尼罗罗非鱼

摘要： 为探究清道夫受体3(scavenger receptor class a member 3,Scara3)在尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus抵御病原微生物过程中的作用,采用聚合酶链式反应克隆得到罗非鱼Scara3基因,利用荧光定量PCR技术分析Scara3在健康尼罗罗非鱼组织分布及细菌、病毒感染后的表达情况,并进行亚细胞定位分析。结果表明:克隆得到尼罗罗非鱼Scara3基因cDNA全长序列为3889 bp,开放阅读框(ORF)为1827 bp,编码608个氨基酸,具有跨膜结构域和胶原(Collagen)结构域;多序列比对发现,Scara3氨基酸序列在脊椎动物中相对保守;亚细胞定位显示,Scara3蛋白在全细胞分布;荧光定量PCR分析显示,Scara3基因在健康罗非鱼各组织中均有表达,在血液、肠道、皮肤和胸腺等组织中表达量较高且显著高于其他组织(P<0.05);经脂多糖(LPS)、灭活无乳链球菌Streptococcus agalactiae和聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激罗非鱼头肾白细胞后,Scara3表达量显著上调(P<0.05),经灭活无乳链球菌和Poly I:C刺激后,肠道、头肾和皮肤组织中的基因表达量表现出时序性。研究表明,尼罗罗非鱼在对细菌和病毒感染的免疫反应活动中,Scara3基因起着重要作用,本研究结果为后期硬骨鱼类中Scara3基因的功能研究提供了科学参考。

摘要： 【目的】明确枸杞多糖对罗非鱼机体生长发育及消化功能的影响,为罗非鱼健康养殖提供理论参考,同时为促进罗非鱼养殖产业的可持续健康发展提供新思路。【方法】在尼罗罗非鱼基础饲料中添加5个不同剂量(0~2000 mg/kg)的枸杞多糖,进行40 d的养殖试验后测量尼罗罗非鱼的体重及全长,计算相对增重率(WG)、相对增长率(LG)、特定生长率(SGR)和饲料系数(FCR),采用ELISA试剂盒分别检测淀粉酶(Amylase)、蛋白酶(Protease)及脂肪酶(Lipase)活性,并采集前肠、中肠和后肠组织制作切片,通过光学显微镜观察肠道组织形态的变化特征。【结果】于基础饲料中添加不同剂量枸杞多糖对尼罗罗非鱼的生长发育均起促进作用,其中以添加1500 mg/kg处理组的促进效果最佳,至养殖试验结束时尼罗罗非鱼的终末全长、终末体重、WG、LG和SGR均达最高值,分别为13.45 cm、48.74 g、6.96%、0.94%和5.19%/d;而FCR最小,仅为1.88。尼罗罗非鱼中肠组织的蛋白酶和淀粉酶活性在1500 mg/kg处理组中显著升高(P0.05)。肠绒毛长度在尼罗罗非鱼前肠组织中以1500 mg/kg处理组的最短(0.351 mm)、在后肠组织中则以1500 mg/kg处理组的最长(0.320 mm),与对照组(0 mg/kg)相比差异显著;肌层厚度在前肠和中肠组织中均以500 mg/kg处理组的最厚,分别为0.089和0.087 mm,在后肠组织中则以1000 mg/kg处理组的最薄(0.065 mm)、2000 mg/kg处理组的最厚(0.099 mm)。【结论】枸杞多糖可提高罗非鱼的消化酶活性,改善其肠道组织形态,从而影响罗非鱼的生长发育,且以添加剂量为1500 mg/kg的效果最佳。

