本申请要求2018年12月18日申请的美国临时专利申请第62/781,226号的权益，所述专利申请以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明部分提供包括LEPR、GDF8和活化素A的抑制剂的组合物以及增加体重和瘦肌肉质量的治疗方法。
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背景技术
生长和分化因子-8(GDF8，也称为肌肉抑制素)和活化素A为骨骼肌和肌肉质量的发育和维护的两种重要调节剂。
GDF8为属于生长因子的转化生长因子-β(TGF-β)超家族的分泌性配体，其充当肌肉质量的负调节剂。GDF8拮抗剂已用于成年小鼠中并且对骨骼肌质量有相当大的积极作用。与GDF8结合并且负调节肌肉质量的受体为IIB型活化素受体(ACVR2B)。GDF8并非唯一的通过ACVR2B起作用的肌肉质量的负调节剂。活化素A(ActA)也通过这一受体负调节肌肉质量(Latres等人,《活化素A比GDF8更明显地调节灵长类动物中的肌肉质量(Activin A moreprominently regulates muscle mass in primates than does GDF8)》,《自然通讯(Nature Comm.)》8:15153(2017))。ActRIIB结合包括活化素A、B、C和E、GDF11、骨形态发生蛋白9(BMP9)以及BMP10的配体。数据表明，活化素A与GDF8协同作用以调节骨骼肌质量，并且合并的GDF8和活化素A抑制可以有效地治疗患有肌肉耗损病症的患者中的肌肉萎缩(Latres等人(2017))。
瘦素为主要由脂肪组织和骨骼肌表达的多肽激素并且参与对代谢、能量平衡和食物摄入的调节。瘦素活性是通过与瘦素受体的相互作用和利用瘦素受体进行的信号传导来加以介导。瘦素受体(也称为“LEPR”、“WSX”、“OB受体”、“OB-R”和“CD295”)为具有大胞外域的I类细胞因子受体家族的单次跨膜受体。LEPR通过JAK-STAT3信号传导来调节体重。更改由瘦素或LEPR或两者进行的信号传导可能会造成多种病症，包括但不限于厌食症或其它精神进食障碍、恶病质、自体免疫病症、心血管疾病和神经退化性病症。
发明内容
本发明涉及不仅适用于增加总身体质量而且适用于以产生更期望的总身体组成的方式增加身体质量的组合物。如所提及，相比于在单独抗LEPR抗体或抗GDF8抗体和抗ActA抗体情况下观察到的总体重，拮抗性抗LEPR抗体、抗GDF8抗体和抗ActA抗体(三联组合)的施用引起总体重增加。就接受三联组合的个体的瘦质量来说，观察到另外的有益效果。这些个体中的总瘦质量增加并且脂肪质量与瘦质量比例减小(相对于单独抗LEPR抗体或抗GDF8抗体和抗ActA抗体来说)。举例来说，在接受三联组合的个体在所分析的一些特定肌肉结构中展现较高肌肉质量和较大肌肉纤维大小(面积)的情况下，确认了这种瘦质量增加。
本发明提供包含以下的组合：瘦素受体((例如人类瘦素受体)拮抗剂以及GDF8(例如人类GDF8)拮抗剂以及活化素A(例如人类活化素A)拮抗剂(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)；和任选的药学上可接受的载剂。举例来说，所述组合可以包括共同配制物，所述共同配制物包括至少两种选自以下的拮抗剂：瘦素受体拮抗剂、GDF8拮抗剂和活化素A拮抗剂；或拮抗剂可以在单独组合物中。在本发明的一个实施例中，瘦素受体拮抗剂、GDF8拮抗剂和/或活化素A拮抗剂分别为特异性结合到瘦素受体、GDF8和/或活化素A的抗体或其抗原结合片段。在本发明的一个实施例中，瘦素受体拮抗剂为特异性结合到受体并且不与瘦素竞争结合到受体的抗体或抗原结合片段。在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为特异性结合到LEPR的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含选自H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的重链可变区；和选自H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，或结合到LEPR上与所述抗体或片段相同的表位且/或与所述抗体或片段竞争结合到LEPR。在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂为特异性结合到GDF8的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P和H4H18508P2的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的重链可变区；和选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P和H4H18508P2的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，或结合到GDF8上与所述抗体或片段相同的表位且/或与所述抗体或片段竞争结合到GDF8。在本发明的一个实施例中，活化素A拮抗剂为特异性结合到活化素A的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和H2aM10965N的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的重链可变区，和选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和H2aM10965N的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，或结合到活化素A上与所述抗体或片段相同的表位且/或与所述抗体或片段竞争结合到活化素A。在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：选自H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的重链可变区；和选自H4H17322P2、H4H18437P2 H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的轻链可变区，或结合到LEPR上与所述抗体或片段相同的表位且/或与所述抗体或片段竞争结合到LEPR。在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂为一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P和H4H18508P2的重链可变区；和选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P和H4H18508P2的轻链可变区，或结合到GDF8上与所述抗体或片段相同的表位且/或与所述抗体或片段竞争结合到GDF8。在本发明的一个实施例中，活化素A拮抗剂为一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和H2aM10965N的重链可变区；和选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和H2aM10965N的轻链可变区，或结合到活化素A上与所述抗体或片段相同的表位且/或与所述抗体或片段竞争结合到活化素A。所述组合任选地包括一种或多种另外治疗剂(例如食欲刺激剂、大麻素、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、平滑肌松弛剂、硝酸盐、利尿剂、铁、支气管扩张剂、抗胆碱剂、皮质类固醇、抗生素、非类固醇消炎药(NSAID)、免疫抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、抗抑郁剂、抗癌疗法和/或局部药剂)。
本发明提供包括本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的注入装置(例如皮下注射针和注射器、自动注入器或预充式注射器)或容器(例如小瓶)。
本发明还提供向个体(例如人类)施用本发明的组合的方法，所述方法包括将组合的组分引入，例如胃肠外引入，例如通过使用本发明的注入装置进行注入来引入个体的身体中的步骤。在本发明的一个实施例中，个体患有营养不良、发育迟缓、食物摄入不足、进食障碍、恶病质、肌肉萎缩或耗损和肌肉损伤，且/或正在进行物理疗法。
本发明还提供抑制个体(例如人类)的身体中的LEPR、GDF8和活化素A的方法，所述方法包含向个体施用，例如胃肠外施用，例如通过使用本发明的注入装置进行注入来施用治疗有效量的本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。在本发明的一个实施例中，个体患有营养不良、发育迟缓、食物摄入不足、进食障碍、恶病质、肌肉萎缩或耗损和肌肉损伤，且/或正在进行物理疗法。
本发明还提供增加有需要的个体的食物摄入、肥胖、体重、肌力、肌肉纤维大小或瘦质量(例如以脂肪质量为代价)的方法，所述方法包含向个体(例如人类)施用治疗有效量的本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。在本发明的一个实施例中，个体患有营养不良、发育迟缓、食物摄入不足、进食障碍、恶病质、肌肉萎缩或耗损和肌肉损伤，且/或正在进行物理疗法。
本发明还提供增强有需要的个体(例如人类)的运动表现的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。在本发明的一个实施例中，个体患有营养不良、发育迟缓、食物摄入不足、进食障碍、恶病质、肌肉萎缩或耗损和肌肉损伤，且/或正在进行物理疗法(例如中风康复)。
本发明提供减少施用有瘦素受体拮抗剂的个体的增加的肝甘油三酯含量的方法，所述方法包含联合瘦素受体拮抗剂向个体施用GDF8拮抗剂以及活化素A拮抗剂(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
本发明还提供治疗或预防有需要的个体(例如人类)的营养不良、恶病质、发育迟缓、特征在于热量摄入不足的进食障碍、肌肉萎缩、年龄相关性肌肉减少症或肌肉损伤的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。举例来说，在本发明的一个实施例中，(i)患有营养不良的个体患有住院营养不良、孩童期发育迟缓、特征在于热量摄入不足的进食障碍、厌食症和/或贪食症；(ii)患有恶病质的个体患有或正在经受厌食症、贪食症、进食障碍、肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性肾病、感染性疾病、HIV感染、获得性免疫缺陷综合症(AIDS)、充血性心脏衰竭、辐射治疗、癌症、肝细胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、自身免疫病症、发炎性肠病、红斑狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)、牛皮癣、囊肿纤维化、心血管疾病、血压升高、抑郁和/或神经退化性病症；和/或(iii)患有肌肉萎缩或耗损的个体患有或正在经历败血症、AIDS、肾衰竭、心脏衰竭、糖皮质激素过量、库辛综合征(Cushing syndrome)、创伤、废用性肌肉、不可移动、卧床休息、损伤、髋关节骨折、髋关节置换、膝关节置换和/或机械通气。
包含共同配制LEPR拮抗剂、GDF8拮抗剂和活化素A拮抗剂以及药学上可接受的载剂的制造本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的方法也为本发明的一部分。
