用于治疗癌症的放射免疫疗法和免疫检验点疗法的联合疗法

摘要

通过施用放射免疫疗法以产生免疫应答并组合地施用免疫检验点疗法以进一步增强免疫应答来治疗增生性疾病或障碍的方法。

说明书

本申请要求2018年12月21日提交的美国临时专利申请号62/783,510的优先权，其整个内容随同并入。

技术领域

本发明涉及通过施用放射免疫疗法和免疫检验点疗法治疗具有增生性障碍的受试者的方法。

背景技术

癌症是每年导致全球数百万人死亡的恶性疾病的异质性群体。在2018年，在美国因由癌症导致的死亡超过600,000人。尽管进行了数十年的努力，但是大多数癌症仍然是无法治愈的，这主要是由于从局部疾病向转移性疾病的发展。此外，癌细胞已经发展出逃避免疫系统的标准检验点的方式。例如，已发现癌细胞通过减少的肿瘤抗原表达、MHC I类和II分子的下调(从而导致减少的肿瘤抗原呈递)、免疫抑制性细胞因子(诸如TGFb)的分泌、免疫抑制性细胞诸如调节性T细胞(Treg)或骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)的募集或诱导、以及某些抑制宿主的现有抗肿瘤免疫的配体[例如，程序性死亡配体-1(PD-L1)]的过表达来逃避免疫监视。

癌细胞的免疫抑制的另一种主要机制是被称为“T-细胞耗竭”的过程，该过程源自向肿瘤抗原的长期暴露，并且其特征在于抑制性受体的上调。这些抑制性受体充当免疫检验点以防止不受控制的免疫反应。在文献中已经描述了在不同的T细胞免疫水平起作用的各种免疫检验点，包括PD-1(即，程序性细胞死亡蛋白1)和它的配体PD-L1和PD-L2、CTLA-4(即，细胞毒性的T-淋巴细胞相关的蛋白-4)、LAG3(即，淋巴细胞-活化基因3)、B和T淋巴细胞减弱剂、T-细胞免疫球蛋白、TIM-3(即，含有粘蛋白结构域的蛋白3)和T细胞活化的V-结构域免疫球蛋白抑制剂。

通过治疗干预来增强免疫系统的效力是癌症治疗中特别令人兴奋的发展。如所指出的，检验点抑制剂诸如CTLA-4和PD-1会防止自身免疫并且通常保护组织免受免疫附带损害。另外，刺激性检验点诸如OX40(即，肿瘤坏死因子受体超家族，成员4；TNFR-SF4)、CD137(即，TNFR-SF9)、GITR(即，糖皮质激素诱导的TNFR)、CD27(即，TNFR-SF7)和CD28会激活和/或促进T细胞的繁殖。通过抑制或过表达这些蛋白来调节免疫系统是一个当前有前途的研究领域。但是，这样的调节在治疗具有低突变负荷的肿瘤(即免疫学上冷的肿瘤)方面没有显示出巨大希望。

近年来，已经观察到，局部辐射疗法可以刺激免疫系统并因此调节某些癌症的全身消退，这被称为辐射诱导的伴随远隔效应(Grass,等人.Curr Probl Cancer 2016 40:10-24)。也就是说，发现靶向辐射疗法会最小化或根除在远处的转移灶。局部辐射疗法会损伤肿瘤细胞内的DNA，从而导致肿瘤细胞凋亡。从垂死的肿瘤细胞释放出的肿瘤抗原，例如新抗原，可以提供抗原刺激，其在这些远端转移灶处诱导抗肿瘤特异性应答。来自T细胞缺陷小鼠的证据支持了该假设，其中辐照了单个肿瘤小结节，并发现远端抗原相关的小结节消退(Demaria S,等人.Int J Radiat Oncol Biol Phys.2004 58(3):862-70)。

靶向辐射疗法并非没有明显的缺点。在辐射路径中的非癌性组织受到损伤，且不易靶向非局限性癌症诸如转移性和血液学癌症。另外，尽管辐射疗法可能提供可用于抗原刺激的新抗原的释放，但癌细胞已发展出逃避宿主免疫系统的机制。此外，在表现出T-细胞耗竭的患者中，新释放的新抗原可能不会引发免疫系统以引起应答。因此，需要改进的方法以特异性地靶向和杀死癌细胞，同时改善对从被靶向的癌细胞释放的新抗原的免疫应答。

发明内容

本发明提供了用于治疗宽范围的癌症的改进方法，其基于与免疫检验点疗法组合的放射免疫疗法的应用。放射免疫疗法的施用可以产生免疫应答，其可以通过免疫检验点疗法的随后施用进一步增强。可替换地，通过施用免疫检验点疗法，随后用放射免疫疗法靶向某些抗原，可以除去免疫应答的遏制(诸如通过T-细胞耗竭)。放射免疫疗法和免疫检验点疗法的这些和其它组合是本发明的目标。

因此，本发明涉及治疗具有增生性障碍的受试者的方法，其中所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的放射免疫疗法和治疗有效量的免疫检验点疗法。可以同时或依次施用放射免疫疗法和免疫检验点疗法，例如，可以在免疫检验点疗法之前和/或之后施用放射免疫疗法,或反之亦然。放射免疫疗法和/或免疫检验点疗法的施用可以是根据定量施用计划，诸如每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、14天、21天或28天一次。

根据某些其它方面，可以在免疫检验点疗法之前1、2、3或甚至4周施用放射免疫疗法，此后免疫检验点疗法和/或放射免疫疗法的施用可以是根据本文描述的任何方案，即如果继续的话，可以同时或依次施用免疫检验点疗法和放射免疫疗法。

根据某些方面，可以在放射免疫疗法之前1、2、3或甚至4周施用免疫检验点疗法，此后放射免疫疗法和/或免疫检验点疗法的施用可以是根据本文描述的任何方案，即如果继续的话，可以同时或依次施用放射免疫疗法和免疫检验点疗法。

放射免疫疗法可以包含针对CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD45、CD123、CD138、CS-1、B-细胞成熟抗原(BCMA)、MAGEA3、MAGEA3/A6、KRAS、CLL1、MUC-1、HER2、HER3、DR5、IL13Rα2和EphA2、EpCam、GD2、GPA7、PSCA、EGFR、EGFRvIII、ROR1、GPC3、CEA、间皮素、PSMA或其组合的抗体。放射免疫疗法可以包含针对在急性骨髓性白血病中突变的基因的蛋白产物的抗体，其中所述基因是NPM1、Flt3、TP53、CEBPA、KIT、N-RAS、MLL、WT1、IDH1/2、TET2、DNMT3A、ASXL1或其组合。放射免疫疗法可以包含针对CD33、CD38、CD45、HER3、DR5或其组合的抗体。

放射免疫疗法包含放射性核素标记，诸如

根据某些方面，放射免疫疗法包含用

根据某些方面，可以将超过一种放射免疫疗法施用给患者，诸如针对在上文中列出的任一种抗体的放射免疫疗法，和针对不同的上面列出的抗体之一的放射免疫疗法。根据某些方面，第一放射免疫疗法可以针对CD33、CD38、CD45、HER3或DR5，且第二放射免疫疗法可以针对不同的CD33、CD38、CD45、HER3或DR5之一。当将超过一种放射免疫疗法施用给患者时，它们可以作为组合来施用(即，包含两种放射免疫疗法的单一溶液的施用，或两种放射免疫疗法分别在单个施用期间内施用)。可替换地，可以在免疫检验点疗法之前施用两种放射免疫疗法之一，且可以在免疫检验点疗法之后施用第二放射免疫疗法，诸如根据上面指出的任何施用计划。

免疫检验点疗法可以包含针对CTLA-4、PD-1、TIM-3、VISTA、BTLA、LAG-3、TIGIT、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、PD-L1、PD-L2、PD-L3、PD-L4、CD80、CD86、CD137-L、GITR-L、CD226、B7-H3、B7-H4、BTLA、TIGIT、GALS、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049或其组合的抗体。

根据某些方面，免疫检验点疗法可以包含针对PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4或其组合的抗体。

根据某些方面，增生性障碍是癌症或实体瘤。根据某些方面，增生性障碍是选自多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤和骨髓增生性赘生物中的一种或多种的血液学疾病或障碍。

本发明也涉及用于治疗增生性疾病或血液学疾病或障碍的药物组合物，其中所述组合物包含放射免疫疗法和免疫检验点疗法的协同组合，诸如上文所述。

根据组合物的某些方面，放射免疫疗法可以包含抗-CD33抗体，诸如林妥珠单抗或抗-CD38抗体，诸如达雷木单抗或抗-CD45抗体，诸如BC8或抗-HER3抗体或抗-DR5抗体，其中任一种可以用本文描述的任何放射性核素标记，诸如

根据组合物的某些方面，放射免疫疗法可以被包括在受试者有效量中，所述受试者有效量包含小于16mg/kg受试者体重、小于10mg/kg受试者体重或小于6mg/kg受试者体重的总蛋白质含量。当放射免疫疗法包括放射性核素

根据组合物的某些方面，免疫检验点疗法可以被包括在受试者有效量中，所述受试者有效量包含0.1mg/kg至50mg/kg患者体重的剂量，诸如0.1-5mg/kg，或5-30mg/kg。

本发明的目标将借助于在所附权利要求中具体概述的组合来实现和达到。提供本发明的前述一般描述和下述详细描述和实施例以举例说明本发明的各个方面，并且决不应将其视作限制任何所描述的实施方案。

附图说明

图1提供了如在GenBank登录号NP_001766中所示的人CD38的氨基酸序列。

图2提供了如在GenBank登录号NP_001763中所示的人CD33的氨基酸序列。

图3提供了人CD45蛋白的RABC异形体的氨基酸序列。

图4-7描绘了根据本发明的不同实施方案的联合治疗。

图8提供了抗-CD45 mAb BC8的轻链(VL；SEQ ID NO.4)和重链(VH；SEQ ID NO.5)的互补性决定区(CDR)、框架区和可变结构域序列的序列，其中CDR显示为粗体且标有下划线。

