一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法

摘要

本发明提供一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，涉及属于生物技术领域。该一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，以膜荚黄芪种子为原料，包括以下步骤：S1、预处理：先将原料用25‑35℃的清水进行冲洗，然后将种子去壳、碾碎，浸泡在40‑55摄氏度的温水中1.5‑3天，然后将其搅拌成浆液；S2、提取：通过40um微孔滤膜进行过滤水分，然后向浆液中加入浆液体积2％‑5％琼脂粉、并与浆液搅拌均匀，然后置于离心机中进行离心，收集上清液，再放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品。通过在提取前进行预处理，制成充分均匀的浆液，然后进行提取和纯化，还加入琼脂粉，会使部分蛋白与其结合，保留住大部分的凝集素蛋白。

说明书

技术领域

本发明涉及属于生物技术领域，具体为一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法。

背景技术

膜荚黄芪是一种中药，具有补气升阳，益卫固表，利水消肿，托疮生肌等作用，药用价值极高，在我国有大面积的种植和培养。凝集素具有多种生物学功能，其潜在的研究价值逐渐被挖掘。凝集素是一类非免疫性的蛋白或糖蛋白，能可逆地、特异地与碳水化合物相互作用，具有多变的氨基酸序列，广泛的分布于微生物、病毒及植物中。凝集素有多种功能、结构、组织定位及糖结合特异性。

目前利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法提取出来的凝集素蛋白的提取率比较低，较多的蛋白质被损失掉，造成很大的浪费。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，解决了现有的提取方法膜荚黄芪种子的提取率低的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，以膜荚黄芪种子为原料，包括以下步骤：

S1、预处理：

先将原料用25-35℃的清水进行冲洗，冲洗时间为12-25分钟，然后将种子去壳、碾碎，浸泡在40-55摄氏度的温水中1.5-3天，然后将其搅拌成浆液；

S2、提取：

通过40um微孔滤膜进行过滤水分，然后向浆液中加入浆液体积2％-5％琼脂粉、并与浆液搅拌均匀，然后置于离心机中进行，18000r/min、离心20min，收集上清液，再加入20mmol/L、pH7.0的PBS缓冲液30ml进行溶解，放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品；

S3、纯化：

将得到的初产品分离纯化，用18mmol/l、pH7.0Tris-HCl缓冲液洗脱，调节流速在0.8ml/min，收集各个洗脱峰；经SUPERDEX-G25分子筛层析后，得到一个主要的蛋白峰，即为膜荚黄芪凝集素蛋白AML；

S4、检测：

对纯化后的产品进行蛋白质含量检测为75％-83％。

优选的，所述S1中浸泡时温水与原料的体积比为1.2-1.5：1，所述浸泡过程中对水温进行恒温加热。

优选的，所述S1中的搅拌包括机械搅拌和超声波搅拌，先进行机械搅拌10-15min，然后进行超声波搅拌10-25min，使其完全成为浆液。

优选的，所述对初产品进行蛋白质含量检测为45％-62％。

优选的，所述预处理、提取、纯化得到的产品均在-15℃至-18℃的冷冻箱内部保存。

优选的，所述S1中浸泡时加入温水体积1％-5％的精盐。

优选的，所述对纯化后的产品进行含糖量检测为16％-25％。

(三)有益效果

本发明提供了一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法。

具备以下有益效果：

1、本发明，通过在提取前进行预处理，制成充分均匀的浆液，然后进行提取和纯化，还加入琼脂粉，其吸水的过程中会使部分蛋白与其结合，保留住大部分的凝集素蛋白，能够大大提高膜荚黄芪种子的蛋白提取率。

2、本发明，通过采用20mmol/L、pH7.0的PBS缓冲液30ml进行溶解，放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品，能够提高蛋白质的提取量。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一：

本发明实施例提供一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，以膜荚黄芪种子为原料，包括以下步骤：

S1、预处理：

先将原料用25℃的清水进行冲洗，冲洗时间为12分钟，然后将种子去壳、碾碎，浸泡在4摄氏度的温水中1.5天，然后将其搅拌成浆液；

S2、提取：

通过40um微孔滤膜进行过滤水分，然后向浆液中加入浆液体积2％琼脂粉、并与浆液搅拌均匀，然后置于离心机中进行，18000r/min、离心20min，收集上清液，再加入20mmol/L、pH7.0的PBS缓冲液30ml进行溶解，放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品；

S3、纯化：

将得到的初产品分离纯化，用18mmol/l、pH7.0Tris-HCl缓冲液洗脱，调节流速在0.8ml/min，收集各个洗脱峰；经SUPERDEX-G25分子筛层析后，得到一个主要的蛋白峰，即为膜荚黄芪凝集素蛋白AML；

S4、检测：

对纯化后的产品进行蛋白质含量检测为75％-83％。

上述S1中浸泡时温水与原料的体积比为1.2：1，所述浸泡过程中对水温进行恒温加热。

上述S1中的搅拌包括机械搅拌和超声波搅拌，先进行机械搅拌10min，然后进行超声波搅拌10min，使其完全成为浆液。

上述对初产品进行蛋白质含量检测为45％-62％。

上述预处理、提取、纯化得到的产品均在-15℃的冷冻箱内部保存。

上述S1中浸泡时加入温水体积1％的精盐。

对纯化后的产品进行含糖量检测为16％-25％。

实施例二：

本发明实施例提供一种利用膜荚黄芪种子提取膜荚黄芪凝集素蛋白的方法，以膜荚黄芪种子为原料，包括以下步骤：

S1、预处理：

先将原料用35℃的清水进行冲洗，冲洗时间为25分钟，然后将种子去壳、碾碎，浸泡在55摄氏度的温水中3天，然后将其搅拌成浆液；

S2、提取：

通过40um微孔滤膜进行过滤水分，然后向浆液中加入浆液体积5％琼脂粉、并与浆液搅拌均匀，然后置于离心机中进行，18000r/min、离心20min，收集上清液，再加入20mmol/L、pH7.0的PBS缓冲液30ml进行溶解，放进透析袋中进行透析，多次透析后得到初产品；

S3、纯化：

将得到的初产品分离纯化，用18mmol/l、pH7.0Tris-HCl缓冲液洗脱，调节流速在0.8ml/min，收集各个洗脱峰；经SUPERDEX-G25分子筛层析后，得到一个主要的蛋白峰，即为膜荚黄芪凝集素蛋白AML；

S4、检测：

对纯化后的产品进行蛋白质含量检测为75％-83％。

上述S1中浸泡时温水与原料的体积比为1.5：1，所述浸泡过程中对水温进行恒温加热。

上述S1中的搅拌包括机械搅拌和超声波搅拌，先进行机械搅拌15min，然后进行超声波搅拌25min，使其完全成为浆液。

上述对初产品进行蛋白质含量检测为45％-62％。

上述预处理、提取、纯化得到的产品均在-15℃至-18℃的冷冻箱内部保存。

上述S1中浸泡时加入温水体积5％的精盐。

对纯化后的产品进行含糖量检测为16％-25％。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。