本发明还提供制造包含本发明的组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的装置或容器的方法，所述方法包含将组合的组分引入容器或装置中。
具体实施方式
本发明的“LEPR/GDF8/ActA”组合包括组合物或试剂盒，例如包含药学上可接受的载剂以及彼此联合的一种或多种LEPR拮抗剂、一种或多种GDF8拮抗剂和一种或多种活化素A拮抗剂以及任选的一种或多种另外治疗剂的药物组合物。在本发明的一个实施例中，LEPR/GDF8/ActA组合包含抗LEPR抗体H4H18457P2或其抗原结合片段(或其变体)、抗GDF8抗体H4H1657N2或其抗原结合片段(或其变体)和抗ActA抗体H4H10446P2或其抗原结合片段(或其变体)(H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
术语“以及(in association with)”指示本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的组分被搭配。举例来说，LEPR拮抗剂、GDF8拮抗剂和活化素A拮抗剂可以被配制成单一组合物，例如以用于同时递送，或分开配制成两种或更多种组合物(例如，并包括于试剂盒中)。举例来说，组合可以为与具有分开配制的活化素A拮抗剂的第二组合物搭配的具有与GDF8拮抗剂共同配制的LEPR拮抗剂的第一组合物。或者，组合可为三种分开配制的组合物—第一LEPR拮抗剂组合物、第二GDF8拮抗剂组合物和第三活化素A拮抗剂组合物。当分开配制时，组合的每种组分可以在与施用其它组分时不同的时间施用至个体；举例来说，每次施用可以在治疗方案中在既定时间段内以一定间隔不同时(例如分开或依序)给予。此外，单独的组分可以通过相同或不同的途径向个体施用。
本文提及其序列出现在先前公开中的抗LEPR抗体、抗GDF8抗体和/或抗ActA抗体或其抗原结合片段。在本发明的一个实施例中，所述抗体或片段包含至少一个重链可变域(V
序列一致性是指当两个序列被最佳比对时在同等位置处的两种多肽的氨基酸相同的程度。序列类似性包括相同残基和不相同的生物化学上相关的氨基酸。共有类似性质并且可以互换的生物化学上相关的氨基酸在上文中被论述。
在本发明的一个实施例中，瘦素受体(LEPR、OB受体、OB-R、CD295或WSX)为包含如UniProtKB/Swiss-Prot寄存编号P48357中所阐述的氨基酸序列的人类瘦素受体。
GDF8(生长和分化因子-8，MSTN或肌肉抑制素)包括具有在UniProtKB/Swiss-Prot寄存编号O14793下阐述的氨基酸序列的蛋白质。
活化素为包含β次单元的同二聚分子和异二聚分子，亦即抑制素βΑ、抑制素βΒ、抑制素βθ和/或抑制素βΕ。活化素A为具有两个βΑ次单元的同二聚体；活化素B为具有两个βΒ次单元的同二聚体；活化素AB为具有一个βΑ次单元和一个βΒ次单元的异二聚体；且活化素AC为具有一个βΑ次单元和一个βθ次单元的异二聚体。在本发明的一个实施例中，抑制素βA链氨基酸序列阐述于UniProtKB/Swiss-Prot寄存编号P08476下。
在本发明的一个实施例中，瘦质量是使用微计算机断层扫描技术(μCT)或双能X射线吸光测定法(DXA)加以测定。
通用方法
标准分子生物学方法由Sambrook,Fritsch和Maniatis(1982年和1989年第2版，2001年第3版)《分子克隆实验指南(Molecular Cloning,A Laboratory Manual)》,冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press),纽约冷泉港(Cold SpringHarbor,N.Y.)；Sambrook和Russell(2001年)《分子克隆(Molecular Cloning)》,第3增补版,冷泉港实验室出版社,纽约冷泉港；Wu(1993年)《重组DNA(Recombinant DNA)》,第217卷，学术出版社(Academic Press)，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego,Calif.))描述。标准方法也出现在以下中：Ausbel等人(2001年)《现代分子生物学实验技术(CurrentProtocols in Molecular Biology)》,第1-4卷,纽约的约翰·威利父子公司(John Wileyand Sons,Inc.New York),纽约，其描述细菌细胞和DNA突变诱发中的克隆(第1卷)、哺乳动物细胞和酵母菌中的克隆(第2卷)、糖结合物和蛋白质表现(第3卷)和生物资讯学(第4卷)。
描述包括免疫沉淀、色谱法、电泳、离心和结晶的蛋白质纯化方法(Coligan等人(2000)《最新蛋白质科学实验指南(Current Protocols in Protein Science)》,第1卷,纽约的约翰·威利父子公司)。描述化学分析、化学修饰、转译后修饰、融合蛋白产生、蛋白质糖基化(参见例如Coligan等人(2000年)《最新蛋白质科学实验指南》,第2卷,纽约的约翰·威利父子公司；Ausubel,等人(2001年)现代分子生物学实验技术,第3卷,纽约的约翰·威利父子公司,纽约,第16.0.5-16.22.17页；西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich,Co.)(2001年)生命科学研究产品(Products for Life Science Research),密苏里州圣路易斯(St.Louis,Mo.)；第45-89页；安玛西亚法玛西亚生物技术(Amersham Pharmacia Biotech)(2001年)BioDirectory,新泽西州皮斯卡塔威(Piscataway,N.J.),第384-391页)。描述多克隆抗体和单克隆抗体的产生、纯化和片段化(Coligan,等人(2001年)《免疫学最新方案(Current Protocols in Immunology)》,第1卷,纽约的约翰·威利父子公司；Harlow和Lane(1999年)《使用抗体(Using Antibodies)》,冷泉港实验室出版社,纽约冷泉港；Harlow和Lane,同前文献)。表征配体/受体相互作用的标准技术为可用的(参见例如,Coligan等人(2001年)《免疫学最新方案》,第4卷,纽约的约翰威利公司)。
可以制备单克隆抗体、多克隆抗体和人类化抗体(参见例如,Sheperd和Dean(编)(2000年)《单克隆抗体(Monoclonal Antibodies)》,纽约的牛津大学出版社(OxfordUniv.Press,New York),纽约；Kontermann和Dubel(编)(2001年)《抗体工程(AntibodyEngineering)》,纽约的施普林格(Springer-Verlag,New York)；Harlow和Lane(1988年)《抗体实验室手册(Antibodies A Laboratory Manual)》,冷泉港实验室出版社,纽约冷泉港,第139-243页；Carpenter等人(2000年)《免疫学杂志(J.Immunol.)》165:6205；He等人(1998年)《免疫学杂志》160:1029；Tang等人(1999年)《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》274:27371-27378；Baca等人(1997)《生物化学杂志》272:10678-10684；Chothia等人(1989年)《自然(Nature)》342:877-883；Foote和Winter(1992)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》224:487-499；美国专利第6,329,511号)。
人类化的替代方案为使用呈递于噬菌体上的人类抗体库或转基因小鼠中的人类抗体库(Vaughan等人(1996年)《自然·生物技术(Nature Biotechnol.)》14:309-314；Barbas(1995年)《自然·医学(Nature Medicine)》1:837-839；Mendez等人(1997年)《自然·遗传学(Nature Genetics)》15:146-156；Hoogenboom和Chames(2000年)《今日免疫学(Immunol.Today)》21:371-377；Barbas等人(2001年)《噬菌体呈递：实验室手册(PhageDisplay:A Laboratory Manual)》,冷泉港实验室出版社,纽约冷泉港；Kay等人(1996年)《肽和蛋白质的噬菌体呈递：实验室手册(Phage Display of Peptides and Proteins:ALaboratory Manual)》,学术出版社,加利福尼亚州圣地亚哥；de Bruin等人(1999年)《自然·生物技术》17:397-399)。描述单链抗体和双功能抗体(参见例如,Malecki等人(2002年)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》99:213-218；Conrath等人(2001年)《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》276:7346-7350；Desmyter等人(2001年)《生物化学杂志》276:26285-26290；Hudson和Kortt(1999)《免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)》231:177-189；和美国专利第4,946,778号)。提供双功能抗体(参见例如,Mack等人(1995年)《美国国家科学院院刊》92:7021-7025；Carter(2001年)《免疫学方法杂志》248:7-15；Volkel等人(2001年)《蛋白质工程》14:815-823；Segal等人(2001年)《免疫学方法杂志》248:1-6；Brennan等人(1985年)《科学(Science)》229:81-83；Raso等人(1997年)《生物化学杂志》272:27623；Morrison(1985年)《科学》229:1202-1207；Traunecker等人(1991年)《欧洲分子生物学杂志(EMBO J.)》10:3655-3659；和美国专利第5,932,448号、第5,532,210号和第6,129,914号)。全人类抗体还可以在例如VelociMouse的经基因工程改造的小鼠中发展。参见例如DeChiara等人,《由八细胞期胚胎注射产生完全ES细胞源性小鼠(Producing fully EScell-derived mice from eight-cell stage embryo injections)》,《酶学方法(MethodsEnzymol)》,476:285-94(2010)；Dechiara等人,《VelociMouse：自ES细胞向八细胞期胚胎中的注入获得的完全ES细胞源性F0代小鼠(VelociMouse:fully ES cell-derived F0-generation mice obtained from the injection of ES cells into eight-cell-stageembryos)》《分子生物学方法(Methods Mol Biol)》,530:311-24(2009)；美国专利第7576259号；第7659442号；或第7294754号和US2008/0078000A1。
抗原纯化通常不为抗体生成所需。动物可以免疫接种携带所关注的抗原的细胞。随后，可以自经免疫动物分离脾细胞，并且脾细胞可以与骨髓瘤细胞系融合以产生融合瘤(参见例如,Meyaard等人(1997年)《免疫(Immunity)》7:283-290；Wright等人(2000年)《免疫》13:233-242；Preston等人,同前文献；Kaithamana等人(1999年)《免疫学杂志》163:5157-5164)。