图9提供了包含抗-CD45 mAb BC8的轻链和重链的CDR和N-端部分的氨基酸序列(SEQ ID NO.6-13)。

图10提供了抗-CD45-免疫球蛋白BC8的轻链的核苷酸(SEQ ID NO:14)和氨基酸(SEQ ID NO:15)序列。

图11提供了抗-CD45-免疫球蛋白BC8的重链的核苷酸(SEQ ID NO:16)和氨基酸(SEQ ID NO:17)序列。

SEQ ID NO:1是如在GenBank登录号NP_001766中所示的人CD38的氨基酸序列。

SEQ ID NO:2是如在GenBank登录号NP_001763中所示的人CD33的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3是人CD45蛋白的RABC异形体的氨基酸序列。

SEQ ID NO:4是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的轻链的可变结构域的氨基酸序列。

SEQ ID NO:5是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的重链的可变结构域的氨基酸序列。

SEQ ID NO:6是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的轻链的CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:7是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的轻链的CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:8是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的轻链的CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:9是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的重链的CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:10是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的重链的CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:11是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的重链的CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:12是包含轻链的N-端的抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的一部分的氨基酸序列。

SEQ ID NO:13是包含重链的N-端的抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的一部分的氨基酸序列。

SEQ ID NO:14是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的轻链的核苷酸序列。

SEQ ID NO:15是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:16是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的重链的核苷酸序列。

SEQ ID NO:17是抗-CD45鼠免疫球蛋白BC8的重链的氨基酸序列。

具体实施方式

本发明使用与免疫检验点疗法组合的放射免疫疗法以提供更持久的癌症疗法，其通过有效的肿瘤细胞杀伤以及新抗原的释放和增强的对那些新抗原的免疫应答而刺激免疫应答。

具有低突变负荷的癌症通常不会对免疫检验点疗法(诸如针对检验点抑制剂的抗体)产生良好应答。以前的研究已经证实，外线束辐射可导致伴随远隔效应，其中未照射的肿瘤(例如黑素瘤或结肠癌)对疗法做出应答，据推测是由于在被照射肿瘤的部位处的免疫应答的刺激，其能够识别和攻击远端肿瘤病灶。

放射免疫疗法使用针对肿瘤特异性抗原的放射性标记抗体将细胞毒性辐射递送至目标肿瘤细胞，这主要通过引发DNA中的单链或双链断裂来杀死肿瘤细胞。在这样做时，肿瘤可能释放出许多肿瘤特异性抗原，其引发针对这些抗原的免疫细胞。因此，靶向放射免疫疗法具有到达局部和远端肿瘤部位并促进抗原呈递细胞(即，树突细胞、巨噬细胞)的抗原呈递的潜力。这样，靶向放射免疫疗法可能能够引起伴随远隔效应。

由于放射免疫疗法不需要细胞增殖，也不易发生多药抗性机制，因此许多肿瘤类型都对这种形式的疗法敏感，包括白血病和淋巴瘤等癌症，其表现出相对低的突变负荷且因此对免疫调节疗法如针对PD1(即，程序性细胞死亡蛋白-1)或CD137的抗体不太敏感。例如，已知相对少的基因在急性骨髓性白血病中发生突变，包括：NPM1、Flt3、TP53、CEBPA、KIT、N-RAS、MLL、WT1、IDH1/2、TET2、DNMT3A和ASXL1。在靶向放射免疫疗法后，这些突变的肿瘤抗原的促进释放和呈递可能使针对癌细胞的稳健免疫应答得以建立，而其否则使用常规疗法则是不充分的。

某些其它基因在血液来源的细胞上过表达和/或选择性表达，诸如CD33、CD38和CD45。用针对CD33、CD38和/或CD45的放射免疫疗法靶向这些细胞类型可能为恶性的和非恶性的血液学疾病或障碍提供治疗。

其它基因(诸如HER3)在几种类型的癌症(诸如乳腺癌、胃肠道癌和胰腺癌)中过表达。已经证实HER2/HER3的表达与这些癌症从非侵袭性阶段到侵袭性阶段的进展之间的关联。干扰HER3介导的信号传递的药剂(诸如抗-HER3抗体)可能使针对癌细胞的稳健免疫应答得以建立，而其否则使用常规疗法则是不充分的。

细胞凋亡对于在体内除去不必要的或受损的细胞并维持正常细胞数量的生理过程是至关重要的。已知死亡受体5(DR5)诱导细胞中的细胞凋亡。细胞凋亡的调节机制经常在癌症或免疫疾病中受损。针对DR5的抗体可以以激动方式作用于表达该受体的细胞(癌细胞或免疫疾病相关的细胞)以杀死该细胞。

已知免疫检验点疗法诸如针对检验点抑制剂PD1或PD-L1(即，程序性死亡配体-1)、TIM3(即，含T-细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3)、Lag3(即，淋巴细胞活化基因3)或TIGIT(即，具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)的抗体释放在免疫细胞、特别是T细胞上的调节控制，从而刺激被遏制或耗竭的T细胞。但是，在缺乏对肿瘤的主动免疫应答的情况下，免疫检验点疗法是相对无效的。在一系列应答性肿瘤中，免疫检验点疗法通常仅有效地在约20％的患者中引起持久应答。在许多患者中，应答失败可能是由于对肿瘤的弱或不足免疫应答。

本发明将靶向放射免疫疗法与针对免疫检验点抑制剂的抗体和/或与可进一步激活T细胞的共刺激疗法(GITR、OX40和CD137)协同组合使用。这种靶向放射免疫疗法可能对所有肿瘤类型均有效，尤其是在具有相对低的突变负荷的肿瘤中，并且适合液体和实体瘤的治疗。

因此，本发明设想了一种联合疗法，其包括放射免疫疗法和免疫检验点疗法的组合。破坏性疗法诸如放射免疫疗法具有通过吞噬性抗原呈递细胞的释放或吞噬来引起足够的肿瘤细胞死亡并实现抗原呈递的潜力。与免疫检验点疗法(抑制性的和/或共刺激性的)的组合将导致针对新释放的新抗原的抗肿瘤免疫应答的持续激活(即，伴随远隔效应)，和/或可用于激活耗竭的免疫系统使得免疫应答成为可能(即免疫遏制的去抑制)。

除非在本文中另外定义，否则与本发明相关使用的科学和技术术语应当具有本领域普通技术人员通常理解的含义。另外，在本说明书中和在所附权利要求书中，单数的使用包括复数，并且复数包含单数，除非另外特别说明。例如，尽管在本文中提及“一种”抗体、“一种”放射免疫疗法和“所述”免疫检验点疗法，但是可以使用本文描述的这些组分和/或任意其它组分中的任何一种或多种。

如在本说明书中和在所附权利要求书中所使用的，词语“包含”和词语“包含”的形式不将本发明限制为排除任何变体或添加。另外，尽管已经以“包含”的方式描述了本发明，但是本文详述的方法、材料和组合物也可以描述为基本上由其组成或由其组成。例如，尽管已经以包括施用有效量的放射免疫疗法和有效量的免疫检验点疗法的方法描述了本发明的某些方面，但是“基本上由施用有效量的放射免疫疗法和有效量的免疫检验点疗法组成”或“由施用有效量的放射免疫疗法和有效量的免疫检验点疗法组成”的方法也在本发明范围内。在该背景下，“基本上由……组成”是指，任何另外组分不会对方法的效力产生实质性影响。

此外，除了在实施例中或在另外指出的情况下，所有表示例如在说明书中使用的成分的量的数字在所有情况下应理解为被术语“约”修饰。因此，除非相反说明，否则以下说明书中列出的数字参数是近似值，其可以根据本发明要获得的期望性能而变化。最低限度，且不是企图限制等同原则在权利要求的范围上的应用，每个数值参数应该至少根据记录的有效数字的个数且通过应用普通的舍入技术来解释。因而，当用在数字指示(例如，温度、时间、量和浓度，包括范围)前面时，术语“约”指示可以变化±10％、±5％或±1％的近似值。

如本文中使用的，就靶向试剂诸如抗体、抗体片段、Fab片段或适体而言，“施用”是指通过任何适合于抗体递送的已知方法将试剂递送至受试者的身体。具体的施用模式包括、但不限于静脉内、透皮、皮下、腹膜内、鞘内和肿瘤内施用。示例性的抗体施用方法可以基本上如在国际公开号WO 2016/187514(通过引用并入本文)中所述。

另外，在本发明中，可以使用一种或多种常规使用的药学上可接受的载体来配制抗体或抗体片段。这样的载体是本领域技术人员众所周知的。例如，可注射的药物递送系统包括溶液、混悬液、凝胶、微球和聚合物注射物，且可以包含赋形剂诸如溶解度改变剂(例如，乙醇、丙二醇和蔗糖)和聚合物(例如，聚己内酯和PLGA)。

本文中使用的术语“抗体”包括，但不限于，(a)包含两个重链和两个轻链且识别抗原的免疫球蛋白分子；(b)多克隆和单克隆免疫球蛋白分子；(c)其单价和二价片段(例如，二-Fab)，和(d)其双特异性形式。免疫球蛋白分子可以衍生自通常已知的类别中的任一种，包括、但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，且包括、但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。抗体可以是天然存在的和非天然存在的(例如，IgG-Fc-沉默的)。此外，抗体包括嵌合抗体、完全合成抗体、单链抗体、及其片段。抗体可以是人的、人源化的或非人的。

本文中使用的“免疫反应性”表示免疫球蛋白识别并结合特异性抗原的能力的量度。“特异性结合”或“特异性地结合”或“结合”表示以比对其它抗原更大的亲和力结合抗原或抗原内表位的抗体。通常，抗体以约1×10

本文中使用的“抗-CD33抗体”是结合CD33的任何可利用的表位的抗体、抗体片段、肽、Fab片段或适体。根据某些方面，抗-CD33靶向试剂是针对CD33的人源化抗体，诸如林妥珠单抗(HuM195)、吉妥珠单抗或伐达妥昔单抗。根据某些方面，抗-CD33靶向试剂结合被单克隆抗体“林妥珠单抗”或“HuM195”识别的表位。HuM195是已知的，制备它的方法也是已知的。

“抗-CD38抗体”是结合CD38的任何可利用的表位的抗体。根据某些方面，抗-CD38抗体结合被单克隆抗体“达雷木单抗”识别的表位。达雷木单抗是已知的，制备它的方法也是已知的。

