一种牛新孢子虫病的检测方法及应用

摘要

本发明公开一种牛新孢子虫病检测方法，通过采用在PCR反应体系中加入指示假阴性的扩增内标，通过碱基重排、引物设计和搭桥法PCR扩增，构建了一条内标模板，并构建了含有内标的荧光定量PCR反应体系，确定了共扩增体系的反应条件，Mg²⁺2.5mmol/L，dNTP各0.3mmol/L，引物各0.5mmol/L，探针各0.2mmol/L，扩增条件为50℃，2min，1个循环；95℃，5min，1个循环；95℃15s，57℃45s，45个循环。本发明检测灵敏度高，特异性好，操作方便且能够指示并校正假阴性结果的发生，广泛应用于及时准确有效的检测牛新孢子虫病领域。