siRNA沉默VASP对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响

摘要

目的：乳腺癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，近年来，我国妇女乳腺癌发病率呈急剧上升趋势，成为城市中死亡率上升最快的癌症。而乳腺癌的远处转移是患者死亡的主要原因，因此控制癌细胞的转移在乳腺癌的治疗中已备受关注。然而，肿瘤细胞的转移是一个复杂的过程，目前，人们认为细胞迁移的过程包括leading edge处的质膜突起或片状伪足的延伸、细胞前端新粘附点的形成、胞体的收缩和细胞尾部的去粘附。其中，leading edge处的质膜突起或片状伪足的延伸是细胞迁移的起始步骤和主要驱动力，而迁移细胞leading edge处的质膜突起或片状伪足的延伸是由肌动蛋白的聚合作用来驱动的。VASP（Vasodilator-stimulated phosphoprotein）即血管扩张刺激磷蛋白，是一种特异性的细胞骨架相关蛋白，与细胞骨架调节有关的各种细胞行为如细胞粘附和细胞运动密切相关。RNA干预作为目前研究较多的一门新兴技术，能更高效的诱导内源靶基因的mRNA降解，达到阻止基因表达的目的。本实验通过小干扰RNA片段抑制人乳腺癌MCF-7细胞中VASP的表达水平，探讨VASP对人乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响。rn 方法：采用化学方法合成针对VASP（Genbank accession number：BC038224）靶基因的三对siRNA片段（VASP-942、VASP-1002、VASP-1024）和阴性对照siRNA。实验分为四组：阴性对照siRNA组、VASP-942、VASP-1002、VASP-1024siRNA组。脂质体转染VASP-siRNAs（942、1002、1024），阴性对照siRNA于MCF-7细胞48h，使其终浓度为200μM。通过半定量RT-PCR和Western blotting分别检测VASP mRNA和蛋白表达水平，细胞损伤修复实验检测转染细胞的迁移能力。rn 结果：rn 1）VASP-942siRNA组的VASPmRNA表达水平下调，与阴性对照组比有显著差异。rn 2）VASP-942siRNA组的VASP蛋白表达水平下调到阴性对照组的47%，两者有显著差异。rn 3）VASP-942siRNA组MCF-7细胞移动的平均速度为0.692μm/h，而阴性对照组细胞移动的平均速度为1.008μm/h，两者差异显著（p<0.05）。rn 结论：VASP-942siRNA能明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞中VASP的mRNA和蛋白表达水平，并进而抑制人乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力，提示VASP可能在乳腺癌转移中发挥着重要作用。