一种中生菌素F组分的工业生产方法

摘要

本发明提供一种中生菌素F组分的工业生产方法，包括如下步骤：步骤一、配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养，得到链霉菌试管菌苔悬液；步骤二、配制菌种发酵的种子培养基，并接入步骤一所得的链霉菌试管菌苔悬液，得到种子培养液；步骤三、配制发酵罐培养基，接入步骤二所得的种子培养液，得到发酵液；步骤四、将步骤三所得的发酵液经过过滤、离子交换、洗脱、浓缩、脱色、降温、干燥后，得到中生菌素F组分母药。本发明产物集中，能得到纯度较高的中生菌素F组分母药，较目前市售产品纯度明显提高；本发明方法制得的高含量中生菌素F组分母药在农药制剂加工中用途更为广泛，便于实现高容量制剂的开发和系列化开发。

说明书

技术领域

本发明涉及农药技术领域，具体涉及一种中生菌素F组分的工业生产方法。

背景技术

中生菌素（zhongshengmycin）又名农抗751菌素、链丝菌素，属N-糖苷类抗生素。根据文献报道，浅灰色链霉菌海南变种（Streptomyces lavendulae var heinanensisn.var）和秦岭链霉菌（Streptomyces qinlingnensis sp. nov）等多个链霉菌均能产生中生菌素。中生菌素抗菌谱广，能抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、分枝杆菌、酵母菌及丝状真菌等，对昆虫也有一定的杀灭作用。其杀菌机理是能够抑制polyU引导的多肽合成，并能导致蛋白翻译中的错读，使细菌不能合成蛋白质而死亡。中生菌素在农业上偏重于水稻白叶枯、黄瓜细菌性角斑病、白菜软腐病、杆菌溃疡病等细菌性病害，也可用于苹果轮纹病、黄瓜霜霉病、灰霉病、白粉病和番茄晚疫病等真菌性病害的防治。中生菌素有多个有效组分，其中中生菌素F组分是中生菌素中具有较高农药利用价值的组分之一。F组分结构如下（n=1）：

由于具有显著且直接杀菌作用，产生中生菌素的链霉菌在自然界比较容易被发现并分离得到。申请人在长期的野外菌种采集分离中多次得到产生中生菌素的菌株。2003年从蒲城土壤中分离得到一株放线菌，公司菌株编号18/46#，经形态、生理生化、细胞壁特征及分子生物学等特征判断为一株链霉菌。产物分离鉴定发现抑菌成分以中生菌素C、D、F组分为主，未发现报道的中生菌素A和X组分，且B、E组分含量低。目前该菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记入册编号CGMCCNo.22065，公司保藏编号MKL1。随后申请人菌种中心进行了长期持续不断的单一紫外诱变筛选得95#链霉菌，并开展了培养基和培养条件优化，液体发酵，产物分离鉴定，活性测试等方面的研究。

目前，现有技术中尚没有中生菌素F组分的工业生产方法，因此，需要提供一种中生菌素F组分的工业生产方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种中生菌素F组分的工业生产方法，该方法可制备60-80%的中生菌素F组分母药，产品含量远高于目前农业部登记的12%中生菌素母药，溶解于水，不溶物小于0.2%，填补了高纯度中生菌素母药的空白，为混配制剂和含量高于12%农药产品生产开发提供了原料药。

为达到上述技术效果，本发明中生菌素F组分的工业生产方法采用如下技术方案：

一种中生菌素F组分的工业生产方法，包括如下步骤：

步骤一、配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养，得到链霉菌试管菌苔悬液；

步骤二、配制菌种发酵的种子培养基，并接入步骤一所得的链霉菌试管菌苔悬液，得到种子培养液；

步骤三、配制发酵罐培养基，接入步骤二所得的种子培养液，得到发酵液；

步骤四、将步骤三所得的发酵液经过过滤、离子交换、洗脱、浓缩、脱色、降温、干燥后，得到中生菌素F组分母药。

进一步的，所述步骤一中，所述生产试管斜面培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量3-7%；采用尿素作为氮源，用量1-3%；氯化钠，用量0.1-0.2%；氯化镁，用量0.1-0.2%；采用磷酸二氢钾作为磷源，用量0.2-0.4%；琼脂用量20g/L；用2mol/L盐酸或2mol/L氢氧化钠调pH值为7.0-7.4；用自来水补足。

