一种维生素D3羟化酶转化生产25-羟基维生素D3的方法

摘要

本发明提供一种以维生素D3为底物通过酶转化生产25‑羟基维生素D3的方法，该方法按如下步骤进行：a.发酵：产维生素D3羟化酶的大肠杆菌经IPTG诱导后培养18‑38h；b.破壁：发酵液通过离心收集大肠杆菌，并加入发酵液体积30%‑100%的纯水洗菌体，用磷酸盐缓冲液重悬菌体后通过高压均质机进行破壁处理；c.粗提：将b步骤获得的破壁液离心收集上清液，获得维生素D3羟化酶粗酶液；d.转化：用特定溶剂溶解维生素D3，加入到c步骤获得的粗酶液中，使得维生素D3的终浓度达到0.5‑5g/L，并加入该羟化酶的辅因子，于20‑40℃条件下，转化24‑48h。经HPLC检测，维生素D3的转化率达到80%以上。