一种用于基因编辑NK细胞的mRNA模板及构建方法、mRNA的体外转录方法和应用

摘要

本发明提供了一种用于基因编辑NK细胞的mRNA模板及构建方法、mRNA的体外转录方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明在mRNA的模板上采用一种线性化质粒，省略线性化步骤；在模板中预先加入PolyA121结构，舍去额外的加尾工作；采用ARCA抗反帽的帽子类似物，在体外转录过程中同时完成加帽。总之，本发明通过特殊的反应体系和特殊线性化质粒模板，将mRNA的体外转录简化为一步。本发明减少了mRNA的降解，大大降低了对NK细胞的刺激性和毒性；帽子类似物大大提高了mRNA的稳定性，降低了NK细胞炎性反应。本发明利用制备得到的mRNA在NK细胞上可成功过表达细胞因子或人工抗原嵌合受体。