层可见极少数透明软骨样细胞。Ⅲ组未见明显修复，肉芽组织形成伴成纤维样细胞增生;②Wakitani组织学评分可见在不同的时间段Ⅰ组和Ⅱ组均低于Ⅲ组，差异有统计学意义(P<0.05)，Ⅰ组和Ⅱ组间组织学评分统计学无显著差异(P>0.05)．③免疫组织化学：ACM-BMSCs组修复组织的细胞为软骨样细胞，可见柱状排列，周围软骨基质Ⅱ型胶原染色阳性。结论以ACM为支架材料，同种异体BMSCs为种子细胞制备的组织工程化软骨对兔股骨内髁关节软骨缺损有修复作用，形成的新生软骨为透明软骨样组织。