摘要： 克隆尼罗罗非鱼E-钙黏着蛋白(On-ECdh)基因,分析On-ECdh基因生物信息学特征及其在正常和无乳链球菌刺激后的尼罗罗非鱼组织中的表达情况。设计基因特异引物扩增On-ECdh基因片段,采用生物信息学对其序列进行分析,利用荧光定量PCR技术检测On-ECdh基因的表达模式。On-ECdh基因开放阅读框为2442 bp,编码813个氨基酸。On-ECdh理论分子质量为89.9 ku,等电点为4.81。On-ECdh基因推导氨基酸含有1个钙黏着蛋白前结构域、4个钙黏着蛋白重复样结构域、1个钙黏着蛋白细胞质结构域和1个跨膜结构域。On-ECdh与伯氏朴丽鱼E-钙黏着蛋白的氨基酸序列相似性最高,达79.04%,与其他鱼类、哺乳动物的相似性分别为42.44%~52.59%和37.12%~44.62%。荧光定量PCR分析表明,On-ECdh基因在健康的尼罗罗非鱼各组织中均有分布,在肝组织中的相对表达量最高,其次为鳃、肠道、胃、眼、肌肉、脾脏、脑、心脏、头肾。经无乳链球菌刺激后,On-ECdh基因相对表达量在头肾、眼和肠道中显著上调,而在胃、鳃和肝脏中呈下调趋势。眼、头肾和肠道中相对表达量分别在刺激1、3、12 h后达到最高峰,并在高峰后呈现回落趋势。胃、肝脏和鳃中的相对表达量分别在1、3、24 h时最低,胃和鳃中的相对表达量随时间呈现波浪型变化,肝脏中的则持续降低。试验结果表明,无乳链球菌可诱导On-ECdh基因表达,表明E-钙黏着蛋白可能在尼罗罗非鱼感染无乳链球菌时发挥一定的防御作用。

摘要： 从健康成年尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肠道中分离纯化得到乳酸菌,采用牛津杯双层平板法筛选具有抑制嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)活性的乳酸菌菌株,借助16S rRNA分子鉴定乳酸菌种类。通过排除有机酸和过氧化氢干扰及蛋白酶敏感性等试验分析抑菌活性最佳乳酸菌的抑菌活性物质成分,并进行热、酸碱稳定性和扫描电镜观察等确定抑菌活性物质对嗜水气单胞菌的抑菌作用。结果显示,尼罗罗非鱼肠道中有3株乳酸菌对嗜水气单胞菌表现出良好的抑菌效果,经鉴定后分别为植物乳酸菌(Lactobacillus plantarum)和唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)。其中,菌株LX3的抑菌活性最佳,抑菌圈直径可达到(25.25±0.23)mm且对多种蛋白酶敏感,经不同温度和酸碱性处理后抑菌活性物质仍保持较高的抑菌活性,特别是在pH 12和100°C处理后,抑菌圈直径仍达到(13.87±0.12)和(16.65±0.26)mm。此外,扫描电镜观察发现菌株LX3抑菌活性物质主要破坏了嗜水气单胞菌的细胞结构,使细胞内容物流出,致其死亡。结果表明,尼罗罗非鱼肠道中拥有较为丰富的抑制嗜水气单胞菌乳酸菌资源,尤其是菌株LX3显示出良好的抑菌活性与抑菌作用,这对于替代抗生素防治嗜水气单胞菌引发的相关鱼类疾病具有重要价值。

摘要： 本试验研究在饲料中添加微藻对尼罗罗非鱼幼鱼的生长性能及体成分的影响,在基础饲料中分别添加不同微藻,分成5个组进行饲喂,其中D0组为对照组,不添加任何微藻,D1组添加7.5%螺旋藻,D2组添加15%螺旋藻,D3组添加7.5%栅藻,D4组添加15%栅藻。结果表明,饲料中添加15%螺旋藻,尼罗罗非鱼幼鱼的增重率和特定生长率最高,且显著高于对照(P<0.05),而饲料系数最低,显著低于对照组,鱼体粗蛋白质含量增加。饲料中添加栅藻,尼罗罗非鱼幼鱼的增重率和特定生长率没有提高,饲料系数反而增加,鱼体粗蛋白质含量变化不大。结果:螺旋藻组尼罗罗非鱼幼鱼的生长优于栅藻组。

摘要： 肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)是一种重要的接头蛋白,在Toll样受体/白细胞介素-1受体(TLR/IL-1R)超家族所触发的信号通路中起重要作用,与先天性免疫密切相关。文章研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)traf6的表达模式和初步的功能。在健康鱼中,traf6转录本广泛表达于所有受检组织中,在血液中表达水平最高,在肝脏中最低。在不同的胚胎发育阶段也检测到traf6的表达。在无乳链球菌体内感染后,大多数受检组织中traf6 mRNA的表达量上调。此外,LPS、Poly I:C和S.agalactiae可显著诱导尼罗罗非鱼巨噬细胞traf6的表达。此外,在HEK293T细胞中过表达表明,TRAF6分布于细胞质中,可显著提高NF-κB的活性。免疫共沉淀(Co-IP)实验表明,TRAF6可与IRAK1(白细胞介素-1受体相关激酶1)相互作用,IRAK1在TLR/IL-1R信号通路中也起重要作用。在体内,TLR2、TLR21和TLR13b的过表达可上调traf6 mRNA的表达水平,表明TRAF6参与了TLR2、TLR21和TLR13b介导的信号转导,提示TRAF6在病原体入侵的免疫应答中起重要作用。