抗体可以结合至例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇(PEG)。抗体适用于治疗、诊断、试剂盒或其它目的，并且包括偶合至例如染料、放射性同位素、酶或金属(例如胶体金)的抗体(参见例如,Le Doussal等人(1991年)《免疫学杂志》146:169-175；Gibellini等人(1998年)《免疫学杂志》160:3891-3898；Hsing和Bishop(1999)《免疫学杂志》162:2804-2811；Everts等人(2002年)《免疫学杂志》168:883-889)。
包括荧光活化细胞分选术(FACS)的流式细胞术方法为可用的(参见例如,Owens,等人(1994年)《用于临床实验室实践的流式细胞术原理(Flow Cytometry Principles forClinical Laboratory Practice)》,约翰·威利父子出版公司,新泽西州霍博肯(Hoboken,N.J.)；Givan(2001年)《流式细胞术(Flow Cytometry)》,第2增补版；Wiley-Liss,新泽西州霍博肯；Shapiro(2003年)《实用流式细胞术(Practical Flow Cytometry)》,约翰·威利父子出版公司,新泽西州霍博肯)。用作例如诊断试剂的适用于修饰包括核酸引物和探针的核酸、多肽和抗体的荧光试剂为可用的(分子探针(2003年)目录,分子探针公司(MolecularProbes,Inc.),俄勒冈州尤金(Eugene,Oreg.)；西格玛-奥德里奇(2003年)目录,密苏里州圣路易斯)。
描述标准免疫系统组织学方法(参见例如,Muller-Harmelink(编)(1986年)《人类胸腺：组织病理学和病理学(Human Thymus:Histopathology and Pathology)》,纽约的斯普林格出版社(Springer Verlag,New York),纽约；Hiatt等人(2000年)《组织学彩色图谱(Color Atlas of Histology)》,Lippincott,Williams和Wilkins,宾夕法尼亚洲費城(Phila,Pa.)；Louis等人(2002年)《基础组织学：文本和图谱(Basic Histology:Text andAtlas)》,纽约的麦格劳-希尔(McGraw-Hill,New York),纽约)。
测定例如抗原性片段、前导序列、蛋白质折叠、功能域、糖基化位点和序列比对的软件包和资料库为可用的(参见例如,《基因库、载体NTI.RTM.套件(GenBank,VectorNTI.RTM.Suite)》(马里兰州贝塞斯达的迅宏科技公司(Informax,Inc,Bethesda,Md.))；GCG威斯康星包(GCG Wisconsin Package)(加利福尼亚州圣地亚哥的Accelrys公司)；DeCypher.RTM.(TimeLogic公司,Crystal Bay,Nev.)；Menne等人(2000年)《生物信息学(Bioinformatics)》16:741-742；Menne等人(2000年)《生物信息学应用笔记(Bioinformatics Applications Note)》16:741-742；Wren等人(2002年)《生物医学的计算机方法程序(Comput.Methods Programs Biomed.)》68:177-181；von Heijne(1983年)《欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)》133:17-21；von Heijne(1986年)《核酸研究(NucleicAcids Res.)》14:4683-4690)。
瘦素受体拮抗剂
本发明包括有包括一种或多种LEPR拮抗剂的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为不与瘦素竞争结合到LEPR的抗LEPR抗体或其抗原结合片段。
LEPR拮抗剂包括特异性结合到LEPR并且拮抗LEPR的一种或多种生物活性的抗体和其抗原结合片段以及其它物质(例如肽和小分子)。特异性结合到LEPR的分子可以称为“抗LEPR”。在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂例如通过结合人类LEPR并拮抗LEPR依赖性胞内信号级联的活化来抑制LEPR信号传导。在本发明的一个实施例中，LEPR的拮抗作用可以通过阻断LEPR/瘦素结合，例如通过在拮抗剂与瘦素或LEPR或两者之间形成复合体来实现。LEPR信号传导拮抗作用包括例如STAT3的LEPR依赖性转录活化的减少。参加例如,Villanueva和Myers,《国际肥胖杂志(Int.J.Obes.)》32(增刊7):S8-12(2008)以及Park和Ahima,《F1000报告(F1000Prime Reports)》6:73(2014)。
在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为瘦素的突变型式，例如聚乙二醇化突变瘦素。举例来说，在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为哺乳动物(例如人类)瘦素多肽，其中LDFI疏水性结合位点经修饰以使得所述疏水性结合位点的两个至四个氨基酸残基被不同氨基酸残基取代以使得位点变得不太具有疏水性，所述经修饰的哺乳动物瘦素多肽为瘦素拮抗剂；或所述经修饰的哺乳动物瘦素多肽的片段包含所述经更改的疏水性结合位点，其中所述片段自身为瘦素拮抗剂。举例来说，其中LDFI基序的两个或更多个氨基酸被例如具有突变L39A/D40A/F41A/I42A的丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸或丝氨酸取代。所述瘦素突变可以例如被一个或多个4000-6000道尔顿PEG分子聚乙二醇化。参见美国专利第7307142号。
在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为选自H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的抗体或抗原结合片段；或阐述于WO2018/089532中的任何其它抗体或抗原结合片段。
在本发明的一个实施例中，抗LEPR抗体为H4H18457P2。
在本发明的一个实施例中，本发明的抗LEPR抗体或片段包含：
(i)选自H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的抗体的重链可变区的HCDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)(或具有HCDR中的一个或多个的变体)和/或轻链可变区的LCDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)(或具有LCDR中的一个或多个的变体)；和/或
(ii)选自H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和H4H18508P2的抗体的重链可变区(或其变体)和/或轻链可变区(或其变体)；
且/或被表征为：
(iii)与H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和/或H4H18508P2竞争结合到LEPR(例如具有C端myc-myc-His
和/或
(iv)在与H4H17322P2、H4H18437P2、H4H18439P2、H4H18440P2、H4H18457P2、H4H18462P2、H4H18464P2、H4H18466P2和/或H4H18508P2相同的表位处结合到LEPR，例如，其中表位为LEPR胞外域、LEPR CRH(细胞因子受体同源)域2、CRH2域、FNIII(III型纤维连接蛋白)域或Ig(D3)域。
参见国际专利申请公开第WO2018/89532号。
在本发明的一个实施例中，所述抗体或片段包含选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定域和/或选自κ和λ的轻链恒定域。
在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为抗体H4H18457P2或其抗原结合片段。
在本发明的一个实施例中，LEPR拮抗剂为包含以下的抗体或其抗原结合片段：
(1)包含以下氨基酸序列的V
EVQLVESGGSVVRPGESLRLSCAAS
(SEQ ID NO:1；或其变体)
和/或
包含以下氨基酸序列的V
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS
和/或
(2)
包含其CDR-L，例如以下的V
包含以下氨基酸序列的CDR-L1：Gln Ser Ile Ser Ser Tyr(SEQ ID NO:3；或其变体)；
包含以下氨基酸序列的CDR-L2：Ala Ala Ser(SEQ ID NO:4；或其变体)；和
包含以下氨基酸序列的CDR-L3：Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr(SEQ ID NO:5；或其变体)；和/或
包含其CDR-H，例如以下的V
包含以下氨基酸序列的CDR-H1：Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly(SEQ ID NO:6；或其变体)；
包含以下氨基酸序列的CDR-H2：Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ile Thr(SEQ ID NO:7；或其变体)；和
包含以下氨基酸序列的CDR-H3：Ala Arg Ala Arg Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr(SEQ ID NO:8；或其变体)；
和/或
(3)
包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白：
EVQLVESGGSVVRPGESLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGISWNGGITVYADSVKGRFTVSRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHCARARYGGADYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQID NO:25)(或其变体)
和
包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:26)(或其变体)。
在本发明的一个实施例中，所述V
GDF8拮抗剂
本发明包括有包括一种或多种GDF8拮抗剂的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
GDF8拮抗剂包括特异性结合到GDF8并且拮抗GDF8的一种或多种生物活性的抗体和其抗原结合片段以及其它物质(例如肽和小分子)。特异性结合到GDF8的分子可以称为“抗GDF8”。举例来说，在本发明的一个实施例中，拮抗剂阻断GDF8与活化素RIIB(或其Fc融合体)之间的相互作用或抑制稳定地表达Smad依赖性(CAGA12)荧光素酶的A204细胞的SMAD依赖性活化。