进一步的，所述步骤一的具体操作步骤如下：

S1、在40±2℃的自来水中依次加入氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾、尿素，搅拌充分溶解后，再加入玉米淀粉，搅拌至均匀无团块；该步用自来水为总配制用水量的70%，配制过程在水浴中完成；

S2、用S1同样温度的自来水定容；

S3、将S2定容好的溶液放置室温，等温度降至20℃，测pH值，pH高于7.4，用2mol/L盐酸调整pH；pH低于7.0，用2mol/L氢氧化钠调整pH；然后加入琼脂，搅拌均匀；

S4、将S3调整好的培养基在121℃灭菌30分钟后制作斜面，并在37℃培养72小时，无杂菌落便可使用；

S5、在S4制得的斜面上接入链霉菌，培养140-150小时后，长出灰白色菌苔，得到链霉菌试管菌苔悬液。

进一步的，所述步骤二中，所述种子培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量2-3%；采用冷榨大豆饼粉作为氮源，用量2-3%；添加速效碳源葡萄糖0.5-2%；添加速效氮源尿素1-2%；添加无机盐氯化钠0.1-0.2%、磷酸二氢钾0.1-0.2%和氯化镁0.2-0.4%；同时添加豆油作为消泡剂，用量为0.3-0.5%；在121℃消毒30min，培养时，通气量与物料比为0.8：1/分钟；搅拌线速度为300-350米/分钟，培养温度28±2℃，pH值自然，培养周期24-28h。

进一步的，所述步骤三中，所述发酵罐培养基采用玉米粉或者玉米淀粉作为碳源，用量2-3%；采用冷榨大豆饼粉作为氮源，用量2%-3%；添加速效氮源尿素1%-2%；添加无机盐氯化钠、磷酸二氢钾和氯化镁，用量分别为0.1-0.2%、、0.1-0.2%和0.2-0.4%；同时添加豆油作为消泡剂，用量为0.1%-0.2%；进行消毒，培养时通气量与物料比为0.8：1/分钟，搅拌线速度为300-350米/分钟，培养温度28±2℃，pH自然，发酵周期72-90h，pH上升至7.2放罐，接种量3%-5%。