“抗-CD45抗体”是结合CD45的任何可利用的表位的抗体。根据某些方面，抗-CD45抗体结合被单克隆抗体“BC8”识别的表位。BC8是已知的，制备它的方法也是已知的。BC8抗体可以是嵌合抗体(BC8c)，其包括人IgG1-IgG4分子或人κ分子的重链和/或轻链的恒定区。

“抗-HER3抗体”是结合HER3的任何可利用的表位的抗体。根据某些方面，抗-HER3抗体结合被Patritumab、Seribantumab、Lumretuzumab、Elgemtumab或GSK2849330识别的HER3的表位。根据某些方面，抗-HER3抗体是针对HER3/HER2的任何可利用的表位的双特异性抗体，诸如来自Merrimack Pharmaceuticals的MM-111和MM-141/Istiratumab，来自Merus NV的MCLA0-128，和来自Genetech的MEHD7945A/Duligotumab。

“抗-DR5抗体”是结合DR5的任何可利用的表位的抗体。根据某些方面，抗-CD5抗体结合被抗体替加珠单抗、可那木单抗或drozitumab识别的DR5的表位。

“表位”表示能够被靶向试剂(诸如抗体、抗体片段、Fab片段或适体)识别并结合的靶分子位点(例如，抗原的至少一部分)。对于蛋白抗原，例如，这可以表示被抗体结合的蛋白区域(即氨基酸，和特别是它们的侧链)。重叠的表位包括至少一至五个常见的氨基酸残基。鉴定抗体表位的方法是本领域技术人员已知的，并且包括例如在Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Harlow和David Lane编(1988)中描述的那些。

本文中使用的术语“增生性障碍”和“癌症”可以互换使用，并且可以包括、但不限于实体癌症(例如，肿瘤)和血液学恶性肿瘤。

“血液疾病”或“血液障碍”可以用于至少表示血癌。这样的癌症起源于血液形成组织，诸如骨髓或免疫系统的其它细胞。血液疾病或障碍包括、但不限于白血病(诸如急性骨髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性混合谱系白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病和巨粒淋巴细胞白血病)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性障碍(真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性骨髓纤维化和慢性骨髓性白血病)、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、MGUS和类似障碍、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、原发性纵隔大B细胞性淋巴瘤、弥漫性大B细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、转化性滤泡性淋巴瘤、脾边缘带淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤和其它B-细胞恶性肿瘤。

“实体癌症”包括、但不限于骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿科肿瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境诱导的癌症，包括由石棉诱导的癌症。

根据某些方面，本文公开的放射免疫疗法包含针对血液学表达的抗原(诸如CD33、CD38、CD45、DR5或HER3)的放射性地标记的抗体。抗体可以用放射性同位素标记。本文中使用的“放射性同位素”可以是发射α的同位素、发射β的同位素和/或发射γ的同位素。放射性同位素的例子包括：

用于将放射性同位素附着至抗体的方法(即，用放射性同位素“标记”抗体)是已知的和描述的，例如在国际公开号WO 2017/155937(其整体并入本文)中。

根据某些方面，放射免疫疗法可以是用

根据某些方面，放射免疫疗法可以是用

根据某些方面，放射免疫疗法可以是用

根据某些方面，当抗体被

根据本发明的方面，有效量的

根据本发明的方面，

尽管本文已经公开了特定的放射性核素标记，但是涵盖来自以上提供的列表的任一种用于标记放射免疫疗法的抗体。

根据本发明的某些方面，施用于受试者的大多数靶向试剂(抗体、抗体片段等)通常由未标记的靶向试剂组成，少数是标记的靶向试剂，诸如具有本文所述的任何标记。可以使用已知方法调节标记的靶向试剂与未标记的靶向试剂的比例。因此，根据本发明的某些方面，可以以下述量提供放射免疫疗法：至多100mg的总蛋白量，诸如至多60mg，诸如5mg至45mg，或0.01mg/kg患者重量至15.0mg/kg患者重量的总蛋白量，诸如0.01mg/kg患者重量至1.0mg/kg，或0.2mg/kg患者重量至0.6mg/kg患者重量，或0.3mg/kg患者重量，或0.4mg/kg患者重量，或0.5mg/kg患者重量。

根据本发明的某些方面，放射性地标记的抗体包含从约0.01:10至1:10的经标记:未标记的比例的标记的级分和未标记的级分，诸如0.01:5至0.1:5、或0.01:3至0.1:3、或0.01:1至0.1:1经标记:未标记。此外，放射性地标记的抗体可以作为为特定患者定制的单剂量组合物提供。参见例如在国际公开号WO 2016/187514(通过引用整体并入本文)中公开的施用方法。根据某些方面，可以以多剂量提供放射性地标记的抗体，其中方案中的每个剂量可以包含为特定患者定制的组合物。

抗体或其它生物学递送媒介物的标记的级分和未标记的级分的本发明组合使得组合物可以为特定患者定制，其中抗体的辐射剂量和蛋白剂量各自基于至少一个患者特定参数为该患者个性化。这样，可以为特定患者制备每瓶的组合物，其中将小瓶的全部内容物以单剂量递送给该患者。当治疗方案需要多剂量时，可以将每个剂量配制成小瓶中的患者特异性剂量以作为“单剂量”(即，一次施用小瓶中的全部内容物)施用给患者。可以以类似的方式配制后续剂量，使得方案中的每个剂量在单剂量容器中提供患者特异性剂量。

本文中使用的术语”受试者”包括、但不限于哺乳动物诸如人、非人灵长类动物、狗、猫、马、绵羊、山羊、牛、兔、猪、大鼠和小鼠。在受试者是人类的情况下，受试者可以是任何年龄。例如，受试者可以是60岁或以上、65岁或以上、70岁或以上、75岁或以上、80岁或以上、85岁或以上或90岁或以上。可替换地，受试者可以是50岁或更小、45岁或更小、40岁或更小、35岁或更小、30岁或更小、25岁或更小或20岁或更小。对于患有癌症的人类受试者，受试者可以是新诊断的、或复发的和/或难治的、或在缓解中。

本文中使用的“治疗”患有癌症的受试者应当包括、但不限于：(i)减缓、停止或逆转癌症的进展，(ii)减缓、停止或逆转癌症症状的进展，(iii)降低癌症复发的可能性，和/或(iv)降低癌症症状复发的可能性。根据某些优选方面，治疗患有癌症的受试者意味着(i)逆转癌症的进展，理想地达到消除癌症的程度，和/或(ii)逆转癌症症状的进展，理想地达到消除症状的程度，和/或(iii)减少或消除复发的可能性(即巩固，其理想地导致任何剩余癌细胞的破坏)。

在本发明的上下文中，“化学治疗剂”是指抑制或杀死生长中的细胞并且可以被用于或被批准用于治疗癌症的化学化合物。示例性的化学治疗剂包括在核分裂或细胞原生质分裂的水平防止、干扰、破坏或延迟细胞分裂的细胞抑制剂。这样的试剂可以稳定微管，诸如紫杉烷，特别是多西他赛或紫杉醇，和埃博霉素，特别是埃博霉素A、B、C、D、E和F，或者可以使微管失稳，诸如长春花生物碱，特别是长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁和长春瑞滨。

“治疗有效量”或“有效量”表示有效达到期望的治疗结果所需的剂量和时间段的量。治疗有效量可以根据诸如疾病状态、个体的年龄、性别和体重以及治疗剂或治疗剂组合在个体中引起期望的应答的能力等因素而变化。有效的治疗剂或治疗剂组合的示例性指标包括，例如，改善的患者健康状况，减轻的肿瘤负荷，阻止或减慢的肿瘤生长，和/或不存在癌细胞向身体其它部位的转移。根据某些方面，“治疗有效量”或“有效量”表示这样的抗体的量：其可以耗竭表达该抗体所靶向或反应的抗原的细胞或造成所述细胞的总数的减少，或可以抑制表达抗原的细胞的生长。

如本文中使用的，关于表达CD33、CD38或CD45的细胞的“耗竭”应指降低过表达CD33、CD38或CD45的至少一种细胞的群体(例如，至少一种受试者的外周血淋巴细胞，或至少一种受试者的骨髓淋巴细胞)。根据本发明的某些方面，通过测量受试者的外周血淋巴细胞水平来确定受试者的淋巴细胞减少。这样，并举例来说，如果至少一种受试者的外周血淋巴细胞的群体降低，例如降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或99％，则受试者的淋巴细胞群体被耗竭。

“抑制生长”表示，与在没有治疗剂或治疗药物的组合存在下相同细胞或组织的生长的减少或延迟相比，当与治疗剂或治疗剂或药物的组合接触时，在体外或在体内恶性细胞或组织(例如，肿瘤)的生长的可测量的减少或延迟。体外或体内恶性细胞或组织的生长的抑制可以是至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

术语“免疫检验点疗法”表示能够以正或负方式调节免疫检验点蛋白的功能的分子(特别是抗原呈递细胞(APC)诸如癌细胞和免疫T效应细胞之间的相互作用)。术语“免疫检验点”表示直接或间接参与免疫途径的蛋白，其在正常生理条件下对于防止失控的免疫反应并因此对于维持自身耐受性和/或组织保护而言是至关重要的。本文所述的一种或多种免疫检验点疗法可以独立地在T细胞介导的免疫的任何步骤发挥作用，包括抗原特异性细胞的克隆选择、T细胞活化、增殖、转运至抗原部位和炎症、执行直接的效应子功能以及通过细胞因子和膜配体的信号传递。这些步骤中的每一个通过平衡细调应答的刺激性和抑制性信号来进行调节。在本发明的上下文中，该术语涵盖能够至少部分地下调抑制性免疫检验点(拮抗剂)的功能的免疫检验点疗法和/或能够至少部分地上调刺激性免疫检验点(激动剂)的功能的免疫检验点疗法。

