一种克隆草地早熟禾谷氨酰胺合成酶PpGS1基因的方法

摘要

本发明属于生物技术育种领域，公开了一种克隆草地早熟禾谷氨酰胺合成酶基因PpG基因的方法,方法包括：(1)通过电子克隆获得PpGS1基因的部分cDNA序列，长度为1065bp。(2)以cDNA序列为靶标序列，设计特异引物，通过RT‑PCR技术进行扩增。(3)通过琼脂糖凝胶电泳，回收PCR产物。并将回收的特异产物连接到pEasy cloning vector载体上，转化感受态细胞，对阳性克隆进行测序，得到草地早熟禾PpGS1基因的部分cDNA序列，与电子克隆长度一致。(4)根据克隆得到的部分cDNA序列，设计特异引物，利用Clontech公司的SMART^TM RACE技术原理进行cDNA末端扩增，所获得的PpGS1cDNA全长为1451bp。(5)实时荧光定量PCR技术检测表明PpGS1基因具有组织特异表达性。