进一步的，在发酵进行到24±5h时，溶氧开始下降并趋于稳定时，需要补充所述发酵罐培养基，补充量为原发酵液的25-30%。

进一步的，所述步骤四的具体操作步骤如下：

第一步，将发酵液用草酸调节pH为3.5±0.3，然后采用超滤过滤；

第二步，滤液以2倍树脂体积/h的速度通过树脂进行离子交换，再用洗脱液洗脱，收集后的洗脱液调整pH值至3.5；

第三步，采用减压浓缩将洗脱液浓缩至浓度为40±5g/L；

第四步，在第三步所得的浓缩液中加入活性炭，常温搅拌，脱色30min，过滤；

第五步，滤液在60℃下再减压浓缩至浓度为90±5g/L；

第六步，将浓缩液以10℃/min的降温速度降至9℃，在9℃保持10h，期间搅拌转速维持50-100转/分，大量晶体析出；

第七步，过滤并干燥，在压力-0.1Mpa，温度60℃条件下干燥至水分≤5%，经检测得到的是含量在60-80%的中生菌素F组分母药。

进一步的，第二步中，所述的树脂为钠型树脂，优选为732树脂；所述的洗脱液为1mol/L浓度的盐酸，用2mol/L氢氧化钠调整pH值。

进一步的，第三步中，采用的减压浓缩参数为：压力-0.1Mpa，浓缩温度50℃。

进一步的，第四步中，活性炭的加入量为浓缩液质量的2.0%。

本发明的上述技术方案至少包括以下有益效果：

1、本发明方法操作步骤简单，适于工业生产应用；

2、产物集中，能得到纯度较高的中生菌素F组分母药，较目前市售产品纯度明显提高；

3、本发明方法制得的高含量中生菌素F组分母药在农药制剂加工中用途更为广泛，便于实现高容量制剂的开发和系列化开发。

附图说明

图1为95#链霉菌菌落形态实物图；

图2为市售中生菌素产品液相色谱图；

图3为95#链霉菌发酵产物液相色谱图；

图4为中生菌素F母药产品液相色谱图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例的附图1-4，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉55g，尿素10g，氯化钠 2g，氯化镁2g；磷酸二氢钾3g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.7，用2mol/L氢氧化钠调 PH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养145小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取9Kg玉米淀粉，9kg冷榨大豆粉，6Kg葡萄糖，6Kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和300g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至230L体积，121℃，30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为326米/分钟。培养26h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取200Kg玉米淀粉；240kg冷榨豆饼粉；120kg尿素；8kg氯化钠，8kg磷酸二氢钾，16kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7760L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为343-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至22h，发现溶氧缓慢上升，24h上升变慢，趋于稳定，补入实现灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积10000L左右，发酵周期84h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9100L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为4.5g/L。加入92Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.3，然后进入超滤机组过滤，至出液3700L时加入自来水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液17000L，滤液中生菌素F含量2.09g/L。滤液以6m

实施例2

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉70g，尿素30g，氯化钠 2g，氯化镁4g；磷酸二氢钾3g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL，然后用pH计测量pH6.5，用2mol/L pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在试管斜面上接入链霉菌95#。培养140小时后，长出灰白色菌苔，丰满。

同时称取9Kg玉米淀粉，9kg冷榨大豆粉，1.5Kg葡萄糖，6Kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和300g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至232L体积，121℃，30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为317米/分钟。培养25h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取210Kg玉米淀粉；160kg冷榨豆饼粉；160kg尿素；8kg氯化钠，8kg磷酸二氢钾，16kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃,30min，消毒后体积7750L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为345-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至22h,发现溶氧缓慢上升，24h上升变慢，趋于稳定，补入实现灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积10000L左右，发酵周期84h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9120L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为4.8g/L。加入91.6Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.3，然后进入超滤机组过滤，至出液3750L时加入自来水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液18200L，滤液中生菌素F含量2.19g/L。滤液以6m

实施例3

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉65g，尿素30g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.6，用2mol/L氢氧化钠调pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养141小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取9Kg玉米淀粉，9kg冷榨大豆粉，6Kg葡萄糖，6kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至244L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为313米/分钟。培养24.4h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取200Kg玉米淀粉；210kg冷榨豆饼粉；160kg尿素；8kg氯化钠，8kg磷酸二氢钾，16kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7760L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为348-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入事先灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积近10000L左右，发酵周期81h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9250L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.0g/L。加入95Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.4，然后进入超滤机组过滤，至出液4050L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液18700L，滤液中生菌素F含量2.24g/L。滤液以6m

实施例4

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉60g，尿素25g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.5，用2mol/L pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养147小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取6.5Kg玉米淀粉，7kg冷榨大豆粉，5Kg葡萄糖，5kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至247L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为310米/分钟。培养25.6h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取210Kg玉米粉；200kg冷榨豆饼粉；150kg尿素；9kg氯化钠，10kg磷酸二氢钾，17kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7700L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为345-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入实现灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积近10000L左右，发酵周期81h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9200L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.1g/L。加入95Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.4，然后进入超滤机组过滤，至出液4000L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液19000L，滤液中生菌素F含量2.25g/L。滤液以6m

实施例5

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉70g，尿素30g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.4，用2mol/L氢氧化钠调pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养141小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取8Kg玉米淀粉，9kg冷榨大豆粉，6Kg葡萄糖，6kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至242L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为315米/分钟。培养26.4h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取210Kg玉米淀粉；210kg冷榨豆饼粉；160kg尿素；8kg氯化钠，8kg磷酸二氢钾，16kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7860L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为348米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入事先灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2100L，体积近10000L左右，发酵周期80h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9290L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.1g/L。加入95Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.4，然后进入超滤机组过滤，至出液4080L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液19200L，滤液中生菌素F含量2.23g/L。滤液以6m

实施例6

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉70g，尿素25g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.1，用2mol/L氢氧化钠调pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养145小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取8Kg玉米淀粉，9kg冷榨大豆粉，6Kg葡萄糖，6kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至255L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为345米/分钟。培养28.0h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取200Kg玉米淀粉；200kg冷榨豆饼粉；160kg尿素；8kg氯化钠，8kg磷酸二氢钾，16kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7950L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为348米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入事先灭菌好，和发酵罐配方一致的料液1900L，体积近10000L左右，发酵周期75h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9250L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.0g/L。加入100Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.3，然后进入超滤机组过滤，至出液4100L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液19100L，滤液中生菌素F含量2.18g/L。滤液以6m

