2种山葡萄白藜芦醇合酶基因的克隆与序列分析

摘要

目的：白藜芦醇合酶(resveratrol synthetic enzyme，RS)是植物白藜芦醇合成途径中的关键酶，为获得高效表达的白藜芦醇合酶基因，方法：利用已知的葡萄RS基因(AF274281)序列设计并合成一对引物，以2种不同来源的山葡萄叶片基因组DNA为模板，PCR扩增包含RS完整基因在内的一段序列；在此基础上采用悬挂延伸PCR法分别克隆目的基因。结果：测序与序列分析表明，RS全长基因片段大小均为1 536bp，其中包含一个内含子及两个外显子，同源性比较，其内含子碱基变化较大。悬挂延伸PCR法克隆获得的目的基因，开放读码框分别为1 170 bp和1 182bp，编码389/392个氨基酸残基，命名为CNRS1、CNRS3。同源性比较发现，CNRS1、CNRS3与已知葡萄RS基因序列的同源性分别为98％、97.5％。结论：以上结果证实CNRS1、CNRS3属葡萄RS基因家族成员，为今后进一步对该基因的研究与利用打下了基础。