摘要： 奥尼罗非鱼是奥利亚罗非鱼雄鱼和尼罗罗非鱼雌鱼的杂交品种,雄性率达93%以上,外形和母本极其相似,生长速度快,起捕率也高,是目前罗非鱼的主要养殖品种。一直以来,奥尼罗非鱼养殖以池塘模式为主,高产量的池塘养殖模式存在水质不稳定、鱼肉粗糙有腥味且养殖过程中易患病等问题,不仅带来经济损失,还导致环境恶化。随着我国近年来耕地保护政策以及水产养殖绿色发展的推进,稻渔生态种养作为一种有效的健康养殖模式,将具有共生互利的水产品种与水稻进行综合种养,能有效地提高产品品质.

摘要： 为研究水体pH对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长、营养组成和肉质的影响,实验设置低pH(Low pH:4)、对照(Control:7.2)和高pH(High pH:8.5)三个水体pH梯度,投喂初重为(1.9±0.1)g的尼罗罗非鱼10周,并测定其生长性能、血清生化指标、肌肉营养成分和肉质相关指标。结果显示,相较于对照组,高pH和低pH水环境造成尼罗罗非鱼的增重率显著降低(P<0.05),肝糖原累积显著增高(P<0.05),同时也造成血清中甘油三酯的含量显著降低(P<0.05)及肝功能指标血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶的活性显著增高(P<0.05)。另外,高pH水环境导致尼罗罗非鱼脏体比和肌肉黏性显著降低(P<0.05),肌肉蒸煮损失、肌肉和血清中乳酸含量显著增高(P<0.05)。同时,高pH组罗非鱼肌肉的PUFA,特别是n-3 PUFA的相对含量显著提高(P<0.05),肌肉脂肪酸营养价值得到提升。而低pH水环境则会造成罗非鱼的脏体比和饲料系数显著提高(P<0.05),及肌肉弹性的显著降低(P<0.05)。综上所述,尽管高pH水环境会使罗非鱼肌肉中n-3 PUFA含量有所提高,但是整体来看,高或低pH水环境均不利于尼罗罗非鱼的健康生长和肌肉品质的提升。

摘要： 红罗非鱼(Oreochromis spp.)一般认为是由突变型红色莫桑比克罗非鱼与其他罗非鱼种类如尼罗罗非鱼杂交,经多代选育而成的优良品种,是世界性的重要经济鱼类。因其体色艳丽、腹腔无黑膜、适应性强、口感清新以及市场价格高等优点,近年来在我国的养殖面积不断增大,市场空间巨大。

摘要： 【目的】筛选合适的指标建立一套外来养殖鱼类的生物入侵风险评估体系,并对外来养殖鱼类的生物入侵防控提出对策建议。【方法】通过文献资料的收集和整理,对外来养殖鱼类中典型入侵物种的入侵过程、影响危害和入侵生物学特性进行分析和归纳,从适应能力、繁殖能力、扩散能力3方面指示其入侵性;从对生物的影响和对环境的影响2方面指示其生态影响;从自然因素和人为因素2方面指示环境可入侵性,以上述3方面为框架进行评估体系构建。【结果】筛选20个指标构建了外来养殖鱼类的生物入侵风险评估体系,并举例说明该评估体系的应用。从法规政策、科学研究、治理技术和公众参与等4个方面针对性地提出外来养殖鱼类生物入侵风险防控对策。【结论】防范和治理入侵生物是一个系统工程。对于外来养殖鱼类的管理,既不能只考虑经济效益而置生态风险于不顾,也不能片面放大外来养殖良种的入侵风险。科学管控的关键在于完善制度建设、加强风险评估、发展防治手段、促进公众参与,使外来鱼类养殖业在严格受控的前提下发挥其经济效益,将其潜在的生态危害效应降到最低。