实施例7

按照以下方法制备中生菌素F组分：

称取玉米淀粉60g，尿素25g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.5，用2mol/L pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养147小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取6.5Kg玉米淀粉，7kg冷榨大豆粉，5Kg葡萄糖，5kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至247L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为310米/分钟。培养25.6h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取210Kg玉米淀粉；200kg冷榨豆饼粉；150kg尿素；9kg氯化钠，10kg磷酸二氢钾，17kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7700L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为345-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入实现灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积近10000L左右，发酵周期81h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9200L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.1g/L。加入95Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.4，然后进入超滤机组过滤，至出液4000L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液19000L，滤液中生菌素F含量2.25g/L。滤液以6m

实施例8

称取玉米淀粉60g，尿素25g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.5，用2mol/L pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养147小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取6.5Kg玉米淀粉，7kg冷榨大豆粉，5Kg葡萄糖，5kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至247L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为310米/分钟。培养25.6h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取210Kg玉米淀粉；200kg冷榨豆饼粉；150kg尿素；9kg氯化钠，10kg磷酸二氢钾，17kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7700L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为345-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入实现灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积近10000L左右，发酵周期81h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9200L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.1g/L。加入95Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.4，然后进入超滤机组过滤，至出液4000L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液19000L，滤液中生菌素F含量2.25g/L。滤液以6m

实施例9

称取玉米淀粉60g，尿素25g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.5；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养147小时后，由于pH较低，对菌种的生产和孢子形成影响较大，斜面长成较薄较少的白色菌苔，因担心接种量不够，该批种子未成为生产种子。

实施例10

称取玉米淀粉60g，尿素25g，氯化钠 2g，氯化镁3g；磷酸二氢钾4g，琼脂200g。先量取700mL自来水，加热至40℃，放入40℃水浴锅中，依次加入称量好的氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾和尿素，搅拌均匀，颜色略现乳白，然后在搅拌下缓慢加入玉米粉，搅拌均匀。用40℃自来水定容至1000mL,然后用pH计测量pH6.5，用2mol/L pH7.2；加入琼脂粉搅拌均匀。分装于普通直径3cm试管中，每支试管15ml。分装好的试管于121℃灭菌30min。从灭菌锅中取出后摆出斜面，冷却后放入37℃培养箱培养72h，观察无杂菌生长。在斜面上接入95#链霉菌。培养147小时后，长出灰白色菌苔。

同时称取6.5Kg玉米淀粉，7kg冷榨大豆粉，5Kg葡萄糖，5kg尿素，300g氯化钠，300g磷酸二氢钾和450g氯化镁，600g氯化镁，900g豆油，100Kg水，依次加入500L种子罐，水补至247L体积，121℃,30min。灭菌后体积300L，冷却至30℃，接入一支95#链霉菌试管菌苔悬液。调整通气量240L/分钟。搅拌线速度为310米/分钟。培养25.6h，显微镜观察菌丝成网状，生长良好。

称取210Kg玉米淀粉；200kg冷榨豆饼粉；150kg尿素；9kg氯化钠，10kg磷酸二氢钾，17kg氯化镁，16kg豆油4000L水。在水中依次放入以上原料，在15000L发酵罐中定容至6500L，消毒时间采用常规121℃，30min，消毒后体积7700L，温度降低至30℃时接入种子，调整通气量6400L/分钟。搅拌线速度为345-350米/分钟（波动）。培养温度28±2℃。pH自然。培养至25h,发现溶氧缓慢上升，26h上升变慢，趋于稳定，补入实现灭菌好，和发酵罐配方一致的料液2000L，体积近10000L左右，发酵周期81h时，pH上升至7.2放罐。

放罐时体积9200L，液相色谱检测发酵液中中生菌素F含量为5.1g/L。加入95Kg草酸，充分搅拌溶解后pH3.4，然后进入超滤机组过滤，至出液4000L时加入资料水继续过滤，依次稀释三次后，得到滤液19000L，滤液中生菌素F含量2.25g/L。滤液以6m

由以上实施例可知，本发明方法可制备60-80%的中生菌素F组分母药，产品含量远高于目前农业部登记的12%中生菌素母药，溶解于水，不溶物小于0.2%，填补了高纯度中生菌素母药的空白，为混配制剂和含量高于12%农药产品生产开发提供了原料药。

以上是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。