分离反转录转座子长末端重复序列的方法

摘要

分离反转录转座子长末端重复序列的方法，以基因组DNA作为模版，利用RNaseH1引物分别与不同的退火控制引物组合进行第一次PCR反应，后通过第一次的PCR产物进行稀释，做为模板，使用RNaseH2引物与通用引物UP进行第二次PCR反应扩增，进行转化、质粒DNA的提取，进行序列测序，得到RNaseH酶的氨基酸序列，并编码蛋白。本方法相对于普通PCR技术具有操作简单，易直接瞄准反转录转座子长末端重复序列区,针对性强,与流式磁珠反向杂交法相比，免去杂交、洗脱、筛选等过程,流程简化，且效率高，与其它的分离方法相比，减少时间消耗、快速获得目的片段，在较短时间内将长末端重复序列克隆，减少假阳性率的发生。