倍性鉴定

摘要： 多倍体在生物界广泛存在,常见于高等植物中,亦是植物多倍化研究的热点。多倍化是新物种形成的驱动力之一,在物种进化、环境适应中发挥重要作用;同时,其在克服远缘杂交种不育性,创制不亲和材料中间亲本及加速培育新种质中存在诸多潜在应用价值。多倍体植株在茎粗、叶大、花大、果实大等生物学特性中表现一定优势,鉴于多倍化育种技术可在短时间内创制新种质材料,其在果树育种中发挥重要作用,笔者从以下几个方面进行综述:多倍体的进化及应用上的意义;多倍体产生途径,包括果树自然和人工诱变果树多倍体;多倍体鉴定方法,包括形态学鉴定、染色体计数鉴定、流式细胞术法鉴定及分子标记技术鉴定;多倍体对果树的影响,包括多倍化对果树表型、抗逆性、育性及组学水平的影响,同时探讨果树倍性研究中普遍存在的嵌合体现象和诱变剂的毒害问题,并对未来研究进行展望,以期为果树的多倍化育种研究提供一定的借鉴和参考。

摘要： 以黄连木萌动种子为试验材料,用不同质量分数秋水仙素进行诱变处理,通过形态学、细胞学和流式细胞仪对诱变株进行了倍性鉴定。结果表明:随着处理溶液质量分数的增加和处理时间的延长,种子出苗率和成苗率逐渐降低,诱导率逐渐升高,质量分数为0.3%的秋水仙素浸泡48 h诱导效果最佳,其诱导率可达38.10%。诱变株呈现矮化、增粗、节间缩短、叶色加深、叶片增大增厚的多倍化特征,部分诱变株的染色体数量和细胞DNA相对含量均比二倍体植株增加了1倍。形态学观察发现,四倍体诱变株的叶片下表皮气孔长和宽分别增加了38.19%和61.38%,气孔数目减少了47.24%,叶片叶绿素质量分数增加了81.43%,光合速率提高了162.09%。

摘要： 为鉴定不同猕猴桃种质的染色体倍性,利用流式细胞仪对收集于广西桂林的50份猕猴桃种质材料进行倍性鉴定,其中有16份种质倍性为首次鉴定,并分析倍性与果实主要性状的相关性。结果表明:50份材料中共鉴定出二倍体猕猴桃19份,四倍体13份,六倍体18份,其中中华猕猴桃二倍体和四倍体较多,果肉颜色多红色或黄色,果面多被茸毛或光滑无毛;美味猕猴桃六倍体较多,果肉一般为绿色,多被长茸毛;美味猕猴桃的果实普遍大于中华猕猴桃。野生物种多为二倍体,绿色果肉,短茸毛至无毛。研究丰富了猕猴桃种的倍性数据库,为猕猴桃的育种和资源开发提供参考资料。

摘要： 染色体组倍性鉴定是马铃薯种质资源评价的重要内容,流式细胞仪能够快速、准确地对细胞核DNA含量进行测定,从而广泛用于检测植物染色体组倍性.建立适于马铃薯倍性鉴定的高通量流式细胞术体系,对马铃薯育种工作提供依据.以20份马铃薯合作88孤雌诱导后代为材料,用液氮研磨法制备叶片细胞核悬液,并将其与传统刀片切碎法制备的细胞核悬液进行比较,对已知四倍体马铃薯合作88和二倍体马铃薯IVP101进行染色体倍性测定,结果发现这两种方法在倍性测定结果之间无明显差异,但是液氮研磨法操作简单、耗时少.基于液氮研磨法的流式细胞术可快速、准确检测其倍性.另外,在液氮研磨法中,对细胞核悬液染色时间的长短(从15 min到12 h)并不会影响倍性测定结果,从而方便研究人员在实际操作中灵活选择染色时间.

摘要： 禾本科牧草作为家畜的重要饲草,在畜牧业和草原生态系统中有着不可替代的作用.染色体加倍是培育优良牧草品种的主要技术措施之一,目前已有大量研究致力于人工诱导禾本科牧草染色体加倍,目的在于最大限度地提高其产量、营养价值、抗逆性以及杂交种育性恢复等性状.因此,本文基于中国知网(China national knowledge internet,CNKI)和Web of Science核心合集数据库(WOS),对植物染色体加倍发展趋势进行系统分析,并对人工诱导禾本科牧草染色体加倍时以秋水仙素作为诱导剂这一化学方法进行了详细梳理,同时涵盖了多倍体的鉴定方法和实际应用,以期为禾本科牧草倍性育种工作提供理论参考.

