葡萄白藜芦醇合酶基因cDNA克隆及原核表达

摘要

从东北山葡萄中提取总RNA，采用RT-PCR方法，克隆到了白藜芦醇合酶(ResveratrolSynthase，简称RS)基因的全长cDNA。将测序结果进行分析、拼接，用Primer Premier5.0软件将序列转化为氨基酸序列，与GenBank中已登录的圆叶葡萄、华东葡萄、河南毛葡萄、河岸葡萄、酿酒葡萄进行同属RS基因编码的氨基酸同源性比对，与GenBank中已登录的羊蹄甲、花生、虎杖、大黄进行不同属RS基因编码的氨基酸进行同源性比对，结果表明：东北山葡萄与其它葡萄的RS基因编码的氨基酸同源性达到97％以上;东北山葡萄与其它属的RS基因编码的氨基酸同源性达到64％以上。生物信息学分析表明，该蛋白分子量为43kD，等电点pI=6.2，包含392个氨基酸残基。rn 将RS cDNA片段插入到表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-RS，转化大肠杆菌BL21，SDS-PAGE电泳检测结果表明，以30℃、0.5 mmol.L-1IPTG诱导4小时时该基因表达效果最好，诱导产物为一个约43kD的蛋白，为进一步纯化和鉴定目的蛋白提供了基础。