“药学上可接受的盐”表示碱性化合物(例如，包括碱性氨基的那些化合物)的酸加成盐，以及酸性化合物(例如，包括羧基的那些化合物)的碱式盐，以及包括酸性和碱性部分的化合物的两性盐，使得这些盐适合于体内施用，优选对人施用。各种有机和无机酸可以用于形成酸加成盐。药学上可接受的盐衍生自本领域众所周知的多种有机和无机抗衡离子。药学上可接受的盐包括，当分子含有碱性官能团时，仅作为示例，盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸酯、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等；和当分子含有酸性官能团时，仅作为示例，钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵、N-甲基吗啉鎓等。在一个实施方案中，依泽替司他(ezatiostat)的药学上可接受的盐是盐酸依泽替司他。

本文中使用的“协同组合”是可以提供与单一疗法的有效性相当的治疗效果的单一疗法的组合，同时减少不利的副作用，例如对非目标组织的损害、免疫状态和其它临床指标。可替换地，协同组合可以提供改善的有效性，其可以通过肿瘤细胞总数、到复发的时间长度以及患者健康的其它指标来测量。

本发明的协同组合组合了放射免疫疗法和免疫检验点疗法。本发明的协同组合组合了超过一种放射免疫疗法和一种或多种免疫检验点疗法。

尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可以用在本文描述的实践或试验中，但是下面描述了合适的方法和材料。

本发明的放射免疫疗法包括用放射性核素标记的抗体，其中所述抗体可以是重组抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或其片段。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法包括针对任何已知的肿瘤特异性抗原的抗体或针对可靶向特定细胞类型的抗原的抗体。示例性的抗原包括间皮素、TSHR、CD19、CD123、CD22、CD33、CD30、CD45、CD171、CD138、CS-1、CLL-1、GD2、GD3、B-细胞成熟抗原(BCMA)、Tn Ag、前列腺特异性的膜抗原(PSMA)、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、白介素-11受体a(IL-l lRa)、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、血小板-衍生的生长因子受体-β(PDGFR-β)、SSEA-4、CD20、叶酸盐受体α(FRa)、ERBB2(Her2)、ERBB3(Her3)、死亡受体5(DR5)、MUCl、表皮生长因子受体(EGFR)、EGFRvIII、NCAM、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gplOO、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、岩藻糖基GM1、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、叶酸盐受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD179a、ALK、Poly唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、legumain、HPV E6、E7、MAGE Al、MAGEA3、MAGEA3/A6、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关的抗原1、prostein、存活素和端粒末端转移酶、PCTA-l/半乳糖凝集素8、KRAS、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、Cyclin B l、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒末端转移酶逆转录酶、RU1、RU2、肠羧基酯酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、GPA7和IGLL1。

根据某些方面，放射免疫疗法包括针对在急性骨髓性白血病中突变的基因的蛋白产物的抗体，包括：NPM1、Flt3、TP53、CEBPA、KIT、N-RAS、MLL、WT1、IDH1/2、TET2、DNMT3A和ASXL1。

根据某些方面，抗原可以选自具有标准或甚至高突变负荷的肿瘤，例如黑素瘤、肾细胞癌和肺癌。

根据某些方面，抗原可以选自已知在免疫学上冷的肿瘤。也就是说，抗原可以选自具有低突变负荷的肿瘤，例如由胰腺肿瘤、神经母细胞瘤和血液学疾病表达的抗原。

根据某些方面，抗原可以是造血起源的，例如存在于血液细胞或具有造血起源的肿瘤细胞上的抗原。

根据某些方面，抗原可以选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD45、CD123、CD138、CS-1、B-细胞成熟抗原(BCMA)、MAGEA3、MAGEA3/A6、KRAS、CLL1、MUC-1、HER2、HER3、DR5、IL13Rα2和EphA2、EpCam、GD2、GPA7、PSCA、EGFR、EGFRvIII、ROR1、GPC3、CEA、间皮素和PSMA。

根据某些方面，抗原可以选自已知在涉及血液学疾病的细胞上表达的抗原，例如，CD33、CD38或CD45。

根据某些方面，抗原可以选自CD38、CD33、CD45、DR5或HER3。

多发性骨髓瘤细胞均匀地过表达CD38，它是一种45kD跨膜糖蛋白。人CD38具有在GenBank登录号NP_001766和SEQ ID NO:1(图1)中所示的氨基酸序列。如在图1中所示，CD38是单次穿过的II型膜蛋白，其氨基酸残基1-21代表细胞溶质的结构域，氨基酸残基22-42代表跨膜结构域，且残基43-300代表CD38的细胞外结构域。CD38蛋白是一种双功能胞外酶，其可以催化NAD

此外，已经描述了CD38在不同来源的上皮/内皮细胞上的表达，包括前列腺的腺上皮、胰岛的胰岛细胞、腺(包括腮腺)的导管上皮、支气管上皮细胞、睾丸和卵巢的细胞以及结肠直肠腺癌的肿瘤上皮。因此，其中也可能涉及CD38表达的疾病包括、但不限于肺的支气管上皮癌、由乳房的导管和小叶中的上皮内膜的恶性增殖演变而来的乳腺癌、由b-细胞演变而来的胰腺肿瘤(例如，胰岛素瘤)和从肠中的上皮演变而来的肿瘤(例如，腺癌和鳞状细胞癌)。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法可以包含针对CD38的单克隆抗体。示例性的单克隆抗体包括达雷木单抗、MOR202或SAR650984，已发现它们各自结合CD38的细胞外区域的不同部分，并表现出不同的临床应答(例如，抗肿瘤作用)。达雷木单抗、MOR202或SAR650984可分别作为

白血病干细胞已经关于急性骨髓性白血病(AML)特别确定地表征，它表达一组特征性的细胞表面抗原，尤其包括CD33。CD33抗原在大多数AML病例的胚细胞上表达；约85-90％的AML病例表达CD33抗原。此外，CD33抗原实际上在所有慢性骨髓性白血病(CML)病例上表达。超过60岁的患者具有预后不良，只有10％到15％的患者表现出AML的4年无病生存期。AML患者的这种高复发率和老年患者的预后不良凸显了对优先靶向CD33

人CD33具有在GenBank登录号NP_001763和SEQ ID NO:2(图2)中所示的氨基酸序列。CD33是67Kd I型跨膜受体糖蛋白，其可以作为唾液酸依赖性的细胞粘附分子起作用。CD33具有一个长的N-端细胞外结构域、一个螺旋跨膜结构域和一个短的C-端细胞质结构域。CD33在早期髓样祖细胞和髓样白血病(例如，急性骨髓性白血病,AML)细胞上表达，而不在干细胞上表达。

参考图2，氨基酸残基1-259代表细胞外结构域，氨基酸260-282代表螺旋跨膜结构域，且氨基酸283-364代表细胞溶质结构域(细胞内的)。在CD33的细胞外结构域中至少存在三种已知的单核苷酸多态性(“SNP”)(即，W22R、R69G、S128N)。因此，智人CD33的细胞外结构域可以具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列以及这些SNP中的任何一种或多种。

最近的研究表明，CD33通过对酪氨酸激酶驱动的信号传递途径的减弱作用而在炎症和免疫应答的调节中发挥作用。例如，体外研究已经证实，CD33以唾液酸配体依赖性的和SOCS3依赖性的方式组成性地遏制人单核细胞对促炎细胞因子诸如IL-1β、TNF-α和IL-8的产生。相反，细胞表面CD33的减少或唾液酸结合的中断可以增加p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性，并增强细胞因子分泌以及细胞因子诱导的细胞增殖。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法可以包含针对CD33的单克隆抗体。示例性的单克隆抗体包括林妥珠单抗(HuM195)、吉妥珠单抗和伐达妥昔单抗，已发现它们各自结合CD33细胞外区域的不同部分。此外，这些抗体中的每一种表现出不同的临床应答(例如，抗肿瘤作用)。吉妥珠单抗可作为Mylotarg

例如，抗体林妥珠单抗(HuM195)已经在AML的治疗中表现出抗白血病作用。HuM195是最初由Protein Design Labs,Inc.(Fremont,California)生产的重组的人源化的抗-CD33单克隆抗体。M195是结合CD33的单克隆IgG2a抗体。M195来源于用活的人类白血病成髓细胞免疫的小鼠。通过将M195的互补性决定区移植到人IgG1框架和主链中来构建HuM195。HuM195使用人外周血单核细胞作为效应物诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。四个临床试验已经在患有复发性或难治性AML和CML的患者中研究了单独的天然的(即未缀合的)HuM195。发热、发冷和恶心是最常见的毒性。未见人抗-人抗体应答。在某些患者中观察到了有益的生物学活性，即骨髓胚细胞的减少。受益最大的那些患者在治疗开始时具有较少的胚细胞，从而提示，HuM195可能在治疗最小残留的或细胞减少的疾病中是更有效的。

大多数血液学来源的恶性肿瘤(无论是髓样还是淋巴样衍生的)不同程度地在肿瘤细胞表面上表达CD45。这包括白血病(诸如急性骨髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性混合谱系白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病和巨粒淋巴细胞白血病)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性障碍(真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性骨髓纤维化和慢性骨髓性白血病)、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、MGUS和类似的障碍、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、原发性纵隔大B细胞性淋巴瘤、弥漫性大B细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、转化的滤泡性淋巴瘤、脾边缘带淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤和其它B-细胞恶性肿瘤。

在非造血来源的组织上未发现CD45，使其成为治疗这些恶性肿瘤的良好靶标。在抗-CD45鼠抗体的几个克隆中，BC8识别CD45抗原的所有人异形体(图3中所示的CD45 RABC异形体)，并因此为开发造血来源的人恶性肿瘤(包括白血病和淋巴瘤)的治疗剂提供了极好的靶标。因此，本发明的放射免疫疗法可以包含针对CD45的单克隆抗体。

根据某些方面，抗-CD45抗体可以包含BC8单克隆抗体，例如在美国专利号10,420,851(通过引用并入本文)中基本上详述的。包含BC8单克隆抗体的示例性组合物包括在WO2017/155937中详述的那些组合物。

BC8单克隆抗体可以具有包含在SEQ ID NO:15(图10)中所示的氨基酸序列的轻链。BC8单克隆抗体可以具有包含在SEQ ID NO:4(图8)中所示的氨基酸序列的轻链可变区。BC8单克隆抗体可以具有包含在SEQ ID NO:12(图9)中所示的N-端氨基酸序列的轻链。根据某些方面，轻链包括至少一个互补性决定区，所述互补性决定区包含在SEQ ID NO:6、SEQID NO:7或SEQ ID NO:8(图9)中所示的氨基酸序列。根据某些方面，轻链包含在SEQ ID NO:12中所示的N-端氨基酸序列和至少一个互补性决定区，所述互补性决定区包含在SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8(图9)中所示的氨基酸序列。