在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂为例如德索莫啡(dorsomorphin)(密理博西格玛(Millipore Sigma)；密苏里州圣路易斯)或LDN-193189(密理博西格玛；密苏里州圣路易斯)的小分子。
在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂特异性结合GDF8，但例如不结合其它ActRIIB配体，例如GDF3、BMP2、BMP4、BMP7、BMP9、BMP10、GDF11、活化素A、活化素B、活化素AB和/或结点。
在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂为抗GDF8抗体或其抗原结合片段。抗GDF8抗体在例如美国专利第6096506号；第7320789号；第7261893号；第7807159号；第7888486号；第7635760号；第7632499号中、在美国专利申请公开第2007/0178095号、第2010/0166764号和第2009/0148436号以及国际专利申请公开第WO2010/070094号中被提及。
抗GDF8抗体还在2011年5月25日提交并且作为US2011/0293630公开、现为美国专利第8840894号的美国专利申请第13/115,170号或2012年11月14日提交的国际专利申请第PCT/US2012/064911号(WO2013/074557)中被描述，包括命名为21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1(或8D12)、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P的抗体或其抗原结合片段。
在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂为选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1(或8D12)、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P的抗GDF8抗体或抗原结合片段；或阐述于US2011/0293630中的任何抗GDF8抗体或抗原结合片段。
在本发明的一个实施例中，抗GDF8抗体为H4H1657N2。
在本发明的一个实施例中，本发明的抗GDF8抗体或片段包含：
(i)选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1(或8D12)、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P的抗体的重链可变区的HCDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)(或具有HCDR中的一个或多个的变体)和/或轻链可变区的LCDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)(或具有LCDR中的一个或多个的变体)；和/或
(ii)选自21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1(或8D12)、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P的抗体的重链可变区(或其变体)和/或轻链可变区(或其变体)；
且/或被表征为：
(iii)与21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1(或8D12)、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P竞争结合到GDF8；
和/或
(iv)在与21-E5、21-B9、21-E9、21-A2、22-D3、22-E6、22-G10、1A2、20B12、58C8、19F2、8D12-1(或8D12)、4E3-7、9B11-12、4B9、1H4-5、9B4-3、3E2-1、4G3-25、4B6-6、H4H1657N2或H4H1669P相同的表位处结合到GDF8，例如，其中表位为GDF8氨基酸1-14、48-65、48-69、48-72、52-65、52-72、56-65、56-72和/或73-90；或由所述氨基酸组成(例如包含例如生物素的C端标签)的肽。
参见公开的美国专利申请第US2011/0293630号。在本发明的一个实施例中，所述抗体或片段包含选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定域和/或选自κ和λ的轻链恒定域。
抗体H4H1657N2可以称为REGN1033或曲沃单抗(trevogrumab)。
在本发明的一个实施例中，GDF8拮抗剂为包含以下的抗体或其抗原结合片段：
(1)
包含以下氨基酸序列的V
EVQVLESGGDLVQPGGSLRLSCAAS
(SEQ ID NO:9；或其变体)；
和
包含以下氨基酸序列的V
DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRAS
(SEQ ID NO:10；或其变体)
和/或
(2)
包含其CDR-L，例如以下的V
包含以下氨基酸序列的CDR-L1：Gln Asp Ile Ser Asp Tyr(SEQ ID NO:11；或其变体)
包含以下氨基酸序列的CDR-L2：Thr Thr Ser(SEQ ID NO:12；或其变体)
包含以下氨基酸序列的CDR-L3：Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Leu Thr(SEQ IDNO:13；或其变体)
和/或
包含其CDR-H，例如以下的V
包含以下氨基酸序列的CDR-H1：Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr Ala(SEQ ID NO:14；或其变体)
包含以下氨基酸序列的CDR-H2：Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ala(SEQ ID NO:15；或其变体)
包含以下氨基酸序列的CDR-H3：Ala Lys Asp Gly Ala Trp Lys Met Ser GlyLeu Asp Val(SEQ ID NO:16；或其变体)；和/或
(3)
包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白：
EVQVLESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFSAYAMTWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSAYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGAWKMSGLDVWGQGTTVIVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:27)(或其变体)，
和
包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白：
DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASQDISDYLAWYQQKPGKIPRLLIYTTSTLQSGVPSRFRGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYDSAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:28)(或其变体)
在本发明的一个实施例中，所述V
活化素A拮抗剂
本发明包括有包括一种或多种活化素A拮抗剂的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
活化素A拮抗剂包括特异性结合到活化素A并且拮抗活化素A的一种或多种生物活性的抗体和其抗原结合片段以及其它物质(例如肽和小分子)。特异性结合到活化素A的分子可以称为“抗活化素A”或“抗ActA”。在本发明的一个实施例中，所述ActA拮抗剂：
(i)干扰活化素A与活化素A受体(例如IIA型活化素受体、IIB型活化素受体、I型活化素受体等)之间的相互作用；
(ii)干扰活化素-活化素受体复合体的形成；和/或
(iii)引起对活化素A的至少一种生物功能，例如I型活化素受体的磷酸化和活化以及SMAD2和SMAD3蛋白的磷酸化的抑制。
活化素A拮抗剂，例如抗体和其抗原结合片段以及其它物质(例如肽)特异性结合到活化素A或其βA次单元。特异性结合βA次单元的抗原特异性结合蛋白可以辨识活化素A(βA/βA同二聚体)和活化素AB(βA/βB异二聚体)。在本发明的一个实施例中，活化素A特异性结合蛋白结合活化素A和活化素AB(但不结合活化素B)。抗活化素A抗体和抗原结合片段在例如US2009/0234106中被提及。特定抗活化素A抗体命名为“MAB3381”并且可商购自明尼苏达州明尼阿波利斯的安迪生物科技公司(R&D Systems,Inc,Minneapolis,MN)。MAB3381特异性结合活化素A(同二聚体)以及活化素AB(异二聚体)。
在本发明的一个实施例中，活化素A拮抗剂为选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和H2aM10965N的抗体或抗原结合片段；或阐述于WO2015/017576中的任何其它抗体或抗原结合片段。
在本发明的一个实施例中，抗活化素A抗体为伽勒妥单抗(garetosmab)。
在本发明的一个实施例中，本发明的抗活化素A抗体或片段包含：
(i)选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和H2aM10965N的抗体的重链可变区的HCDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)(或具有HCDR中的一个或多个的变体)和/或轻链可变区的LCDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)(或具有LCDR中的一个或多个的变体)；和/或
(ii)选自H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2或H2aM10965N的抗体的重链可变区(或其变体)和/或轻链可变区(或其变体)；
且/或被表征为：
(iii)与H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和/或H2aM10965N竞争结合到活化素A；
和/或
(iv)在与H4H10423P、H4H10424P、H4H10426P、H4H10429P、H4H10430P、H4H10432P2、H4H10433P2、H4H10436P2、H4H10437P2、H4H10438P2、H4H10440P2、H4H10442P2、H4H10445P2、H4H10446P22、H4H10447P2、H4H10448P2、H4H10452P2、H4H10468P2和/或H2aM10965N相同的表位处结合到活化素A。
参见公开的国际专利申请公开第WO2015/017576号。在本发明的一个实施例中，所述抗体或片段包含选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定域和/或选自κ和λ的轻链恒定域。
抗体H4H10446P2可以称为REGN2477或伽勒妥单抗。
在本发明的一个实施例中，活化素A拮抗剂为包含以下的抗体或其抗原结合片段：
(1)
包含以下氨基酸序列的V
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS
