利用PTD-Tat实现海洋微生物低温脂肪酶基因的跨膜转导方法

摘要

本发明适用于跨膜转导基因片段与脂肪酶的融合表达技术领域，提供了一种利用PTD‑Tat实现海洋微生物低温脂肪酶基因的跨膜转导方法，包括如下步骤：1、设计获得Lipase‑tat融合基因；2、构建pET28a‑Lipase‑tat载体：首先，应用Nco I和Xho I酶切Lipase‑tat，胶回收酶切片段；然后应用Nco I和Xho I酶切pET28a载体，胶回收获得线性化的pET28a载体片段；再连接酶切片段和pET28a载体片段，得到重组表达载体质粒；3、Lipase‑tat蛋白原核表达与纯化提取。借此，本发明能够实现海洋微生物低温脂肪酶基因的跨膜转导，使重组蛋白制备成的减肥药物能够进入细胞；同时为PTD‑Tat基因和海洋微生物低温脂肪酶基因的跨膜转导机理及其蛋白类药物递送方面的有效应用提供理论与实践依据。