摘要： 本文通过简述多倍体植物概况,分析多倍体的产生途径,总结多倍体的鉴定方法,分析各种方法的优缺点,以获得苹果多倍体种质在生产上推广应用,推动烟台市农业增效、农民增收和发展现代高效农业、助力新旧动能转换.

摘要： 软枣猕猴桃倍性鉴定技术是其倍性育种的基础,并对其遗传学评价以及开发利用具有重要价值.该研究以已知倍性的猕猴桃品种'红阳'(2n=58)为对照,以不同软枣猕猴桃新生嫩叶为试材,利用流式细胞仪进行倍性鉴定.结果表明:采用流式细胞技术,获得主峰清晰、杂峰少,方法准确易操作,是一种高效鉴定软枣猕猴桃倍性的方法.

摘要： [目的]通过组织培养,使四倍体和六倍体的混倍体参薯再生植株倍性和性状产生分离,以期获得倍性和性状均稳定的株系.[方法]采用组织培养获得再生植株;通过染色体制片方法鉴定其倍性;再通过田间繁殖,鉴定再生植株染色体倍性和性状的稳定性.[结果](1)2,4-D是诱导参薯愈伤组织形成的关键因子,愈伤组织诱导率达51.67％;椰子汁能有效促进愈伤组织的生长发育,分化率达46.67％.(2)混倍体参薯经组织培养后,再生植株出现了性状和倍性的分离.再生植株四倍体、六倍体和混倍体的获得率分别为28.33％、20.00％和56.67％.(3)单一倍性的再生植株经繁殖后,子代之间的生物学性状和染色体数目稳定一致.不同再生植株的染色体倍性和生物学性状有所差异.[结论]利用组织培养分离纯化混倍体,是创建稳定植株和种质资源的有效方法.通过组织培养,从混倍体参薯中分离出多组生物学性状稳定的四倍体或六倍体株系,为参薯品种选育提供了新种质.

摘要： 利用秋水仙素对甜荞种子多倍体诱导处理,探讨0.1％(A1)、0.2％(A2)两种浓度的秋水仙素和6(B1)、9(B2)、12(B3)、18(B4)、24 h(B5)浸泡处理时间下最优的诱导加倍组合,通过种子萌发后C1代植株DNA鉴定选育出多倍体甜荞植株,对其形态学特征、气孔和保卫细胞特征进行鉴定.结果表明,以A2 B3处理组合的诱导率最高,为80％;其次是A1 B5、A2 B5的处理组合,诱导率分别为75％和50％.经流式细胞仪对C1群体DNA进行鉴定,从成苗的193个植株中共获得65株变异植株,其中36株为四倍体,29株为非整倍体.形态学鉴定发现,与二倍体对照荞麦相比,多倍体甜荞的株高降低、茎粗增加、分枝减少;根系粗壮、须根增多;叶片表面皱缩粗糙、叶色加深;花器官变大、颜色更加鲜艳;种子变大且种皮外表呈灰色花纹.叶片下表皮气孔面积变大,四倍体、非整倍体的长度分别增加了11.44、20.52μm,且单位面积气孔数目分别减少了9个、10个.

摘要： 高丹草(Sorghum bicolor×S.sudanense)是一种优质牧草.为获得高丹草多倍体材料,试验以秋水仙素为诱导剂,以引进的高丹草品种'大卡'为供试材料,应用浸种法和滴生长点法分别对高丹草种子和幼苗生长点进行了处理,对获得的诱变后代采用表型测定、根尖染色体法和表皮气孔保卫细胞法相结合的方式,通过逐代鉴定筛选,最终在M5代获得了稳定遗传的两份高丹草多倍体材料.本研究可为高丹草多倍体诱导相关研究提供参考;同时创制的两份多倍体材料除可作为种质资源使用外,经进一步培育后有望作为品种在生产上推广应用.

摘要： 为建立快速、准确的大花三色堇与角堇及其杂交后代的倍性鉴定方法,本文以11份角堇和大花三色堇自交系及其杂交产生的30份F1代为试材,采用流式细胞术法对其进行了倍性鉴定,并采用染色体压片法对检测结果进行了抽样验证.结果表明,将角堇作为流式细胞术的对照,可基本判断大花三色堇及其杂交后代的倍性,为大花三色堇杂交育种和倍性育种提供参考.