和
包含以下氨基酸序列的V
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRAS
(2)
包含其CDR-L，例如以下的V
包含以下氨基酸序列的CDR-L1：Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr(SEQ ID NO:19；或其变体)；
包含以下氨基酸序列的CDR-L2：Gly Ala Ser(SEQ ID NO:20；或其变体)；和
包含以下氨基酸序列的CDR-L3：Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr(SEQ IDNO:21；或其变体)；
和
包含其CDR-H，例如以下的V
包含以下氨基酸序列的CDR-H1：Gly Gly Ser Phe Ser Ser His Phe(SEQ ID NO:22；或其变体)；
包含以下氨基酸序列的CDR-H2：Ile Leu Tyr Thr Gly Gly Thr(SEQ ID NO:23；或其变体)；和
包含以下氨基酸序列的CDR-H3：Ala Arg Ala Arg Ser Gly Ile Thr Phe ThrGly Ile Ile Val Pro Gly Ser Phe Asp Ile(SEQ ID NO:24；或其变体)；
和/或
(3)
包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白：
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSFSSHFWSWIRQPPGKGLEWIGYILYTGGTSFNPSLKSRVSMSVGTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARSGITFTGIIVPGSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:29)(或其变体)
和
包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白：
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:30)(或其变体)。
在本发明的一个实施例中，所述V
药物组合物
本发明包括具有与药学上可接受的载剂或赋形剂混合的本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)，包括例如一种或多种(例如3种)其组分的药物配制物。参见例如《雷明顿氏药物科学(Remington's PharmaceuticalSciences)》和《美国药典：国家处方集(U.S.Pharmacopeia:National Formulary)》,宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(Mack Publishing Company,Easton,Pa.)(1984年)。包含混合药学上可接受的载剂或赋形剂与一种或多种组分的制造所述药物配制物的方法形成本发明的一部分，通过所述方法产生的药物组合物也如此。
本发明的范围包括干燥，例如冷冻干燥的本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)或其一种或多种组分或包括药学上可接受的载剂、但实质上缺乏水的其药物组合物。在本发明的一个实施例中，药物配制物为水性的(包括水)。在本发明的一个实施例中，药物配制物为无菌的。
治疗剂的药物配制物可以通过与呈例如冻干粉末、浆液、水溶液或悬浮液形式的可接受的载剂、赋形剂或稳定剂混合来制备(参见例如Hardman等人(2001年)Goodman和Gilman的《治疗学的药理学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)》,纽约的麦格劳希尔,纽约；Gennaro(2000年)《雷明顿：药学技术与实践(Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy)》,纽约的利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司(Lippincott,Williams,and Wilkins),纽约；Avis等人(编)(1993年)《药物剂型：胃肠外药疗法(Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications)》,马塞尔德克(MarcelDekker),纽约；Lieberman等人(编)(1990年)《药物剂型：锭剂(Pharmaceutical DosageForms:Tablets)》,马塞尔德克,纽约；Lieberman等人(编)(1990年)《药物剂型：分散系统(Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems)》,马塞尔德克,纽约；Weiner和Kotkoskie(2000年)《赋形剂毒性和安全性(Excipient Toxicity and Safety)》,纽约的马塞尔德克公司,纽约)。
LEPR/GDF8/ActA组合的施用模式可以变化。施用途径包括经口、经直肠、经粘膜、经肠、胃肠外；肌肉内、皮下、皮内、髓内、鞘内、直接脑室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、经皮或动脉内。
本发明提供向个体(例如人类)施用包含LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的药物配制物的方法，所述方法包含将配制物引入个体的身体中，例如引入个体的静脉、皮下组织或肌肉组织中。举例来说，所述方法包含用注射器的针穿刺个体的身体并且将配制物注入个体的身体中。所述方法包括将包含共同配制的组合的所有三种组分的配制物引入个体的身体中；或举例来说，将组合的三种分开配制的组分引入个体的身体中。
本发明提供一种或多种包含本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)或其包含药学上可接受的载剂的药物组合物的容器(例如，例如具有盖或色谱柱的塑料或玻璃小瓶、中空孔针或圆柱形注射器)。本发明包括制备一种或多种包含组合的容器的方法，所述方法包含将组合的组分引入一种或多种容器，例如包含共同配制的组分组合的单一容器中。在本发明的一个实施例中，一种或多种容器随后被引入试剂盒中。
本发明还提供包含本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)或其药物组合物的装置，例如注入装置和其使用方法。注入装置为通过胃肠外途径，例如肌内、皮下或静脉内将物质引入患者的身体中的装置。举例来说，注入装置可以为例如包括用于保持流体被注入(例如包含抗体或片段或其药物组合物)的圆柱体或圆筒、用于穿刺皮肤和/或血管以注入流体的针和用于将流体从圆柱体中推出并且通过针孔的柱塞的注射器(例如预充有药物组合物，例如自动注入器，或在使用点填充，例如由使用者或临床医师进行)。
本文所公开的药物组合物还可以用无针皮下注入装置，例如公开于美国专利第6620135号、第6096002号、第5399163号、第5383851号、第5312335号、第5064413号、第4941880号、第4790824号或第4596556号中的装置施用。包含药物组合物的所述无针装置和其使用方法也为本发明的一部分。
本发明包括制备一种或多种包含LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的注入装置(例如预充式注射器或自动注入器)的方法，所述方法包含将组合的组分引入所述装置中的一个或多个，例如包含共同配制的组分组合的单一装置中。在本发明的一个实施例中，一种或多种注入装置随后被引入试剂盒中。
本发明还包括包含本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的试剂盒。在本发明的一个实施例中，试剂盒包含于单独容器或注入装置(例如预充式注射器或自动注入器)中的每种拮抗剂；或于单一容器或注入装置中的共同配制的所有三种拮抗剂。试剂盒可以包括有包括关于试剂盒中的药物组合物和剂型的信息的药品说明书。一般来说，所述信息有助于患者和医生有效且安全地使用被封装的药物组合物。举例来说，以下关于本发明的组合的信息中的任一个可以在说明书中供应：药物动力学、药效动力学、临床研究、功效参数、适应症和用途、禁忌、警告、预防措施、不良反应、过量、适当剂量和施用、供应方式、适当的储存条件、参考物、制造商/经销商信息和专利信息。
治疗和施用
LEPR/GDF8/ActA组合已经展现引起施用有组合的个体中的瘦质量增加的非凡能力。所述瘦质量增加有可能以脂肪质量增加为代价。LEPR/GDF8/ActA组合与仅GDF8和ActA的阻断相比引起瘦质量更大程度地增加，并且脂肪质量增加低于在单独LEPR拮抗剂情况下观察到的脂肪质量增加。这可能归因于现用于构建额外肌肉之脂肪产生的热量。
向个体施用本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的方法包括将彼此联合的组合的组分引入个体的身体中。所述引入可以通过任何可接受的途径，例如胃肠外来进行。所述组分可以被共同配制成单一组合物或配制成单独组合物。如果单独组合物中的组分中的一种或多种的施用是作为方案的一部分进行，那么所述投与可以在时间上隔开。在本发明的一个实施例中，所述方法包含将所有三种组分一次注入个体中；在本发明的另一个实施例中，GDF8拮抗剂和ActA拮抗剂被配制在一起并且连同LEPR拮抗剂在单独注入中一次注入；在本发明的另一个实施例中，所有三种拮抗剂在三次单独注入中分开注入(例如皮下、静脉内或肌内或所述途径中的两个或三个的组合)。
本发明的范围提供增加有需要的个体的食物摄入、肥胖、体重(例如以脂肪质量为代价)、肌力、肌肉纤维大小或瘦质量(例如以脂肪质量为代价)的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
此外，本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)可以用于：
-治疗或预防将通过以下的拮抗作用进行治愈或改善至任何程度的疾病或病况：(i)LEPR(例如高瘦素血症或导致过量LEPR信号传导的OB-R瘦素受体表达增加)、(ii)GDF8(例如肌肉萎缩/耗损)和/或(iii)ActA；和/或
-治疗或预防将通过使得以下增加或逆转以下降低进行治愈或改善至任何程度的疾病或病况：食物摄入、肥胖、体重(例如以脂肪质量为代价)、肌肉纤维大小、肌力或瘦质量(例如以脂肪质量为代价)；
以上是通过向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)来进行。可以被治疗或预防的所述疾病或病况包括例如营养不良、发育迟缓、食物/热量摄入不足、进食障碍、恶病质、肌肉萎缩/耗损、年龄相关性肌肉减少症和肌肉损伤。所述病况和疾病在本文中被详细地论述。
营养不良为将受益于LEPR/GDF8/ActA组合疗法的个体的病况的实例。营养不良为用于描述任何营养不平衡的术语；从营养过度到营养不足，例如如医院和住宅护理机构中所见。出于本发明的目的，营养不良是指营养不足(除非另外说明)。因此，本发明提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合来治疗或预防个体的营养不良的方法，所述个体例如为医院或住宅护理机构中的人。
营养不良可能由于以下而发展：
-饮食摄入不足；
-与疾病状态相关的需求增加(例如感染HIV的个体和患有AIDS(获得性免疫缺陷综合症)或囊肿纤维化的个体可能需要增加的饮食摄入以便维持正常体重)，对于所述疾病状态，饮食摄入增加不足以补偿；和/或