BC8单克隆抗体可以具有包含在SEQ ID NO:17(图11)中所示的氨基酸序列的重链。BC8单克隆抗体可以具有包含在SEQ ID NO:5(图8)中所示的氨基酸序列的重链可变区。BC8单克隆抗体可以具有包含在SEQ ID NO:13(图9)中所示的N-端氨基酸序列的重链。根据某些方面，重链包括至少一个互补性决定区，所述互补性决定区包含在SEQ ID NO:9、SEQID NO:10或SEQ ID NO:11(图9)中所示的氨基酸序列。根据某些方面，重链包含在SEQ IDNO:13中所示的N-端氨基酸序列和至少一个互补性决定区，所述互补性决定区包含在SEQID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11(图9)中所示的氨基酸序列。

如在图11中所示，在BC8单克隆抗体重链的位置141(相对于N-端氨基酸)处的氨基酸可以是ASP或ASN。这样，BC8抗体分子的群体可以包括在位置141处的ASP和ASN。

如在图10和11中所示，轻链和重链分别包括前导序列和衍生自特定小鼠杂交瘤的恒定区。这些区域中的任何一个或多个可用来自人抗体的可比较区域(即，人前导序列、人IgG1-4恒定区等)置换。

这些抗体消除抗原阳性细胞(诸如CD45-、CD38-或CD33-阳性的细胞)的建议方法包括抗体依赖性的细胞的细胞毒性(ADCC)、补体依赖性的细胞毒性(CDC)和细胞凋亡。

根据某些方面，放射免疫疗法可以直接参与细胞凋亡途径，例如DR5(死亡受体5；也被称作TRAIL-R2，肿瘤坏死因子相关的细胞凋亡诱导配体受体2)的激动剂。已知DR5当被其配体TRAIL(肿瘤坏死因子相关的细胞凋亡诱导配体)激活时会触发细胞凋亡。虽然发现DR5在实体瘤内的内皮细胞中过表达，但在正常组织中却没有，经常发现肿瘤细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡具有抗性。已经注意到针对受体的抗体对DR5的激活会导致肿瘤偏向的细胞死亡。因此，DR5代表放射免疫疗法的极好靶标，既可以特异性地靶向肿瘤细胞，又可以诱导这些细胞的细胞凋亡。抗DR5的示例性抗体至少包括来自Daiichi Sankyo的替加珠单抗(CD-1008)，来自Amgen的可那木单抗(AMG 655)和来自Genentech的drozitumab。在小鼠模型中的初步研究可以使用替代小鼠抗体TRA-8。

根据某些方面，放射免疫疗法可以包含针对人表皮生长因子受体3(HER3)的抗体。HER3是一种I型跨膜糖蛋白，其为酪氨酸激酶受体的成红细胞癌基因B(ErbB)家族的成员(EGFR、HER2、HER3和HER4)。通过HER3的信号传递可以以依赖配体或不依赖配体的方式被激活。在不存在配体的情况下，HER3受体分子通常以单体的形式在细胞表面表达，其构象可防止受体二聚化，其中子结构域II的二聚化环与子结构域IV的口袋发生分子内接触。HER3配体(诸如神经调节蛋白(NRG)例如NRG1(也被称作调蛋白、HRG)或NRG2)与细胞外区域的子结构域I和III的结合会造成构象变化，其导致子结构域II的二聚化环的暴露，从而促进受体二聚化和信号传递。

HER3中的某些癌症相关突变可能破坏无活性“封闭”构象的形成所需的子结构域II和IV的相互作用，并从而在没有配体结合的情况下造成二聚化环的组成性呈现和HER3介导的信号传递的激活。靶向HER3的抗体可用于靶向特定癌细胞，特别是某些实体癌。抗HER3的示例性抗体包括单克隆抗体诸如来自Daiichi Sankyo的Patritumab，来自MerrimackPharmaceuticals的Seribantumab(MM-121)，来自Roche的Lumretuzumab，来自Novartis的Elgemtumab，和来自GlaxoSmithKline的GSK2849330，以及抗HER3/HER2的双特异性抗体诸如来自Merrimack Pharmaceuticals的MM-111和MM-141/Istiratumab，来自Merus NV的MCLA0-128，和来自Genetech的MEHD7945A/Duligotumab。

“抗体依赖性的细胞的细胞毒性”、“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是诱导细胞死亡的机制，该机制依赖于抗体包被的靶细胞与具有裂解活性的效应细胞(诸如天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞)之间的相互作用，该相互作用通过在效应细胞上表达的Fcγ受体(FcγR)。例如，NK细胞表达FcγRIIIa，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcvRIIIa。抗体包被的靶细胞(例如表达CD33的细胞)的死亡由于效应细胞活性(通过膜孔形成蛋白和蛋白酶的分泌)而发生。

“补体依赖性的细胞毒性”或“CDC”表示诱导细胞死亡的机制，其中靶标结合抗体的Fc效应物结构域结合并激活补体组分C1q，后者继而激活导致靶细胞死亡的补体级联。补体的活化还可导致补体组分在靶细胞表面上的沉积，其通过结合白细胞上的补体受体(例如，CR3)而促进ADCC。

“细胞凋亡”表示程序性细胞死亡的机制，其中与靶细胞结合的抗体破坏完整的细胞信号传递途径并导致细胞自毁。

为了评估与特定抗原结合的抗体的ADCC活性，可以将抗体与免疫效应细胞组合地分别添加给表达抗原的细胞，所述免疫效应细胞可以被抗原-抗体复合物激活，从而导致抗原表达细胞的细胞裂解。通常通过标记(例如放射性底物、荧光染料或天然细胞内蛋白)从裂解的细胞的释放来检测细胞裂解。用于这样的测定的示例性效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和NK细胞。

例如，在抗-CD33抗体的ADCC活性的示例性测定中，可以用

在细胞毒性的示例性测定中，可以将四氮唑盐添加给用各种量的抗-CD33抗体处理过的表达CD33的细胞。在活的线粒体中，XTT被线粒体脱氢酶还原为橙色产物并转移到细胞表面。可以对橙色产物进行光学定量，并反映活细胞的数量。可替换地，已知来自活细胞的酯酶将无色的钙黄绿素(calcenin)水解为荧光分子。可以对荧光进行测量和定量，并反映样品中活细胞的数量。可以使用碘化丙啶测量死细胞的总量，碘化丙锭被完整的膜从活细胞排除。死细胞中由碘化丙啶引起的荧光可以通过流式细胞计量术定量。

为了评估CDC，可能需要在细胞毒性测定中包括补体蛋白。细胞凋亡诱导的测量不需要在细胞毒性测定中添加NK细胞或补体蛋白。

放射免疫疗法可以包括多特异性抗体。例如，放射免疫疗法可以包括针对任何两种不同的肿瘤特异性抗原或同一抗原的两种不同表位的双特异性抗体。例如，放射免疫疗法可以包含针对CD33的第一表位和CD33的第二表位的多特异性抗体，或针对CD33的表位和一种或多种其它不同抗原的表位的多特异性抗体，例如选自上面提出的清单的抗原(例如，CD38、CD45等)。作为另一个例子，放射免疫疗法可以包括针对HER3/HER2的双特异性抗体。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法包括多特异性抗体，所述多特异性抗体至少包含特异性结合第一抗原的表位的第一靶标识别组分和特异性结合第一抗原的不同表位或第二抗原的表位的第二靶标识别组分。多特异性抗体可以是重组抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或抗体片段。

第一靶标识别组分可包含以下之一：第一全长重链和第一全长轻链，第一Fab片段，或第一单链可变片段(scFv)。例如，当第一靶标识别组分针对CD33时，第一靶标识别组分可以衍生自林妥珠单抗(HuM195)、吉妥珠单抗或伐达妥昔单抗。第二靶标识别组分可包含以下之一：第二全长重链和第二全长轻链，第二Fab片段，或第二单链可变片段(scFv)。此外，第二靶标识别组分可以衍生自以上所列的其它不同抗原中的任一种，或衍生自第一靶标识别组分的不同表位(即，相同抗原，不同表位)。

可替换地，本发明涵盖了包括施用超过一种放射免疫疗法的方法。例如，放射免疫疗法可以包含第一抗体和至少第二抗体，其中第一抗体和第二抗体识别相同抗原的不同表位或不同抗原。例如，放射免疫疗法可以包含针对CD33的至少一个表位的第一抗体和针对与第一抗体不同的CD33的表位的第二抗体，或针对不同抗原的表位的第二抗体，例如选自上面呈现的列表的抗原。

尽管本文以示例性方式提及CD33，但这样的提及应当理解为包括对本文公开的放射免疫疗法的任何靶标的提及。

本发明的放射免疫疗法包括用放射性核素标记的抗体，使得在用放射免疫疗法治疗患者时，放射性核素被定位至表达抗原的细胞，并诱导对那些细胞的损伤并可能杀死它们。除了抗体可以杀死细胞的许多机制外，从放射性核素标记的抗体发射的电离辐射还可以杀死与抗体所结合的抗原表达细胞非常接近的细胞。放射性核素发射出放射性颗粒，其可以损伤细胞DNA直至细胞修复机制不能使细胞继续存活的程度。因此，如果抗原表达细胞参与肿瘤，则放射性核素可以有益地杀死肿瘤细胞。

可用于诱导对诸如癌细胞之类的细胞的这种损伤的放射性核素通常是高能发射体。高能放射性核素优选在短范围内起作用，使得细胞毒性效应局限于靶细胞。以此方式，以更局部的方式递送辐射疗法以减少对非靶向或非癌细胞的损伤。

可用于标记用于本发明的放射免疫疗法的抗体的放射性核素包括

可以通过本领域已知的任何方法用放射性核素标记本发明的抗体。根据本发明的一个方面，放射性核素可以通过与抗体缀合的螯合剂连接或螯合，例如基本上在WO 2019/027973(通过引用整体并入本文)中描述。也就是说，可以如下制备放射性核素标记的抗体：首先形成螯合剂缀合的抗体(“缀合的抗体”)，然后将放射性核素与缀合的抗体螯合以形成放射性地标记的抗体。可以在缀合后的任何时候使放射性核素被缀合的抗体螯合。