摘要： 以南瓜胚囊再生植株为材料,采用形态学鉴定法、根尖染色体计数法和气孔保卫细胞叶绿体计数法3种方法对46株南瓜胚囊再生植株的倍性进行鉴定.结果表明:在46株再生植株中,有12株再生植株生长势弱、叶片较薄、叶脉不明显、分枝少、根系不发达,与其他倍性植株在形态上有明显差异;进一步进行染色体计数后,发现仅有7株再生植株的染色体数n=x=22,7株单倍体植株的保卫细胞叶绿体数的平均值为4.28个,正常二倍体组培苗的平均叶绿体数目为8.37个.说明形态学鉴定法只能作为倍性鉴定的一种辅助方法,而染色体计数法虽直接、准确,但是效率低,气孔保卫细胞叶绿体计数法高效、简便.

摘要： 石斛兰属(Dendrobium)是兰科最大的属之一,己发现原生种1000多个,广泛分布亚洲热带和亚热带地区至大洋洲,我国约有76种.按花序着生的类型,分春石斛兰和秋石斛兰两种.春石斛兰为节生花序类型,花期在2-6月,花色鲜艳,花期长,具芳香气味,主要用作盆栽,在国际花卉市场上占有重要地位.本研究利用流式细胞仪对引进的57个日本春石斛兰品种和20个国产原生种进行了染色体倍性鉴定，并利用染色体制片方法对22个种(品种)进行了检测验证。结果表明，除美花石斛和球花石斛由于出现多个峰或峰发生漂移无法确定其倍性外，其它75个种(品种)都出现了明显的主峰，能够确定出倍性。

摘要： 以热带睡莲'蓝美人'(Nymphaea'Blue Beauty')种子为材料,以不同处理浓度和时间梯度的秋水仙素进行诱导,并通过形态学观察与根尖染色体计数进行倍性鉴定.结果表明:以0.25％秋水仙素处理12h获得的诱导效果最佳,存活率为88％,诱导率达100％.对变异植株根尖进行根尖染色体压片检查表明,变异植株根尖细胞染色体数为2n=4x=56,为四倍体.未变异的植株染色体为2n=2x=28,为二倍体.四倍体植株比二倍体植株具有植株粗壮,针状叶的叶片宽厚、叶色浓绿,根短而粗,可作为加倍的初期有效判断指标.适宜浓度的获得为睡莲多倍体诱导研究提供了参考,睡莲多倍体株系的获得为其新品种选育提供性状优良的杂交亲本.

摘要： 以'红颜'(八倍体)、二倍体野生草莓、四倍体野生草莓为试材,通过改进优化提取液、改良细胞核悬浮液过滤方式等,应用流式细胞仪对不同草莓资源的组培苗和露地苗进行倍性鉴定.结果表明,细胞核悬液过滤方式采用制备方法Ⅱ(70μm过滤器+40μm过滤器的二步过滤法)、优化提取液为OTTOⅠ缓冲液、OTTOⅡ为缓冲液,可有效鉴定出草莓资源的倍性.采用优化后的方法进行草莓细胞核悬液经流式细胞仪检测分析,其直方图主峰窄而集中、CV值为5.43％.

摘要： 本文分别以二倍体结球甘蓝与四倍体人工合成油菜为亲本进行正反杂交,采用MS和B5培养基对杂交子房和胚珠进行胚挽救实验,研究不同取样时期和培养基对胚珠得胚率的影响,并采用流式细胞仪法对杂交后代幼苗倍性进行初步鉴定.结果表明:胚珠培养优于子房培养.以人工合成油菜为母本的多个杂交组合获得57株杂种苗,反交组合仅获得了7株杂种苗.子房培养取材时间以蕾期授粉后第10天为宜,以B1(6-BA1.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+CH+CA)培养基中的子房出苗最好(6株).胚珠培养适宜取材时间为蕾期授粉后第11天,以M1(6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+CH+CA)培养基中的得胚率最高(13.55％).胚挽救获得的64株幼苗有57株为三倍体植株(89.06％).

摘要： 单倍体培养技术是瓜类作物育种中一种重要的辅助育种手段.对影响瓜类作物单倍体育种技术的一些主要因素,如基因型、发育时期、培养基、碳源、生长调节剂、活性炭、三十烷醇、低温预处理和热击处理等研究进展进行了综述,同时也概括倍性鉴定与植株再生技术,并针对瓜类作物单倍体育种技术中存在的问题提出了今后的研究方向.