摘要： 为研究尼罗罗非鱼肠道和池塘养殖环境中菌群结构变化与链球菌病爆发的相关性,本研究采用16S rDNA高通量测序方法对比分析发病和健康池塘水体、底泥和尼罗罗非鱼肠道菌群的结构特征.研究结果表明,底泥中微生物多样性最高,水体和肠道中微生物多样性次之;肠道菌群与水体中菌群的相似性较高,而与底泥中菌群相似性较低;发病组的尼罗罗非鱼肠道和池塘底泥中微生物的多样性均低于健康组,而发病组池塘水体中微生物多样性高于健康组.OTU聚类分析发现,发病与健康尼罗罗非鱼肠道微生物差异极为显著,大部分健康尼罗罗非鱼肠道微生物样品单独聚为一支.菌群结构组成分析结果表明,虽然发病组和健康组水体或底泥中优势菌群结构组成的差异较小,但在非优势菌群中存在一定差异,发病组水体中变形菌门和梭杆菌门的比例显著高于健康组水体,疣微菌门和浮霉菌门的丰度显著低于健康组水体:发病组池塘底泥中厌氧粘细菌属、甲烷丝菌属和枝芽孢菌属等具有降解有机质和生态修复功能菌群的丰度显著低于健康组底泥,而具有致病能力的曼氏杆菌属丰度却显著高于健康组底泥.发病组尼罗罗非鱼肠道菌群中链球菌属、分枝杆菌属和曼氏杆菌属等致病菌群的丰度显著高于健康组尼罗罗非鱼肠道,而乳球菌属、鲸杆菌属和红球菌属等益生菌的丰度显著低于健康尼罗罗非鱼肠道.无乳链球菌普遍存在于发病和健康养殖环境,以及尼罗罗非鱼肠道中,无乳链球菌的丰度在发病和健康养殖环境之间无显著差异,但其在发病尼罗罗非鱼肠道中的丰度要显著高于健康组.综上所述,尼罗罗非鱼链球菌病发病池塘水体和底泥中有益菌丰度降低和致病菌丰度的升高反映其养殖环境出现恶化,尼罗罗非鱼链球菌病的爆发与肠道微生态平衡破坏后无乳链球菌丰度增加密切相关,但肠道中无乳链球菌丰度的剧增与养殖水体和底泥中该病原菌的丰度水平之间并无直接关联.

摘要： 目的:为揭示不同温度下间隙性低溶氧对无乳链球菌灭活疫苗免疫接种后的尼罗罗非鱼免疫反应的影响. 方法:分别设置了2个温度(30±0.5°C和35±0.5°C)和2个溶解氧(4±1.0ml/L和8±0.5mg/L DO)条件.在免疫后第2d,分析尼罗罗非鱼头肾组织免疫相关基因表达水平;在免疫后第28d,分析外周血白细胞吞噬能力、脾脏和头肾组织细胞呼吸爆发活性和NO含量;在免疫后第29d,人工腹腔注射感染无乳链球菌,统计尼罗罗非鱼累积死亡率. 结果:尼罗罗非鱼免疫后第3d,IL-1βTNF-αIFN-γ表达水平在30°C和35°C低溶氧免疫鱼头肾组织中均显著低于同温度下常氧免疫鱼;尼罗罗非鱼免疫后第28d,外周血白细胞吞噬能力和组织细胞呼吸爆发活性在35°C且低溶解氧状态下的免疫鱼中最低,而组织细胞NO含量在35°C且低溶解氧免疫鱼显著升高;尼罗罗非鱼免疫后第29d人工感染无乳链球菌后,在30°C下,间歇性低氧免疫鱼累积死亡率高于常氧免疫鱼,但无显著差异,而在35°C下,间歇性低氧免疫鱼累积死亡率显著高于常氧免疫鱼. 结论:无论在30°C还是35°C下,间歇性低溶氧能够在一定程度上抑制免疫接种后尼罗罗非鱼免疫反应.