-基础疾病的并发症(例如患有硬化、慢性胰腺炎、乳糖酶缺乏症、胰腺癌、淀粉样变性病、乳糜泻、克罗恩氏病、辐射性肠炎和爱迪生氏病(Addison's disease)的患者可能由于消化剂不足而患有吸收障碍；和患有癌症或感染性疾病(或其它疾病)的患者可能罹患基础疾病的继发性恶病质(参见下文))，对于所述并发症，饮食摄入增加不足以补偿。
因此，本发明包括逆转或停止个体的营养不良的方法，所述营养不良归因于饮食摄入缺乏、与疾病状态(例如HIV或AIDS)相关的需求增加和/或基础疾病的并发症，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
营养不良与患者的负面结果，包括感染率和并发症率较高、肌肉损失增加、伤口愈合减弱、住院时长较长以及发病和死亡增加相关。因此，本发明包括减少个体与营养不良相关的负面结果(例如降低感染可能性或预防伤口愈合减弱)的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
存在许多用于识别营养不良风险和诊断营养不良的营养筛检和评估工具。举例来说，营养不良筛检工具(MST)为评估近期体重和食欲不振的简单、三个问题的工具，其经验证用于一般医疗、手术和肿瘤患者(Anthony，《用于住院患者的营养筛检工具(Nutritionscreening tools for hospitalized patients)》，《临床营养学实践(Nutr.Clin.Pract.)》2008；23:373-382；Ferguson等人,《用于接受放射疗法的患者的营养不良筛检工具的验证(Validation of a malnutrition screening tool for patientsreceiving radiotherapy.)》《澳大利亚放射学(Australas.Radiol.)》1999；43:325-327)。小型营养评估(MNA)经特定地研发用于在医院、疗养院和社区中的老年患者(≥65岁)当中使用，并且因此受限于这种人口统计(Anthony,《用于住院患者的营养筛检工具(Nutritionscreening tools for hospitalized patients)》,《临床营养学实践》2008；23:373-382；Gibson,《营养评估原理(Principles of Nutritional Assessment.)》第2版纽约的牛津大学出版社公司；美国纽约:2005)。营养风险筛选(NRS-2002)结合疾病严重程度的主观评估(基于营养需求增加和/或代谢应激)使用近期体重减轻、BMI降低和饮食摄入减少，以生成营养风险分数(Anthony，《用于住院患者的营养筛检工具》，《临床营养学实践》2008；23:373-382)。研发四个项目的短营养评估问卷(SNAQ)以诊断住院患者的营养不良并且为饮食转诊提供指示并概述营养治疗计划(Anthony，《用于住院患者的营养筛检工具》《临床营养学实践》2008；23:373-382；Kruizenga等人，《针对营养不良的医院筛检工具的研发和验证：短营养评估问卷(SNAQ)(Development and validation of a hospital screening toolfor malnutriton:the short nutritional assessment questionnaire(SNAQ))》《临床营养(Clin.Nutr.)》2005；24:75-82)。这种情况已经针对住院患者和门诊患者使用以及住宅患者加以验证，并且不需要计算BMI(Kruizenga等人《SNAQ(RC)，作为住宅护理中的营养不足辨识第一步骤的简易交通灯系统((The SNAQ(RC),an easy traffic light system asa first step in the recognition of undernutrition in residential care.)》《营养、健康与老年化杂志(J.Nutr.Health Aging.)》2010；14:83-89；Neelemaat等人,《筛检医院门诊患者的营养不良，SNAQ营养不良筛检工具也可以应用于这种群体？(Screeningmalnutrition in hospital outpatients.Can the SNAQ malnutrition screening toolalso be applied to this population？)》《临床营养》2008；27:439-446)。主观全球评估(SGA)为最常用的营养评估工具之一，并且通过完成问卷来评估营养状态，所述问卷包括关于体重变化、饮食摄入变化、胃肠道症状、与营养不良有关的功能容量变化以及脂肪和肌肉储存物的评估以及水肿和腹水的存在的数据(Detsky等人,《何为营养状态的主观全球评估？(What is subjective global assessment of nutritional status？)》《肠外和肠内营养杂志(JParenter Enteral Nutr.)》1987；11:8-13)。
医院营养不良为个体入院所经历的病况。营养不良状态可以在个体住院期间预先存在或发展。本发明提供治疗或预防个体的医院营养不良的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
营养不良也为患有囊肿纤维化的个体所罹患的常见病况。各种相关和不相关的复杂因素都可能导致患有囊肿纤维化的患者的能量不平衡。根据疾病表达的差异并随着疾病的发展，对生长潜力的净作用在患者中有显著差异。本发明提供治疗或预防患有囊肿纤维化的个体的营养不良的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
孩童期发育迟缓为因热量摄入不足、热量吸收不足或热量消耗过多所致的营养不足状态。在新生儿期，发育迟缓可能与常见基础疾病相关，例如坏死性小肠结肠炎后的短肠、肠扭结和肠切除、先天性吸收缺陷和小肠结构缺陷以及食物摄入不足。在婴儿期(2-8月龄)，发育迟缓可能与常见基础疾病相关，例如食物摄入不足、忽略症、对奶牛乳蛋白肠过敏、食道炎伴胃食道回流、囊肿纤维化、进食障碍和/或在基础心脏、神经、肿瘤或肾病情况下的能量需求增加、乳糜烂、在免疫系统缺陷情况下的慢性腹泻、自身免疫性肠病、肠炎后综合征和吸收不良综合征以及代理型孟乔森综合征(munchausen syndrome by proxy)。在幼童期(9-36个月)，发育迟缓可能与常见基础疾病相关，例如食物摄入不足、忽略症、乳糜炎、囊肿纤维化、进食障碍和/或在基础心脏、神经、肿瘤或肾病情况下的能量需求增加、在免疫系统缺陷情况下的慢性腹泻和代理型孟乔森综合征。在孩童期(3-16岁)，发育迟缓可能与常见基础疾病相关，例如食物摄入不足、忽略症、精神病症(例如神经性厌食症)、慢性发炎性肠病、乳糜病、囊肿纤维化、进食障碍和/或在基础心脏、神经、肿瘤或肾病情况下的能量需求增加、在免疫系统缺陷情况下的慢性腹泻和贾弟虫病(lambliasis)以及其它慢性肠感染。本发明提供治疗或预防个体的孩童期发育迟缓(例如在初生儿、婴儿、幼童或孩童期)的方法，举例来说，所述孩童期发育迟缓的特征在于本文所论述的疾病或病况中的任一种或多种，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
食物摄入不足可能与以下症状相关：食欲缺乏、慢性呕吐、吞咽和咀嚼病症、食道蠕动异常和例如与心脏和肺病症相关的呼吸急促。本发明提供治疗或预防个体的例如与本文所论述的症状相关的食物摄入不足的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
特征在于热量摄入不足的进食障碍包括厌食症和/或贪食症。本发明提供治疗或预防个体的厌食症和/或贪食症的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。在本发明的一个实施例中，厌食症为神经性厌食症、老年化厌食症、接受血液透析的患者的厌食症。
恶病质为常常与基础疾病相关并且特征在于肌肉损失伴或不伴脂肪质量损失的复杂代谢综合征。恶病质的显要临床特点为成人体重减轻(针对流体保留进行校正)或儿童生长失败(不包括内分泌障碍)。厌食症、炎症、胰岛素抗性和肌肉蛋白分解增加为通常与恶病质相关的症状。本发明提供例如在本文阐述的任何阶段(例如难治性恶病质)和/或如本文或所属领域中阐述的任何基准所定义，治疗或预防个体的恶病质(或恶病质的任何症状)的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
其它疾病、病况或治疗的继发性恶病质包括以下的继发性恶病质：厌食症或其它精神进食障碍、肺病(例如慢性阻塞性肺病(COPD))、慢性肾病、感染性疾病(例如HIV感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS))、充血性心脏衰竭、辐射治疗、癌症(例如肝细胞癌、黑色素瘤和/或乳腺癌)、慢性心脏衰竭、自身免疫病症(例如发炎性肠病、红斑狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、克罗恩氏病或牛皮癣)、囊肿纤维化、心血管疾病、血压升高、抑郁和/或神经退化性病症。本发明提供治疗或预防个体的任何疾病或病况，例如本文阐述的任何疾病或病况(例如癌症)的继发性恶病质的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
关于在2011年5月在《柳叶刀肿瘤学(Lancet Oncology)》中公开的癌症恶病质的定义和分类的国际共同声明确立这些用于诊断患有癌症的患者的恶病质的基准。
(i)在过去6个月内体重减轻大于5％；或
(ii)BMI小于20并且任何程度的体重减轻大于2％；或
(iii)与肌肉减少症(另一种耗损性综合征)和超过2％体重减轻一致的四肢骨骼肌指数。Fearon等人,《柳叶刀肿瘤学》2011年5月；12(5):489-95。
由小组协定的癌症恶病质的阶段为：
恶病质前：小于5％体重减轻以及例如葡萄糖耐受性异常或厌食症的其它症状；
恶病质：大于5％体重减轻或与恶病质诊断基准一致的其它症状和病况；和
难治性恶病质：正在经历恶病质的不再对癌症治疗有反应的患者具有低表现分数，并且具有少于3个月的预期寿命。
肌肉萎缩或耗损伴随去神经或无活动性发生在肌肉中，但也为对空腹和各种疾病和病况的全身反应。肌肉萎缩可以呈肌少症、肌肉质量下降和/或力弱症、肌力下降的形式。这些疾病和病况包括败血症、AIDS、肾和心脏衰竭、糖皮质激素过量(例如库辛综合征(Cushing syndrome))和创伤，并且肌肉萎缩也存在于80％患癌患者中。另外，肌肉萎缩或耗损可能由以下造成或与以下相关：废用、不可移动、卧床休息、损伤(例如髋关节骨折)、与运动神经元损失相关的神经退化性疾病、医药治疗或手术干预(例如髋关节置换、膝关节置换等)或必然地机械通气。本发明提供治疗或预防个体的肌肉萎缩或耗损(例如，例如AIDS或癌症的疾病或病况的继发性肌肉萎缩或耗损)的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。在本发明的一个实施例中，肌肉萎缩为肌肉减少症，例如年龄相关性肌肉减少症或接受血液透析和/或患有慢性肾病恶病质的个体的肌肉减少症。年龄相关性肌肉减少症为骨骼肌质量的退化性损失(例如50岁后每年损失约0.5％-1％)、骨骼肌品质的退化性损失和与老年化相关的骨骼肌力的退化性损失。因此，本发明包括治疗或预防因年龄相关性肌肉减少症所致的肌肉萎缩的方法。
肌肉损伤可能由过度费力或突然扭曲的应变，例如应变或撕裂造成。肌肉撕裂可能导致肿胀、疼痛和严重出血，这可能导致血凝块。严重撕裂可能需要手术。LEPR/GDF8/ActA组合的肌肉刺激性质使其适用于治疗或预防肌肉损伤。本发明提供治疗或预防个体的肌肉损伤的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