可用于本发明中的螯合剂是具有螯合金属离子以及共价结合生物载体(诸如抗体)的能力的双重功能的化合物。众多螯合剂是本领域已知的。适用于本发明的示例性螯合剂包括、但不限于螯合剂诸如S-2-(4-异硫氰酰基苄基)-1,4,7,10四氮杂环十二烷四乙酸(p-SCN-Bn-DOTA),二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)；乙二胺四乙酸(EDTA)；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N′,N″,N′″-四乙酸(DOTA)；对异硫氰酰基苄基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(p-SCN-Bz-DOTA)；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N′,N″-三乙酸(DO3A)；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(2-丙酸)(DOTMA)；3,6,9-三氮杂-12-氧杂-3,6,9-三羧甲烯-10-羧基-13-苯基-十三烷酸(“B-19036”)；1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N′,N″-三乙酸(NOTA)；1,4,8,11-四氮杂环十四烷-N,N′,N″,N′″-四乙酸(TETA)；三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)；反式-1,2-二氨基己烷四乙酸(CYDTA)；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-(2-羟丙基)-4,7,10-三乙酸(HP-DO3A)；反式-环己烷-二胺四乙酸(CDTA)；反式(1,2)-环己烷二乙烯三胺五乙酸(CDTPA)；1-氧杂-4,7,10-三氮杂环十二烷-N,N′,N″-三乙酸(OTTA)；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四{3-(4-羧基)-丁酸}；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(乙酸-甲基酰胺)；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸)；及其衍生物。

根据本发明的某些方面，放射性地标记的抗体可以稳定足够长的时间段(例如数天或数周)以产生并施用给患者，但是放射性核素可以在抗体已经到达靶细胞(表达抗原的细胞)以后并在可以对正常细胞造成损伤之前使抗体衰退。例如，已经发现，大于75％的

根据本发明的某些方面，可以通过国际专利申请公开号WO2016/187514中公开的方法将放射性地标记的抗体制备为组合物。此外，可以通过同一出版物中公开的方法来施用放射性地标记的抗体。

根据本发明的某些方面，所述抗体可以用

本发明的免疫检验点疗法包括完全地或部分地减少、抑制、干扰或调节一种或多种检验点蛋白的分子。检验点蛋白调节T-细胞活化或功能。免疫检验点疗法可以通过结合或以其它方式废除检验点抑制来解除现有免疫应答抑制的阻止。免疫检验点疗法可以包括单克隆抗体、人源化抗体、全人抗体、抗体片段、小分子治疗剂或其组合。

示例性的免疫检验点疗法可以特异性地结合并抑制检验点蛋白，例如抑制性受体CTLA-4、PD-1、TIM-3、VISTA、BTLA、LAG-3和TIGIT和/或活化受体CD28、OX40、GITR、CD137、CD27和HVEM。另外，免疫检验点疗法可以结合任何前述检验点蛋白的配体，诸如PD-L1、PD-L2、PD-L3和PD-L4(PD-1的配体)；CD80和CD86(CTLA-4的配体)；CD137-L(CD137的配体)；和GITR-L(GITR的配体)。其它示例性的免疫检验点疗法可以结合检验点蛋白诸如CD226、B7-H3、B7-H4、BTLA、TIGIT、GALS、KIR、2B4(属于CD2分子家族并在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也被称作BY55)和CGEN-15049。

免疫检验点过程的核心是CTLA-4和PD-1免疫检验点途径。CTLA-4和PD-1途径被认为在免疫应答的不同阶段起作用。CTLA-4被认为是免疫检验点抑制剂的“领导者”，因为它在原初T-细胞活化的初始阶段(通常在淋巴结中)会停止潜在的自身反应性T细胞。PD-1途径在免疫应答的晚期阶段(主要是在外周组织中)调节先前激活的T细胞。此外，已经证实，进展中的癌症患者缺乏肿瘤细胞或肿瘤浸润性免疫细胞对PD-L1的上调。因此，靶向PD-1途径的免疫检验点疗法可能在这种免疫抑制轴可操作的肿瘤中特别有效，并且朝着免疫保护环境逆转平衡会重新点燃并增强先前存在的抗肿瘤免疫应答。PD-1阻断可通过多种机制完成，包括结合PD-1或其配体PD-L1的抗体。

例如，免疫检验点疗法可以包含PD-1检验点的抑制剂，其可减少、阻断、抑制、废除或干扰由PD-1与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-L1和PD-L2)的相互作用产生的信号转导。此外，PD-1检验点的抑制剂可以是抗-PD-1抗体、抗原结合片段、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、废除或干扰由PD-1与PD-L1和/或PD-L2的相互作用产生的信号转导的其它分子。在某些实施方案中，PD-1检验点抑制剂减少由在T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的或通过它的负共刺激信号，从而使功能失调的T-细胞具有更少的功能失调(例如，增强对抗原识别的效应物应答)。在某些实施方案中，所述PD-1检验点抑制剂是抗-PD-1抗体。

因而，根据本发明的某些方面，免疫检验点疗法可以包含针对CTLA-4、PD-1或PD-L1的单克隆抗体。

例如，免疫检验点抑制剂可以是PD-1的抑制剂。免疫检验点抑制剂可以是抗-PD-1抗体，诸如纳武单抗。例如，在美国专利号7,029,674中公开的PD-1生物活性的抑制剂(或其配体)。针对PD-1的示例性抗体包括：来自BioXcell的抗-小鼠PD-1抗体克隆J43(目录号BE0033-2)；来自BioXcell的抗-小鼠PD-1抗体克隆RMP1-14(目录号BE0146)；小鼠抗-PD-1抗体克隆EH12；Merck的MK-3475抗-小鼠PD-1抗体(

根据某些方面，免疫检验点抑制剂是PD-L1的抑制剂。示例性的免疫检验点抑制剂包括抗体(例如，抗-PD-L1抗体)、RNAi分子(例如，抗-PD-L1 RNAi)、反义分子(例如，抗-PD-L1反义RNA)、显性失活的蛋白(例如，显性失活的PD-L1蛋白)和小分子抑制剂。示例性的抗-PD-L1抗体包括克隆EH12。针对PD-L1的示例性抗体包括：Genentech的MPDL3280A(RG7446)；来自BioXcell的抗-小鼠PD-L1抗体克隆10F.9G2(目录号BE0101)；来自Bristol-Meyer'sSquibb的抗-PD-L1单克隆抗体MDX-1105(BMS-936559)和BMS-935559；MSB0010718C；小鼠抗-PD-L1克隆29E.2A3；和AstraZeneca的MEDI4736(度伐单抗)。

根据某些方面，免疫检验点抑制剂是PD-L2的抑制剂或减少PD-1和PD-L2之间的相互作用。示例性的免疫检验点抑制剂包括抗体(例如，抗-PD-L2抗体)、RNAi分子(例如，抗-PD-L2 RNAi)、反义分子(例如，抗-PD-L2反义RNA)、显性失活的蛋白(例如，显性失活的PD-L2蛋白)和小分子抑制剂。抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、去免疫的抗体和Ig融合蛋白。

根据某些方面，免疫检验点抑制剂是CTLA-4的抑制剂，诸如抗-CTLA-4抗体。根据一个方面，免疫检验点抑制剂可以是伊匹木单抗。抗-CTLA-4抗体可以阻断CTLA-4与在抗原呈递细胞上表达的CD80(B7-1)和/或CD86(B7-2)的结合。针对CTLA-4的示例性抗体包括：Bristol Meyers Squibb的抗-CTLA-4抗体伊匹木单抗(也被称作

根据某些方面，免疫检验点疗法包括淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)的抑制剂，诸如IMP321，即活化树突细胞的可溶性Ig融合蛋白；B7的抑制剂，诸如针对B7-H3(例如，MGA271)和B7-H4的抗体；和针对TIM3(即，T-细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)的抑制剂。

考虑将任何合适的免疫检验点抑制剂与本文公开的组合物、剂型和方法一起使用。免疫检验点抑制剂的选择取决于多种因素。例如，要考虑的因素包括免疫检验点抑制剂的任何其它药物相互作用，以及可以采用免疫检验点抑制剂的时间长度。在某些情况下，免疫检验点抑制剂是可以长时间(例如长期)施用的免疫检验点抑制剂。本发明的免疫检验点疗法可以包括免疫刺激剂、T细胞生长因子、白介素诸如IL-7或IL-15、抗体、疫苗诸如树突细胞(DC)疫苗或它们的任意组合。

根据本发明的某些方面，免疫检验点疗法可以包括超过一种免疫检验点蛋白的调节剂。这样，免疫检验点疗法可以包含针对第一免疫检验点蛋白的第一抗体或抑制剂和针对第二免疫检验点蛋白的第二抗体或抑制剂。例如，根据本发明的某些方面，第一抑制剂可以是针对PD-1的抗体，第二抑制剂可以是针对CTLA-4或PD-L1或PD-L2的抗体。

本发明的组合物和方法可以用于治疗增生性疾病或障碍。根据本发明的某些方面，增生性疾病或障碍可以是癌症，包括、但不限于，血液学恶性肿瘤、实体瘤、原发性或转移性肿瘤。

例如，增生性障碍可以是一种或多种血液学癌症。示例性的血液学癌症至少包括B-细胞急性淋巴样白血病、T-细胞急性淋巴样白血病、急性淋巴样白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、B-细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突细胞赘生物、伯基特氏淋巴瘤、弥漫性大B细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞-或大细胞-滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴组织增生病症、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞赘生物、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、无症状的骨髓瘤、郁积型多发性骨髓瘤、无痛性骨髓瘤、意义未定的单克隆丙种球蛋白病、浆细胞恶性增生、孤立性骨髓瘤、孤立性浆细胞瘤、髓外浆细胞瘤、多发性浆细胞瘤、全身性淀粉样蛋白轻链淀粉样变性、POEMS综合征和它们的组合。