摘要： 本研究从尼罗罗非鱼性腺中克隆了两种β-catenin(命名为β-catenin-1和-2),系统发生分析表明β-catenin1和2分别聚为不同的分支,并且这种基因复制仅发生在鱼类.运用RT-PCR分析表明，β-catenin-1和-2在脑、垂体、鳃、心脏、肾、肠中都有表达。运用酵母双杂交实验，进一步证明β-catenin2确实可以与β-catenin1相互作用。基于上述实验，推测两种不同类型的β-catenin通过相互作用在卵巢的分化和维持中发挥重要作用。

摘要： 本研究通过对尼罗罗非鱼基因组与性腺转录组分析发现Dmrt1、2、3、5、6在精巢中的表达高于卵巢,而Dmrt4在卵巢中的表达高于精巢。Dmrt6为首次在硬骨鱼类发现且仅存在于丽鱼科，采用RACE与RT-PCR相结合的方法克隆了tDmrt6全长cDNA序列，组织分布研究发现tDmrt6在罗非鱼成鱼中呈泛表达模式，但在精巢中的表达明显高于卵巢。实时荧光定量PCR检测结果表明tDmrt6在同一发育时期精巢中的表达也高于卵巢。此外，原位杂交分析发现tDmrt6在精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞中都有表达。通过以上研究表明tDmrt6可能参与了尼罗罗非鱼精巢发育和功能维持，以及在减数分裂与精子发生上有着重要的作用。

摘要： 本研究通过RT-PCR和RACE技术,从尼罗罗非鱼中克隆了FGF9/16/20亚家族中的三个成员(FGF16、20a和20b).通过RT-PCR进行的组织分布研究表明FGF16在包括精巢和卵巢在内的多个组织中表达，还通过real-time PCR研究了FGF16和FGF20b在正常以及性逆转个体性腺发育过程中的表达模式，这两个基因在XX(♀)和XY(♀)卵巢中的表达都远远高于在XY(♂)和的XX(♂)精巢中的表达，并且都在孵化后120天达到最高。原位杂交显示FGF16和FGF20的阳性信号集中在二时相的卵母细胞内。这些数据表明FGF9/16/20亚家族可能在雌性生殖细胞的发育过程中起重要作用。

摘要： 本文研究了量子点对雄性尼罗罗非鱼肝脏、肾脏及性腺组织的显微观察.实验设置3组,200nmol/LQDs浓度组、0.65％NaCl对照组和1个Cd2+对照组,各组均以2ml/kg的剂量进行腹腔注射,分别在处理后1d、4d、7d进行断脊髓后取材,用10％甲醛固定,梯度酒精脱水,二甲苯透明后包埋及H.E染色.通过试验结果可初步判断量子点对雄性尼罗罗非鱼的肝脏、肾脏及性腺有一定的影响，至于量子点对鱼类是否有毒性，还需进一步的研究。

摘要： 本研究采用转录组RNA-Seq技术对罗非鱼性腺分化和发育关键时期(孵化后5、30、90和180天)雌、雄性腺8个转录组进行测序.对8个转录组数据进行分类统计、表达谱分析和功能分类，发现在所研究的这4个发育阶段中，几乎都没有雌性特异表达的unigene。孵化后5天性腺表达的unigene数目最多，证实了孵化后5天是尼罗罗非鱼性别分子分化的关键时期且雌性的性别决定与分化是一个“默认通路”。这一结果反映了孵化后5天时雄性个体中缺乏雄激素的产生，而在雌性个体中已有雌激素合成。对Cyp19ala和Cyp19alb在各个时期均表现为雌性高表达的模式，也说明了雌激素对于雌性性别决定与维持过程的重要作用。

摘要： 采用扫描电镜和免疫组化技术,研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鳃中氯细胞的分布,及其不同盐度(0‰,10‰,20‰,30‰)胁迫对氯细胞数目和形态变化的影响.扫描电镜结果显示,氯细胞分布在鳃丝的鳃小片基部,根据其表面开口长度,可分为3种亚型:Ⅰ型(＞6.5 μm)、Ⅱ型(3.2-6.5μm)和Ⅲ型(＜3.2 μm).不同盐度下氯细胞总数目变化趋势为10‰＜0‰ ＜20‰ ＜30‰.从0‰盐度转移到10‰盐度后,氯细胞总数目减少,主要是由于Ⅰ型氯细胞数目显著下降.20‰盐度中的氯细胞数量高于10‰盐度,但不显著.30‰盐度中的氯细胞数量随Ⅲ型氯细胞数量的显著提高而增加.免疫组织化学进一步证实了不同盐度条件下Na+-K+-ATPase免疫反应性细胞均分布在鳃丝的鳃小片基部.本研究结果表明,尼罗罗非鱼可通过改变鳃氯细胞数量和形态结构来适应环境中的盐度变化,推测Ⅰ型氯细胞和Ⅲ型氯细胞分别在低盐、高盐适应中起着重要作用.