可以使用本发明的LEPR/GDF8/ActA组合进行治疗或预防的其它病况包括肌肉萎缩性侧索硬化、关节炎、自身免疫病症、良性和恶性嗜铬细胞瘤、乳腺癌、癌症、心血管疾病、慢性心脏衰竭、慢性阻塞性肺病、抑郁、糖尿病、血压升高、糖皮质激素诱发的肌病变、肝细胞癌、发炎性肠病、瘢痕瘤和增生性瘢痕、红斑狼疮、黑色素瘤、代谢综合征、多发性硬化症、肌肉萎缩症(例如肌强直性、杜兴氏(Duchenne)、贝克尔(Becker)、肢节型、颜面肩胛肱骨型(FSHD，也称为兰迪二氏疾病(Landouzy-Dejerine))、先天性、眼咽型、远侧、埃默里-德雷弗斯(Emery-Dreifuss)等)、神经退化性病症、器官萎缩、骨关节炎、骨质减少、骨质疏松症、帕金森氏病(Parkinson's disease)、子痫前症、牛皮癣、肺动脉高血压、肌肉减少症、败血症和子宫肌瘤/平滑肌瘤。
本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)有效地增加瘦肌肉质量和肌力并且因此有效地增强运动表现。因此，本发明提供增强有需要的个体的运动表现的方法，所述方法包含向个体施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。运动表现包括步行速度、跑步速度、每单位时间(例如超过30秒)坐立和站立的能力、每单位时间(例如超过6分钟)的步行距离、二头肌卷曲重量、胸部推举重量、楼梯爬升速度(例如爬升4步的时间)和/或握柄强度(例如如使用手动测动力法所测量)。在本发明的一个实施例中，个体正在进行中风康复(例如中风偏瘫康复)或物理疗法。因此，本发明的LEPR/GDF8/ActA组合可以用作其中期望运动表现增强的任何治疗程序，例如物理疗法，例如中风康复或手术恢复(例如用于修复肌腱或韧带损伤的膝关节手术或膝关节置换)或身体损伤恢复的佐剂。
施用有瘦素受体拮抗剂(例如抗LEPR抗体)的个体(例如人类)可能经历肝甘油三酯含量或血清甘油三酯含量增加。一种减少这种增加的方法为联合LEPR拮抗剂施用活化素A拮抗剂(例如抗ActA抗体或其抗原结合片段)和GDF8拮抗剂(例如抗GDF8抗体或其抗原结合片段)。举例来说，所述方法可以包含施用治疗有效量的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)。
“个体”为哺乳动物，例如人类、狗、猫、马、母牛、小鼠、大鼠、猴(例如猕猴，例如食蟹猴或恒河猴)或兔。
本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)的有效剂量或治疗有效剂量为约0.1到约200mg/kg(所有三种抗体或抗原结合片段)，例如以治疗或预防本文所论述的疾病或病况中的任一种(例如恶病质)。
在特定实施例中，本发明的LEPR/GDF8/ActA组合(例如H4H18457P2/H4H1657N2/H4H10446P2)可以单独使用或与任何其它另外的治疗剂和/或治疗程序联合使用，所述另外的治疗剂和/或治疗程序例如适用于增加个体的食物摄入、肥胖、体重、瘦质量(例如肌肉质量)和/或强度和/或适用于治疗或预防本文所论述的疾病或病况中的任一种，例如恶病质。
在本发明的一个实施例中，治疗程序为鼻胃管饲喂。
在本发明的一个实施例中，另一种治疗剂为以下中的任一种或多种：食欲刺激剂、大麻素、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、平滑肌松弛剂、硝酸盐、利尿剂、铁、支气管扩张剂、抗胆碱剂、皮质类固醇、抗生素、非类固醇消炎药(NSAID)、免疫抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、抗抑郁剂、抗癌疗法或局部药剂。
在本发明的一个实施例中，另一种治疗剂为以下中的任一种或多种：5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯嘌呤、阿托伐他汀(atorvastatin)与氨氯地平(amlodipine)的组合、洛伐他汀(lovastatin)与烟酸的组合、例如辛伐他汀(simvastatin)与依泽替米贝(ezetimibe)的组合、阿托品(atropine)、阿达木单抗(adalimumab)、沙丁胺醇(albuterol)、阿法西普(alefacept)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿米替林(amitriptyline)、阿拉莫林(anamorelin)、阿福莫特罗(arformoterol)、阿司匹灵(aspirin)、阿司匹灵、阿托伐他汀、阿托品、硫唑嘌呤、阿奇霉素(azithromycin)、贝那普利(benazepril)、倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、布美他尼(bumetanide)、布酚宁(buphenine)、安非他酮(bupropion)、卡托普利(captopril)、卡铂(carboplatin)、塞内昔布(celecoxib)、聚乙二醇化赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、氯噻嗪、氯噻酮、环孢菌素、西它普兰(citalopram)、克仑特罗(clenbuterol)、煤焦油、椰子油、皮质类固醇、二苯环庚啶、环磷酰胺、达拉非尼(dabrafenib)、达利珠单抗(daclizumab)、去羟米松(desoximetasone)、苯海索(desvenlafaxine)、地塞米松(dexamethasone)、双氯芬酸、双环胺、二氟尼柳、二甲弗林(dimebolin)、富马酸二甲酯、富马酸二甲酯、蒽三酚、多烯紫杉醇、多培沙明(dopexamine)、小红莓(doxorubicin)、屈大麻酚(dronabinol)、度洛西汀(duloxetine)、依法利珠单抗(efalizumab)、依那普利(enalapril)、依诺波沙(enobosarm)、肾上腺素、表阿霉素(epirubicin)、红霉素(erythromycin)、艾司西酞普兰(escitalopram)、依那西普(etanercept)、依地尼酸盐(ethacrynate)、依托度酸(etodolac)、非诺特罗(fentoterol)、芬戈莫德(fingolimod)、氟尼缩松(flunisolide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可龙(fluocortolone)、氟西汀(fluoxetine)、氟伐他汀(fluvastatin)、福莫特罗(formoterol)、福辛普利(fosinopril)、呋喃苯胺酸、醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、戈利木单抗(golimumab)、肼苯哒嗪、氢氯噻嗪、氢化可的松、氢化可的松-17-丁酸盐、氢化可的松-17-戊酸盐、羟基尿素、天仙子胺、天仙子胺、布洛芬(ibuprofen)、吲达帕胺、吲哚美辛、英夫利昔单抗(infliximab)、干扰素β-1a、干扰素β-1b、白细胞介素-2、伊匹单抗(ipilimumab)、异他林(isoetarine)、异丙肾上腺素、异丙特醇、二硝酸异山梨醇酯、JX-594、酮洛芬(ketoprofen)、左沙丁胺醇、赖诺普利(lisinopril)、洛伐他汀、甲地孕酮、乙酸甲地孕酮、甲哌佐酯、美沙拉嗪(mesalazine)、甲胺喋呤、甲胺喋呤、甲氯噻嗪、美托拉宗(metolazone)、美伐他汀(mevastatin)、米托蒽醌、莫西普利(moexipril)、大麻隆(nabilone)、萘普生(naproxen)、那他珠单抗(natalizumab)、纳武单抗(nivolumab)、去甲替林(nortriptyline)、奥克雷珠单抗(ocrelizumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、口服营养补充剂(例如Protibis曲奇饼或基于乳制品的补充剂)、奥西那林(orciprenaline)、奥沙普嗪(oxaprozin)、太平洋紫杉醇、对氨基苯甲酸、肠胃外铁、帕罗西汀(paroxetine)、派姆单抗(pembrolizumab)、培哚普利(perindopril)、苯巴比妥(phenobarbital)、苯巴比妥、苯巴比妥与东茛菪碱、吡布特罗(pirbuterol)、吡罗昔康(吡罗昔康)、匹伐他汀(pitavastatin)、普伐他汀(pravastatin)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松、丙卡特罗(procaterol)、富脯氨酸的肽(PRP)-1、补骨脂素、喹那普利(quinapril)、雷马普利(ramapril)、利托君(ritodrine)、利妥昔单抗(rituximab)、罗素他汀(rosuvastatin)、沙丁胺醇(salbutamol)、双水杨酸盐、东茛菪碱、舍曲林(sertraline)、辛伐他汀、索拉非尼(sorafenib)、舒林酸(sulindac)、特布他林(terbutaline)、特立氟胺(teriflunomide)、茶碱、噻托铵(tiotropium)、托麦汀(tolmetin)、托西迈(torsemide)、曲美替尼(trametinib)、群多普利(trandolapril)、曲唑酮(trazodone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、曲安西龙醇(triamcinolonealcohol)、维罗非尼(vemurafenib)、文拉法西(venlafacine)、文拉法辛(venlafaxine)、维生素D3或维生素D类似物。
本发明还涵盖其中LEPR/GDF8/ActA组合不与另一种治疗剂和/或程序联合的实施例。
实例
这些实例意在举例说明本发明并非对其加以限制。实例中阐述的组合物例如LEPR/GDF8/ActA组合和方法形成本发明的一部分。
本发明的三种特定拮抗剂抗LEPR抗体H4H17322P2、H4H18457P2和H4H18464P2对食物摄入、体重和肥胖的作用在表达瘦素受体的单独饲养的经基因工程改造的LEPR
在治疗前5天与1天之间(第-5天和第-1天)测量基线每日食物摄入。通过μCT定量治疗前四天和治疗后6天(第-4天和第6天)身体组成，包括肥胖。在第0天，基于从治疗前1天(第-1天)起的体重，将三十二只12到13周龄雄性LEPR
用抗LEPR拮抗剂抗体治疗的小鼠展现食物摄入改变百分比增加(数据未示出)和体重变化百分比增加(表1A)。在同型对照抗体治疗情况下观察不到这些增加。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用30mg/kg H4H17322P2治疗的小鼠在治疗后一天(第1天)开始并在后续时间点展示相当大的食物摄入增加。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用30mg/kgH4H18457P2治疗的小鼠在第2天开始并在后续时间点展示相当大的食物摄入增加。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用30mg/kg H4H18464P2治疗的小鼠在第2天开始并在后续时间点、但不在第4天展示相当大的食物摄入增加。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用30mg/kgH4H17322P2治疗的小鼠在治疗之后四天(第4天)开始并在后续时间点展示相当大的体重变化百分比增加。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用30mg/kg H4H18457P2治疗的小鼠在第3天开始并在后续时间点展示相当大的体重变化百分比增加。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用30mg/kg H4H18464P2治疗的小鼠在第4天开始并在后续时间点展示相当大的体重变化百分比增加。如表1B中所描绘，治疗前(第-4天)各组之间不存在脂肪质量差异。与同型对照抗体相比，用30mg/kg H4H17322P2、H4H18457P2和H4H18464P2抗体治疗的小鼠在治疗之后6天(第6天)展现相当大的脂肪质量和瘦素含量增加(表1C)。总之，用LEPR拮抗剂抗体而非同型对照抗体进行的治疗会增加小鼠的食物摄入、体重、肥胖和瘦素含量。