增生性障碍可以是一种或多种实体癌症。示例性的实体癌症至少包括骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤的或眼内的恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、直肠癌、肛门区域的癌症、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞性淋巴瘤、弥漫性大B细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、转化的滤泡性淋巴瘤、脾边缘带淋巴瘤、食管癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童期的实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管的癌症、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T-细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的那些)、其它B-细胞恶性肿瘤和它们的任意组合。

根据本发明的某些方面，血液学癌症或恶性肿瘤可以是多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和骨髓增生性赘生物。

本发明包括通过施用治疗有效量的放射免疫疗法和治疗有效量的免疫检验点疗法在受试者中治疗、改善至少一种症状或适应症或者减轻其严重程度的方法，或抑制癌症的生长的方法。本发明包括通过施用治疗有效量的放射免疫疗法和治疗有效量的免疫检验点疗法在受试者中启动、增强或延长抗肿瘤应答的方法。本发明包括通过施用治疗有效量的放射免疫疗法和治疗有效量的免疫检验点疗法在受试者中治疗增生性疾病或障碍的方法。

根据本发明的某些方面，所述方法可以治疗患有具有标准或甚至高突变负荷的肿瘤(诸如黑素瘤、肾细胞癌和肺癌)的患者，其中所述患者是对标准免疫疗法的差应答者或无应答者(例如，患有T-细胞耗竭的患者)。

根据某些方面，所述方法可以治疗患有已知免疫学上冷的肿瘤的患者。也就是说，在该方法中施用的放射免疫疗法可以靶向来自具有低突变负荷的肿瘤的抗原，例如由胰腺肿瘤、神经母细胞瘤和血液学疾病表达的抗原。

根据某些方面，所述方法可以治疗患有具有造血起源的肿瘤或障碍的患者。也就是说，在所述方法中施用的放射免疫疗法可以靶向来自具有造血起源的血液细胞或肿瘤细胞的抗原。

根据某些方面，可以同时施用放射免疫疗法和免疫检验点疗法。这样，它们可以作为单一组合物提供，或者它们可以作为同时施用的单独组合物提供。该组合可以以单剂量施用。可替换地，可以根据定量施用计划来施用所述组合，所述定量施用计划选自在治疗阶段中每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、20、24或28天一次，其中治疗阶段包括至少两个剂量。

根据某些方面，可以依次施用放射免疫疗法和免疫检验点疗法。此外，可以根据特定定量施用计划来施用每种治疗方案，即，放射免疫疗法和免疫检验点疗法，其中所述方法提供了根据定量施用计划依次施用每种疗法，即，在开始免疫检验点疗法定量施用计划之前完成放射免疫疗法定量施用计划，或反之亦然。

例如，在施用免疫检验点疗法之前，可以在一个或多个剂量中施用放射免疫疗法，如在图4中所示，或在施用放射免疫疗法之前，可以在一个或多个剂量中施用免疫检验点疗法，如在图5中所示。

根据某些方面，可以向患者施用超过一种放射免疫疗法，其中可以同时或依次施用第一和第二放射免疫疗法。免疫检验点疗法可以在第一和第二放射免疫疗法之前或之后施用，或者可以在第一放射免疫疗法之后和第二放射免疫疗法之前施用。

根据本发明的某些方面，可以根据同时进行的特定定量施用计划来施用放射免疫疗法和免疫检验点疗法。也就是说，可以在免疫检验点疗法的施用计划期间施用放射免疫疗法的剂量，或反之亦然。例如，放射免疫疗法和检验点免疫疗法的剂量可以如在图6和图7中所示给出，其中每种治疗剂的单独剂量在重叠定量施用计划中施用。

根据本发明的方法的某些方面，可以以单剂量施用放射免疫疗法。可替换地，可以根据定量施用计划来施用放射免疫疗法，所述定量施用计划选自在治疗阶段中每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、20、24或28天一次，其中治疗阶段包括至少两个剂量。可以在每周计划中施用放射免疫疗法，例如每个工作日一次，而在周末(星期六或星期日)不施用。此外，每个剂量可以是相同的，或可以是不同的。例如，放射免疫治疗剂的第一剂量或剂量组可以大于(诱导剂量)其它剂量或剂量组(继续剂量)。

根据本发明的某些方面，可以以单剂量施用免疫检验点疗法。可替换地，可以根据定量施用计划来施用免疫检验点疗法，所述定量施用计划选自在治疗阶段中每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、20、24或28天一次，其中治疗阶段包括至少两个剂量。可以在每周计划中施用免疫检验点疗法，例如每个工作日一次，而在周末(星期六或星期日)不施用。此外，每个剂量可以是相同的，或可以是不同的。例如，免疫检验点治疗剂的第一剂量或剂量组可以大于(诱导剂量)其它剂量或剂量组(继续剂量)。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法的治疗有效量可以包括依赖于用于标记的所选放射性核素的放射剂量。例如，当放射性核素诸如

放射免疫疗法的有效剂量通常包含小于16mg/kg患者体重的蛋白剂量，诸如小于10mg/kg患者体重、或小于6mg/kg患者体重、或小于5mg/kg患者体重、或小于4mg/kg患者体重、或小于3mg/kg患者体重、或甚至小于2mg/kg患者体重。根据某些方面，蛋白剂量可以是0.1mg/kg至16mg/kg受试者体重，诸如0.1mg/kg至10mg/kg、或0.1mg/kg至6mg/kg、或0.1mg/kg至4mg/kg、或0.1mg/kg至2mg/kg、或0.5mg/kg至16mg/kg.或2mg/kg至16mg/kg、或4mg/kg至16mg/kg、或6mg/kg至16mg/kg。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法的有效剂量可以包含基于患者的体表面积的蛋白剂量，诸如小于10mg/m

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法的有效量可以是放射免疫疗法的最大耐受剂量(MTD)，其基于蛋白剂量和辐射剂量之一或两者。

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法可以包含抗体的放射性地标记的级分和抗体的未标记的(例如“裸的”)级分的混合物。未标记的级分可以包含与标记的级分相同的针对相同表位的抗体。以此方式，可以降低或设定放射免疫疗法的总放射性，同时可以改变总抗体浓度。例如，放射免疫疗法的总蛋白浓度和总放射性可以根据要治疗的疾病的确切性质、患者的年龄和体重、抗体的身份以及被选择用于标记单克隆抗体的标记(例如，放射性核素)而独立地变化。

这些免疫检验点疗法中的某些的示例性剂量包括0.1mg/kg至50mg/kg患者体重的单一剂量，诸如0.1-40mg/kg、或0.1-30mg/kg、或0.1-20mg/kg、或0.1-10mg/kg、或0.1-5mg/kg、或0.1-4mg/kg、或0.1-3mg/kg、或0.1-2mg/kg、或1-50mg/kg、或2-40mg/kg、或5-30mg/kg、或5-20mg/kg、或10-20mg/kg、或1-5mg/kg、或1-10mg/kg。例如，派姆单抗(抗-PD-1；

本发明的方法(其包括放射免疫疗法和免疫检验点疗法的施用)可以进一步包括施用一种或多种另外的治疗剂。另外的治疗剂可能与要治疗的疾病或病症有关。这样的施用可以与本文中详述的有效量的放射免疫疗法和免疫检验点疗法方案的施用同时、分开或相继。关于同时施用，可以适当地将药剂作为一种组合物或作为单独组合物施用。

示例性的另外治疗剂至少包括化学治疗剂、抗炎剂、免疫抑制剂、免疫调节剂或其组合。示例性的化疗剂和抗炎剂是本领域众所周知的，并且在本文公开的发明的范围内。

根据本发明的某些方面，一种或多种治疗剂可以包含抗骨髓瘤剂。示例性的抗骨髓瘤剂包括地塞米松、美法仑、多柔比星、硼替佐米、来那度胺、泼尼松、卡莫司汀、依托泊苷、顺铂、长春新碱、环磷酰胺和沙利度胺，其中几种在上面指出作为化学治疗剂、抗炎剂或免疫抑制剂。

可以根据本领域已知的任何标准剂量方案来施用治疗剂。例如，可以以在1至500mg/m

在本申请中公开了以下方面：

方面1：一种用于治疗具有增生性障碍的受试者的方法，所述方法包括:给所述受试者施用治疗有效量的免疫检验点疗法；和在至少一周以后，给所述受试者施用治疗有效量的放射免疫疗法。

方面2：一种用于治疗具有增生性障碍的受试者的方法，所述方法包括:给所述受试者施用治疗有效量的放射免疫疗法；和在至少一周以后，给所述受试者施用治疗有效量的免疫检验点疗法。

方面3：一种用于治疗具有增生性障碍的受试者的方法，所述方法包括:给所述受试者施用治疗有效量的放射免疫疗法；和给所述受试者施用治疗有效量的免疫检验点疗法。

方面4：根据方面1至3中的任一个的方法，其中放射免疫疗法和/或免疫检验点疗法的施用是根据定量施用计划，所述定量施用计划选自每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、14天、21天或28天一次，其中治疗阶段包括至少两个剂量。

方面5：根据方面1至4中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含选自

方面6：根据方面1至5中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含选自

方面7：根据方面1至6中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含与螯合剂络合的放射性核素，所述螯合剂附着于放射免疫疗法的抗体，其中所述螯合剂包含1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)或其衍生物。

方面8：根据方面1至7中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含针对CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD45、HER3、DR5、CD123、CD138、CS-1、B-细胞成熟抗原(BCMA)、MAGEA3、MAGEA3/A6、KRAS、CLL1、MUC-1、HER2、IL13Rα2和EphA2、EpCam、GD2、GPA7、PSCA、EGFR、EGFRvIII、ROR1、GPC3、CEA、间皮素、PSMA或其组合的抗体。

方面9：根据方面1至7中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含针对在急性骨髓性白血病中突变的基因的蛋白产物的抗体，其中所述基因是NPM1、Flt3、TP53、CEBPA、KIT、N-RAS、MLL、WT1、IDH1/2、TET2、DNMT3A、ASXL1或其组合。

方面10：根据方面1至7中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含针对CD33、CD38、CD45、HER3、DR5或其组合的抗体。