摘要： 目的：为了建立人工培育中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)二倍体雄蜂的方法.方法：人工培育蜂王,用CO2麻醉处女王,促使处女蜂王产未受精卵,待雄蜂性成熟,通过人工授精使蜂王与它们的儿子回交;蜂王产卵后,人工饲喂幼虫食物,并采用流式细胞仪测定羽化雄蜂的细胞倍性.结果：经过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测,发现大部分为二倍体雄蜂.

摘要： 采用分光光度法测定、比较分析了9组材料纯合二倍体及其人工诱变的同源四倍体小型西瓜的番茄红素、瓜氨酸含量.结果表明:与对应的二倍体小型西瓜相比,同源四倍体小型西瓜番茄红素、瓜氨酸含量都随着倍性的增加而增加,其中番茄红素增幅最高的为PI4,增幅达28.27％;瓜氨酸含量增幅最高的为P18,增幅达19.12％.番茄红素含量为大红瓤＞红瓤＞粉红瓤＞黄瓤,与其瓤色有关.瓜氨酸含量为黄瓤＞大红瓤=红瓤＞粉红瓤,大红瓤与红瓤之间差异不显著,其它各个材料之间都达显著水平.

摘要： 采用分光光度法测定、比较分析了9组材料纯合二倍体及其人工诱变的同源四倍体小型西瓜的番茄红素、瓜氨酸含量.结果表明:与对应的二倍体小型西瓜相比,同源四倍体小型西瓜番茄红素、瓜氨酸含量都随着倍性的增加而增加,其中番茄红素增幅最高的为PI4,增幅达28.27％;瓜氨酸含量增幅最高的为P18,增幅达19.12％.番茄红素含量为大红瓤＞红瓤＞粉红瓤＞黄瓤,与其瓤色有关.瓜氨酸含量为黄瓤＞大红瓤=红瓤＞粉红瓤,大红瓤与红瓤之间差异不显著,其它各个材料之间都达显著水平.

摘要： 本发明公开了一种利用胚挽救获得三倍体葡萄及倍性早期鉴定的育种技术，其目的就是采用胚挽救技术培育三倍体葡萄，克服葡萄二倍体与四倍体常规育种杂交胚早期败育的缺陷，获得杂种幼苗，再结合流式细胞术、去壁低渗法染色体计数对所得杂种后代进行倍性的早期鉴定，提高三倍体葡萄的育种效率，加速了三倍体葡萄品种的选育进程，将为培育大粒无核葡萄品种开创广阔的前景。

摘要： 本发明属于分子生物学领域，具体涉及一个适用于棉花A基因组和包含A亚基因组棉种(Gossypium)的鉴别。使用本发明的特异PCR引物，根据其PCR产物是否能凝胶成像，可区分、鉴别A(亚)基因组棉种与B，C，D，E，F，G，K棉种。本发明所述引物仅在A组二倍体基因组棉种和四倍体棉种中产生特异条带，在B、C、D、E、F、G、K组的14个二倍体棉种无产物。

摘要： 本发明公开了一种利用胚挽救获得三倍体葡萄及倍性早期鉴定的育种技术，其目的就是采用胚挽救技术培育三倍体葡萄，克服葡萄二倍体与四倍体常规育种杂交胚早期败育的缺陷，获得杂种幼苗，再结合流式细胞术、去壁低渗法染色体计数对所得杂种后代进行倍性的早期鉴定，提高三倍体葡萄的育种效率，加速了三倍体葡萄品种的选育进程，将为培育大粒无核葡萄品种开创广阔的前景。

摘要： 本发明涉及一种利用秋水仙素诱导小报春(Primula forbesii)获得四倍体的方法。该方法是小报春种子用清水浸泡24h后，在黑暗条件下，利用浓度范围0.5～1.5g/l的秋水仙素溶液对小报春种子进行36～48h的浸泡处理，控制温度20±2°C。通过形态学及细胞学染色体等方法进行倍性早期鉴定方法本发明采用秋水仙素诱导小报春四倍体的方法，成功率较高，效果最佳，同时，四倍体小报春F1代植株可以保持其种性稳定遗传；与二倍体小报春比较，小报春四倍体变异植株表现出花朵增大，香味浓，花葶粗壮等优良性状特征，提高了观赏价值，实现了利用秋水仙素诱导小报春多倍体的方法，创造了新种质。