摘要： 罗非鱼是一种杂食性鱼类,具有抗病力强、生长速度快、耐低氧、肉质鲜美等特点,深受广大消费者喜爱.本文通过网箱养殖及池塘养殖罗非鱼试验,对池塘育苗、繁殖、精养高产、饲料加工、网箱养鱼、技术培训等示范推广工作进行了详细的论述.试验结果证明池塘养殖和网箱养殖模式经济效益显著,养殖技术简单便于普及推广.

摘要： 本研究通过实时定量PCR检测罗非鱼Igf3mRNA个体发生过程的表达模式,进行了Igf3重组蛋白及其多克隆抗体的制备，并对罗非鱼孵化后10、120和300天的性腺进行免疫组织化学检测，结果表明Igf3特异表达在卵巢颗粒细胞和鞘膜细胞及精巢间质细胞。Igf3能够调节fox12,dmrt1，nr5a1和类固醇生成酶的表达，反过来，Igf3的表达也受到转录因子(Fox12, Dmrt1和Nr5a1)及雌二醇的调节，因此推测Igf3参与了鱼类性腺类固醇生成，同时，Igf3可以增强精巢离体细胞cyp11b2及卵巢cyp19ala表达，暗示了Igf3可能参与精巢和卵巢的分化，这还需要进一步的研究证实。

摘要： 本发明公开了鉴定奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交子代的方法、试剂盒及应用，所述方法采用SNP标记引物对待测罗非鱼样品进行鉴定，从而获得一种能够有效用于罗非鱼的种质鉴定，进而开展分子标记辅助育种，实现短时间、低成本、高准确率的保种、选育工作。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述方法提供的SNP标记引物不受罗非鱼年龄、性别及养殖状态限制，可以用于罗非鱼早期种质鉴定，显著提升罗非鱼的保种、选育工作效率；(2)本发明所述方法选取罗非鱼GH外显子基因上的SNP位点作为检测位点，对解释罗非鱼生长速率差异可杂交优势等分子标记辅助育种提供了科学依据。

摘要： 本发明公开了一种适用于尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的微卫星标记亲权鉴定引物、方法及应用，属于鱼类育种技术领域。本发明筛选了13对荧光标记微卫星引物用于亲权鉴定，该鉴定方法包括以下步骤：构建尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的全同胞家系；提取各家系亲本和子代基因组DNA；多态性微卫星标记的筛选；荧光标记微卫星引物PCR扩增；多重毛细管电泳分型和亲权鉴定。本发明首次建立了适用于尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的微卫星标记亲权鉴定方法，其鉴定准确率为100%，在实际应用中鉴定准确率可达99.43%。本发明鉴定准确率高、操作简便，可用于指导这三种罗非鱼在育种过程中的种群遗传和家系系谱管理。

摘要： 本发明公布了一种鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交鱼的方法，包括以下步骤：（1）采集待鉴别的罗非鱼样品，提取基因组DNA；（2）用步骤（1）获得的基因组DNA为模板，进行PCR扩增；（3）对步骤（2）的PCR扩增产物进行电泳检测；（4）根据PCR的电泳检测结果，鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼杂交鱼：尼罗罗非鱼电泳检测结果有1条178bp的条带，奥利亚罗非鱼有1条187bp的条带，尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼的杂交鱼有2条条带，分别为178bp和187bp。本发明有助于快速、准确鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交鱼，在罗非鱼种质鉴定、保种和选育中有极大的应用价值。

摘要： 本发明公开了鉴定奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交子代的方法、试剂盒及应用，所述方法采用SNP标记引物对待测罗非鱼样品进行鉴定，从而获得一种能够有效用于罗非鱼的种质鉴定，进而开展分子标记辅助育种，实现短时间、低成本、高准确率的保种、选育工作。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述方法提供的SNP标记引物不受罗非鱼年龄、性别及养殖状态限制，可以用于罗非鱼早期种质鉴定，显著提升罗非鱼的保种、选育工作效率；(2)本发明所述方法选取罗非鱼GH外显子基因上的SNP位点作为检测位点，对解释罗非鱼生长速率差异可杂交优势等分子标记辅助育种提供了科学依据。