方面11：根据方面10的方法，其中所述抗-CD33抗体包含林妥珠单抗；或所述抗-CD38包含达雷木单抗；或所述抗-CD45抗体包含BC8。

方面12：根据方面1至11中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含针对CD33、CD38、CD45、HER3或DR5的第一放射免疫疗法和针对CD33、CD38、CD45、HER3或DR5中的不同一种的第二放射免疫疗法。

方面13：根据方面12的方法，其中所述第一放射免疫疗法是针对CD33、CD38或CD45的抗体，且所述第二放射免疫疗法是针对HER3或DR5的抗体。

方面14：根据方面12或13的方法，其中同时或依次递送所述第一和第二放射免疫疗法。

方面15：根据方面12或13的方法，其中在免疫检验点疗法之前施用第一放射免疫疗法且在免疫检验点疗法之后施用第二放射免疫疗法；或其中在免疫检验点疗法之前施用第二放射免疫疗法且在免疫检验点疗法之后施用第一放射免疫疗法。

方面16：根据方面1至15中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法的治疗有效量包含以下蛋白剂量：小于16mg/kg受试者体重；或小于10mg/kg受试者体重；或小于6mg/kg受试者体重；或从0.1mg/kg至16mg/kg受试者体重。

方面17：根据方面1至16中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法的治疗有效量是最大耐受剂量(MTD)。

方面18：根据方面1至16中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法的治疗有效量包含以下标记剂量：0.05至10uCi/kg受试者体重；或0.1至6uCi/kg受试者体重；或0.2至5uCi/kg受试者体重。

方面19：根据方面1至16中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法的治疗有效量包含以下标记剂量：0.05至10mCi/kg受试者体重；或0.1至6mCi/kg受试者体重；或0.1至5mCi/kg受试者体重；或0.1至3mCi/kg受试者体重。

方面20：根据方面1至16中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法的治疗有效量包含向受试者递送小于2Gy或小于8Gy的单剂量，诸如2Gy至8Gy的剂量。

方面21：根据方面1至20中的任一个的方法，其中所述免疫检验点疗法包含针对CTLA-4、PD-1、TIM-3、VISTA、BTLA、LAG-3、TIGIT、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、PD-L1、PD-L2、PD-L3、PD-L4、CD80、CD86、CD137-L、GITR-L、CD226、B7-H3、B7-H4、BTLA、TIGIT、GALS、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049或其组合的抗体。

方面22：根据方面1至20中的任一个的方法，其中所述免疫检验点疗法包含针对PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4或其组合的抗体。

方面23：根据方面1至22中的任一个的方法，其中所述增生性障碍是选自多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和骨髓增生性赘生物中的一种或多种的血液学癌症。

方面24：根据方面1至23中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，其中所述BC8包含具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或SEQ ID NO:9中所示的轻链N-端氨基酸序列的轻链。

方面25：根据方面1至24中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，其中所述BC8的轻链包含至少一个具有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的互补性决定区。

方面26：根据方面1至23中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，其中所述BC8包含具有在SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的轻链。

方面27：根据方面1至26中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，其中所述BC8包含具有在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或在SEQ ID NO:10中所示的重链N-端氨基酸序列的重链。

方面28：根据方面1至27中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，其中所述BC8的重链包含至少一个具有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的互补性决定区。

方面29：根据方面1至27中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，其中所述BC8包含具有在SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的重链。

方面30：根据方面1至28中的任一个的方法，其中所述放射免疫疗法包含BC8，且所述BC8的重链包含在位置141(相对于N-端氨基酸)处的氨基酸ASP或ASN。

实施例1：锕-225标记的CD33的毒性

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法可以包含针对CD33的锕-225(Ac

在探究放射性地标记的林妥珠单抗与来自非人灵长类动物和人冷冻组织的外周血和骨髓细胞的反应性的研究中，放射性地标记的林妥珠单抗仅显示与单核细胞的反应性，证明了特异性。此外，在确定放射性标记在抗体上的稳定性的研究中，对10只正常小鼠(8周龄Balb/c雌性小鼠，来自Taconic,Germantown,New York)向尾部注射了300nCi放射性地标记的林妥珠单抗(0.12ml)。在5天阶段内采集的血清样品显示，锕-225仍与林妥珠单抗结合，证明了在抗体上的放射性标记的体内稳定性。

确定放射性地标记的林妥珠单抗的单次注射的最大耐受剂量(MTD)为3uCi/kg患者重量。作为分次剂量(例如，隔4-7天施用的2个相等剂量)，MTD被确定为每剂2uCi/kg，或总计4uCi/kg。通过对具有复发性/难治性AML的患者进行注射来确定该数据：向21位患者注射递增剂量的放射性地标记的林妥珠单抗-0.5uCi/kg至4uCi/kg。MTD的确定是基于在每个剂量水平观察到的不良作用的严重程度。抗白血病作用包括19位可评价患者中的13位的外周血胚细胞的消除。在治疗后4周在可评价的18位患者中，十二位具有骨髓胚细胞的减少，包括九位减少了≥50％。三位用1uCi/kg、3uCi/kg和4uCi/kg治疗的患者分别在治疗后具有≤5％胚细胞。

实施例2：CD33人最大耐受剂量和效力

I期试验将用于确定在每个周期中林妥珠单抗-Ac

实施例3：与化学治疗剂的CD33联合疗法

在1期临床试验中，用与低剂量阿糖胞苷(LDAC)组合的在第1天和第8天以分次剂量施用的

在所有可评价的患者中观察到骨髓抑制，包括3位患者在治疗后>6周的4级血小板减少症伴骨髓发育不全。在≥1pt中报告的仅有>3级非血液学毒性是肺炎和蜂窝织炎。静脉闭塞性疾病没有发生。30天死亡率为33％(疾病进展，慢性呼吸衰竭急性发作，和跌倒后创伤后颅内出血)。

在9位患者中的5位(56％)中记录了客观应答：2位完全减轻，具有不完全血小板计数恢复(CRp)，3位完全减轻，具有不完全血液学恢复(CRi)。两位患者具有抗性疾病。

从第一剂的

在2μCi/kg/次的

实施例4：抗-CD45免疫球蛋白BC8的生产

根据本发明的某些方面，放射免疫疗法可以包含针对CD45的单克隆抗体，例如BC8或BC8的嵌合形式(BC8c)。从杂交瘤(ATCC No.HB-10507)制备鼠抗-CD45 mAb BC8，该杂交瘤最初通过将小鼠骨髓瘤NS1细胞与来自用人植物凝集素(PHA)刺激的单核细胞超免疫的BALB/C小鼠的脾细胞融合而形成。筛选微生物污染后，使用补充了1-2％胎牛血清(FBS)的JRH-Biosciences EXCell 300培养基培养原始融合细胞。

杂交瘤细胞系适于在无血清培养基中培养。简而言之，使用补充了谷氨酰胺、胆固醇、胰岛素和转铁蛋白的组合培养基，使培养物中的细胞缓慢且逐渐地不需要血清白蛋白。然后使细胞以至多500L规模生长至>1x10

将纯化的抗体通过SDS-PAGE、IEF和SEC-HPLC技术进行表征。用SEC-HPLC记录单个产物峰(99.4％)，具有约0.6％的聚集体。非还原SDS-PAGE显示抗体的单个带。在还原条件下的SDS-PAGE证实轻链和重链的存在(合计99.9％)。

实施例5：抗-CD45-免疫球蛋白BC8的测序

按照

使用质谱肽作图法对抗-CD45-免疫球蛋白(即，BC8抗体)测序。将BC8抗体去糖基化，还原，并用单一酶消化：胰蛋白酶、Lys-C和糜蛋白酶。然后使用MS/MS片段化分析方案通过LC偶联的质谱法技术分析肽片段。BC8抗体的重链和轻链的蛋白测序表明，实际氨基酸序列与通过DNA序列所预测的氨基酸序列的差别仅在于重链中的单个氨基酸。如图11中突出显示的，编码在位置141处的氨基酸的密码子预测ASN-141，而不是通过蛋白测序发现的实际ASP-141。此外，各批蛋白的测序指示在位置141处的ASP和ASN的不同量。

序列表

<110> 锕医药有限责任公司

戴尔·路德维格

<120> 用于治疗癌症的放射免疫疗法和免疫检验点疗法的联合疗法

<130> PT18-017 PCT

<150> 62/783510

<151> 2018-12-21

<160> 17

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 300

<212> PRT

<213> 人

<400> 1

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Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp Trp

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<212> PRT

<213> 人

<400> 2

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Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr

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Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly

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Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys

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<212> PRT

<213> 人

<400> 3

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Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

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Asp Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ala His His Ser

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Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn

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Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 鼠

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<212> PRT

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Glu Ile Asn Pro Thr Ser Ser Thr Ile Asn Phe Thr Pro Ser Leu Lys

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Asp

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<212> DNA

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atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatct gcactggtac 180

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccaa cctagaatct 240

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cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttccattc 360

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130 135 140

Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu

145 150 155 160

Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly

165 170 175

Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser

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Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp

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Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr

210 215 220

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ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta 840

gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg 900

cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt 960

gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 1020

agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 1080

gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt 1140

ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat 1200

gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac 1260

ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc 1320

tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 1380

cctggtaaat ga 1392

<210> 17

<211> 463

<212> PRT

<213> 鼠

<400> 17

Met Asp Phe Gly Leu Ile Phe Phe Ile Val Ala Leu Leu Lys Gly Val

1 5 10 15

Gln Cys Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser

35 40 45

Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Thr Ser Ser Thr Ile Asn Phe Thr Pro

65 70 75 80

Ser Leu Lys Asp Lys Val Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

85 90 95

Leu Tyr Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

100 105 110

Tyr Cys Ala Arg Gly Asn Tyr Tyr Arg Tyr Gly Asp Ala Met Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Thr Pro Ser Leu Lys Asp

130 135 140

Lys Val Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

145 150 155 160

Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg

165 170 175

Gly Asn Tyr Tyr Arg Tyr Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

180 185 190

Thr Ser Val Thr Val Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr

195 200 205

Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala

210 215 220

His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp

225 230 235 240

Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val

245 250 255

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr

260 265 270

Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu

275 280 285

Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln

290 295 300

Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser

305 310 315 320

Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys

325 330 335

Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

340 345 350

Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro

355 360 365

Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met

370 375 380

Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn

385 390 395 400

Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr

405 410 415

Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn

420 425 430

Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu

435 440 445

His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455 460