摘要： 本发明属于分子生物学领域，具体涉及一个适用于棉花A基因组和包含A亚基因组棉种(Gossypium)的鉴别。使用本发明的特异PCR引物，根据其PCR产物是否能凝胶成像，可区分、鉴别A(亚)基因组棉种与B，C，D，E，F，G，K棉种。本发明所述引物仅在A组二倍体基因组棉种和四倍体棉种中产生特异条带，在B、C、D、E、F、G、K组的14个二倍体棉种无产物。

摘要： 本发明公开了一种基于倍性分析仪快速鉴定仔鱼倍性的方法。包括仔鱼肌肉细胞悬浊液的抽吸、过滤。染色和用倍性分析仪上机检测等步骤。本发明最大的改进在于将鱼类倍性批量鉴定阶段从幼鱼期的全肌肉研磨改为初孵仔鱼微量肌肉细胞的分离，从而获得快速高效的倍性鉴定效果。应用此法可快速鉴定不同种类仔鱼倍性，大大缩短倍性操控实验的周期，并且还可更准确地评估倍性操控实验。本发明制样简单、检测快速、具有稳定的高检出率和灵敏度。

摘要： 本发明涉及一种三倍体牡蛎倍性鉴定及其遗传物质来源的分析方法，属于分子细胞遗传学领域，所述方法包括：1)单个个体三倍体牡蛎中期分裂相染色体标本制备；2)体细胞染色体众数分析；3)多重特异性PCR；4)三倍体牡蛎遗传物质来源分析；本发明简化了牡蛎体细胞染色体制备步骤，缩短了分析时间，整个流程仅需2～3小时。制备的染色体制片干净明晰；多重特异性PCR的分子鉴定，能进一步确定三倍体牡蛎的四倍体父本和二倍体母本，在染色体和分子水平上对三倍体牡蛎进行遗传物质组成、染色体倍性、亲贝鉴定等分析，染色体制备及分析与多重特异性PCR的分子鉴定可结合使用，有助于鉴别三倍体亲本来源，从而评判三倍体苗种的质量。

摘要： 本发明涉及蔬菜化控领域，提供了一种提高乌菜同源四倍体诱导率的方法，包括如下步骤：(1)对二倍体乌菜种子温水浸种催芽；(2)待种皮胀破露白后，将种子浸泡在秋水仙素‑吐温80混合液中1h进行诱变处理，每天处理2次，连续处理1～3天；(3)将处理完的乌菜种子播种于穴盘中育苗。本发明还提供了一种乌菜倍性鉴定方法。本发明填补了国内外乌菜多倍体育种的空白，提供了一种操作简单、方法有效的乌菜同源四倍体诱变方法，创制出了优质、高产的乌菜四倍体新种质；同时，也对乌菜倍性鉴定的方法也进行改良，为大规模高效的鉴定提供了基础与依据。

摘要： 本发明涉及一种四倍体青贮玉米的倍性鉴定方法，属于生物技术领域。利用OTTO buffers制备细胞核悬液，采用美国Becton-Dickinson公司的流式细胞仪，发光源为488nm氩离子蓝色激光；测定DNA分子荧光强度，对照二倍体植株主峰荧光强度调至200通道处，如待测植株主峰值处在200通道处视为二倍体，而处在400通道处视为四倍体。流式细胞仪倍性检测结果与显微镜检测及成株期形态鉴别相一致。应用此法，可在幼苗期快速鉴定出四倍体青贮玉米的倍性，提高育种效率。

摘要： 本发明公开了一种西瓜离体诱变四倍体的方法及倍性早期鉴定技术，它利用二硝基甲苯类除草剂(DNH)代替常用的秋水仙素作为诱导剂，作用是通过干扰纺锤体的机制而抑制细胞分裂中期的有丝分裂，使组织细胞染色体加倍，应用组织培养进行多倍体诱导与常规植株诱变方法相比，具有明显的优越性。(1)可以反复大批量地处理植物愈伤组织、丛生芽等，提高诱导成功率；(2)组织培养条件不受季节等自然条件的影响，可在室内进行，诱导条件易于控制，可以大大缩短诱导所需要的时间；(3)组织培养诱变后的植株，用试管苗进行早期倍性鉴定，比田间更直接。(4)利用乙酸盐荧光黄(FDA)染料涂抹在西瓜离体幼叶的下表皮上，在荧光显微镜下观察保卫细胞叶绿体的数目，根据荧光叶绿体的数目进行倍性早期鉴定，二硝基苯胺类诱导剂比秋水仙素毒性小，诱导频率高，且成本较低。