摘要： 本发明公开了一种适用于尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的微卫星标记亲权鉴定引物、方法及应用，属于鱼类育种技术领域。本发明筛选了13对荧光标记微卫星引物用于亲权鉴定，该鉴定方法包括以下步骤：构建尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的全同胞家系；提取各家系亲本和子代基因组DNA；多态性微卫星标记的筛选；荧光标记微卫星引物PCR扩增；多重毛细管电泳分型和亲权鉴定。本发明首次建立了适用于尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的微卫星标记亲权鉴定方法，其鉴定准确率为100%，在实际应用中鉴定准确率可达99.43%。本发明鉴定准确率高、操作简便，可用于指导这三种罗非鱼在育种过程中的种群遗传和家系系谱管理。

摘要： 本发明涉及尼罗罗非鱼淋巴细胞抗原75(OnLy75)的克隆、原核表达和抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体制备的方法。公开了OnLy75基因全长序列，该序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。所述OnLy75的编码序列位于SEQ ID NO.1的5’端第88～5286位脱氧核苷酸，编码1732个氨基酸，氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。公开了用于制备OnLy75多克隆抗体的多肽序列，具体为序列表SEQ ID NO.4所示的序列，以及用于制备所述多克隆抗体的组合物。公开了制备抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体的方法、由该方法获得的兔多克隆抗体及其在Western Blot检测中的应用。

摘要： 本发明公布了一种鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交鱼的方法，包括以下步骤：（1）采集待鉴别的罗非鱼样品，提取基因组DNA；（2）用步骤（1）获得的基因组DNA为模板，进行PCR扩增；（3）对步骤（2）的PCR扩增产物进行电泳检测；（4）根据PCR的电泳检测结果，鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼杂交鱼：尼罗罗非鱼电泳检测结果有1条178bp的条带，奥利亚罗非鱼有1条187bp的条带，尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼的杂交鱼有2条条带，分别为178bp和187bp。本发明有助于快速、准确鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交鱼，在罗非鱼种质鉴定、保种和选育中有极大的应用价值。

摘要： 本发明涉及一种鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交鱼的分子标记方法，其特征是：选用3对特异微卫星标记引物组合，从待测罗非鱼采样血液或鳍条，提取基因组DNA，对待测罗非鱼基因组DNA进行多重PCR扩增，PCR产物用8.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，银染法染色后，拍照记录电泳结果。根据多重PCR的电泳检测结果，可鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及它们的杂交鱼。本发明可快速、有效地鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交鱼。

摘要： 本发明提供一种尼罗罗非鱼mstnb纯合敲除系的建立方法及以此获得的快速生长品系，所述方法包括：(1)将尼罗罗非鱼mstn基因gRNA与Cas9 mRNA混合，并室温孵育获得gRNA与Cas9 mRNA的复合物；向复合物中加入小分子染料混合均匀即得CRISPR/Cas9基因编辑的显微注射液，(2)使人工授精后一细胞期尼罗罗非鱼受精卵均匀平躺于培养皿中；(3)将所述显微注射液转至微型针管中并利用显微注射仪将其注射至所述步骤(2)固定的细胞受精卵中,(4)注射后将受精卵转入26±2°C恒温循环水孵化系统中进行孵化。本发明方法获得的mstnb突变尼罗罗非鱼在七月龄较野生型体重增长50％左右，为提高尼罗罗非鱼养殖产量提供重要支撑，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种尼罗罗非鱼星形胶质细胞系及其构建方法和应用，涉及生物细胞模型技术领域。本发明针对尼罗罗非鱼脑组织，采用胰酶消化法分离脑组织细胞，再利用差速贴壁法能进一步减少成纤维细胞的干扰，能更大程度保留脑组织中的胶质细胞进行原代培养，荧光免疫组化检测GFAP信号呈阳性，成功构建罗非鱼脑星形胶质细胞系，可连续传至100代以上，还能维持良好的生长状态，可冷冻保存。本发明所述尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞系可以直接用于罗非鱼湖病毒(TiLV)的病原特征分析及疫苗开发研究，还可运用于罗非鱼无乳链球菌脑膜炎机制及鱼源链球菌病的渔药开发研究。