通过荧光共振能量转移方法原位定量活细胞中的蛋白质‑蛋白质相互作用

摘要

本发明公开了一种通过荧光共振能量转移方法确定细胞中第一蛋白与第二蛋白是否存在相互作用的方法。该方法包括：(1)在细胞中表达第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中，所述第一融合蛋白包括第一蛋白和作为供体的第一可关闭荧光蛋白，所述第二融合蛋白包括第二蛋白和作为受体的第二可关闭荧光蛋白；(2)在第一可关闭荧光蛋白和第二可关闭荧光蛋白均打开，以及各自单独打开的3种条件下，分别在三种激发光和发射光的条件下进行检测所述细胞的荧光值，以便获得由荧光绝对值组成的数据集。(3)基于所述数据集，确定参数FR数值，并且基于所得到参数FR数值确定所述第一蛋白与所述第二蛋白之间是否存在相互作用。