一种基于TdT和DNAzyme扩增的黄瓜绿斑驳病毒可视化检测方法

摘要

本发明公开了一种基于TdT和DNAzyme扩增的黄瓜绿斑驳病毒可视化检测方法，带有部分CGMMV序列的T1和带有Mg²⁺‑依赖的DNAzyme的部分酶序列的P1杂交，AcⅡ识别其底物序列5′‑AACGTT‑3′，后者被剪切成两部分，随后解链为4个ssDNA片段，加入脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)及dCTP，进行加尾反应，生成Mg²⁺‑依赖的DNAzyme的完整酶序列。然后再加入HP，HP的环部位与Mg²⁺‑依赖的DNAzyme的酶序列进行杂交，在Mg²⁺存在下，Mg²⁺‑依赖的DNAzyme酶序列剪切其识别位点，将HP的茎环结构剪切为两部分，位于茎部位的G‑四连体结构被释放，在K⁺存在下，结合Hemin形成Hemin/G‑四连体结构，在H₂O₂存在下，催化ABTS^2‑氧化，使溶液变绿。溶液吸光度与CGMMV浓度呈正相关。