表1A.体重(相对于基线的差异g)
REGN1945：抗Fel d1(IgG4)
SEM：平均值的标准误
表1B.身体组成
表1C.血浆瘦素(pg/mL)
本发明的特异性拮抗剂抗LEPR抗体(H4H18457P2)以及抗MSTN(也称为抗GDF8)和抗INHBA(也称为抗活化素A)阻断抗体(分别为H4H1657N2(REGN1033)和H4H10446P2(REGN2477))对食物摄入、体重、身体组成、单独组织重量和离体肌力量生成的作用在表达瘦素受体的单独饲养的经基因工程改造的20到24周龄雄性LEPR
在第-8天与第0天之间测量基线每日食物摄入。在第-5天或第-1天，通过NMR(核磁共振)定量基线全身瘦质量和脂肪质量。在第0天，基于从第-5天起的身体组成以及从第0天起的体重，将小鼠分层为四组，每组11到12只小鼠。从第0天开始，每个组通过皮下注入接受对应的抗体治疗剂量。以10mg/kg一周两次给药REGN1033、REGN2477和对应的IgG4
a)IgG4
b)REGN1033+REGN2477(10mg/kg+10mg/kg，2×/周)，数目N＝11
c)H4H18457P2(30mg/kg，1×/周)，数目＝11
d)REGN1033+REGN2477+H4H18457P2(10mg/kg+10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)。
测量每只动物在研究期间的食物摄入(表2A)和体重(表2B)。在第6或7天和第13或14天定量身体组成(表2C和4A-4D)。在第22天、第23天或第24天，对动物进行安乐死，并对分离的胫骨前肌执行离体力测量(表3A和3B)。还定量单独器官和骨骼肌重量(表5-7)。
与注入同型对照抗体的小鼠相比，用单独或与REGN1033和REGN2477组合的H4H18457P2治疗的小鼠在治疗之后七天(第7天)开始并在后续时间点展示相当大的累积食物摄入增加(表2A)。与注入同型对照抗体的小鼠相比，用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠显示类似的累积食物摄入(表2A)。与用同型对照抗体治疗的小鼠相比和在与用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠相比时，用单独或与REGN1033和REGN2477组合的H4H18457P2治疗的小鼠在给药之后7天(第7天)开始并在后续时间点展现体重增加(表2B)。与用同型对照抗体治疗的小鼠相比，用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠不显示明显的体重变化(表2B)。在与注入同型对照的小鼠相比时，在第6、13和20天，每个治疗组中的小鼠展示相对于基线(第-1天)的相当大的瘦质量增加(表4C)。与用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠相比，在第6、13和20天，用H4H18457P2、REGN1033和REGN2477治疗的小鼠展示相对于基线的瘦质量增量增加(表4C)。在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠显示相当大的相对于基线的脂肪质量变化减少。在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时和在与用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠相比时，在第6、13和20天，用单独或与REGN1033和REGN2477组合的H4H18457P2治疗的小鼠显示相对于基线的脂肪质量变化增加(表4A)。在与用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠相比时，在第6、13和20天，用H4H18457P2以及REGN1033和REGN2477治疗的小鼠显示相当大的相对于基线的脂肪质量增量减少(表4A)。与施用有同型对照抗体的小鼠相比，用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠以及用H4H18457P2、REGN1033和REN2477治疗的小鼠展示分离的胫骨前肌骨骼肌的增加的颤搐力和峰值强直性张力(表3A)。因此，在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠和用H4H18457P2、REGN1033和REGN3477治疗的小鼠展示增加的骨骼肌(四头肌、胫骨前肌和腓肠肌)重量(表5)。与施用有同型对照抗体的小鼠相比，用单独H4H18457P2和与REGN1033和REGN2477的组合治疗的小鼠显示增加的腹股沟、性腺和棕色脂肪组织重量(表5)。与用REGN1033和REGN2477治疗的小鼠相比，用H4H18457P2以及REGN1033和REGN2477治疗的小鼠中的棕色脂肪组织重量(表5)相当大地增加。在与同型对照施用相比时，在治疗组当中未检测到心脏和肝重量的明显变化(表5)。总之，这些数据表明，LEPR拮抗剂H4H18457P2增加了小鼠的食物摄入、体重并增加了脂肪质量。另外，用LEPR拮抗剂H4H18457P2与抗MSTN(REGN1033)和抗ActA(REGN2477)阻断抗体的组合进行的治疗引起食物摄入、体重、瘦质量、脂肪质量、脂肪组织重量、骨骼肌重量增加和骨骼肌肌力增强。在与REGN1033和REGN2477治疗相比时，用H4H18457P2、REGN1033和REGN2477进行的组合治疗引起瘦质量再次相对于基线增加并引起脂肪质量相对于基线较少量增加。
表2A.食物摄入(g)
表2B.体重(相对于基线的差异g)
表2C.相对于基线的身体组成变化
表3A.颤搐力、峰值强直性张力和比力(mN)
表3B.等长强直性张力(mN)
表4A.脂肪质量(g)
表4B.脂肪质量(相对于基线的差异g)
表4C.瘦质量(g)
表4D.瘦质量(相对于基线的差异g)
表5.器官质量、肌肉质量、脂肪质量(mg)
TA：胫骨前肌；GA：腓肠肌；WAT：白色脂肪组织；BAT：棕色脂肪组织。
表6.器官质量、肌肉质量、脂肪质量(起始体重的百分比)
表7.器官质量、肌肉质量、脂肪质量(相对于对照的变化％)
本发明的特异性拮抗剂抗LEPR抗体(H4H18457P2)以及抗MSTN(也称为抗GDF8)和抗INHBA(也称为抗活化素A)阻断抗体(分别为H4H1657N2(REGN1033)和H4H10446P2(REGN2477))对食物摄入、体重、身体组成、单独组织重量和离体肌力量生成的作用在表达瘦素受体的单独饲养的经基因工程改造的12到14周龄雄性LEPR
在第-8天与第0天之间测量基线每日食物摄入。在第-1天，通过NMR定量基线全身瘦质量和脂肪质量。在第0天，基于从第-1天起的身体组成以及从第0天起的体重，将小鼠分层为六组，每组7到8只小鼠。从第0天开始，每个组通过皮下注入接受对应的抗体治疗剂量。以10mg/kg一周两次给药REGN1033、REGN2477和对应的IgG4
a)IgG4P对照(10mg/kg+10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)，数目＝7
b)REGN1033(10mg/kg，2×/周)，数目＝7
c)REGN1033+REGN2477(10mg/kg+10mg/kg，2×/周)，数目＝7
d)H4H18457P2(30mg/kg，1×/周)，数目＝7
e)REGN1033+H4H18457P2(10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)，数目＝8
f)REGN1033+REGN2477+H4H18457P2(10mg/kg+10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)，数目＝8
测量每只动物在研究期间的食物摄入(表8B)和体重(表8A)。在第6、13和20天定量身体组成(表8C和8D)。在第21或22天，对动物进行安乐死以进行包括骨骼肌纤维数目和横截面纤维面积的额外分析(表9-11)。
与同型对照抗体相比，当单独或与REGN1033或REGN1033和REGN2477组合施用时LEPR拮抗剂H4H18457P2相当大地增加体重和累积食物摄入。在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用H4H18457P2治疗的小鼠分别在第13天和第8天开始并在后续时间点显示相当大的体重和累积食物摄入增加(表8A和8B)。与同型对照抗体施用相比，在第7天开始并在后续时间点H4H18457P2和REGN1033治疗情况下的体重和累积食物摄入相当大地增加。在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用H4H18457P2、REGN1033和REGN2477治疗的小鼠还分别在第8天和第7天到研究结束时显示增加的体重和食物摄入。相对于施用有对照抗体的小鼠，用REGN1033或REGN1033和REGN2477治疗的小鼠并不展现明显的体重或累积食物摄入变化。
在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用单独或与REGN1033或REGN1033和REGN2477组合的H4H18457P2治疗的小鼠在所有测量时间点(第6、13和20天)显示相对于基线的脂肪质量增加(表8D)。与用单独或与REGN1033组合的H4H18457P2治疗的小鼠相比，在第13和20天，用H4H18457P2、REGN1033和REGN2477治疗的小鼠显示较少的相对于基线的脂肪质量增量(表8D)。在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用H4H18457P2、REGN1033和REGN2477治疗的小鼠在第13天和第20天也显示相当大的相对于基线的瘦质量增量增加(表8C)。
组织学分析显露，与同型对照抗体施用相比，任何治疗组对胫骨前肌或腓肠肌中的肌肉纤维数目没有重大影响(表9和10)。与同型对照抗体递送相比，用REGN1033以及REGN2477或H4H18457P2治疗的小鼠在比目鱼肌中显示增加的肌肉纤维数目(表11)。在检查的所有三种肌肉(胫骨前肌、腓肠肌和比目鱼)中，在与同型对照抗体施用相比时，H4H18457P2治疗不影响肌肉纤维面积(表9、10和11)。在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用REGN1033、REGN1033和REGN2477、REGN1033和H4H18457P2、或REGN1033和REGN2477和H4H18457P2治疗的小鼠在胫骨前肌和腓肠肌中显示增加的肌肉纤维面积(表9和10)。在比目鱼肌肉中，仅用H4H18457P2、REGN1033和REN2477的三联组合治疗的小鼠显示出相对于施用有同型对照抗体的小鼠增加的肌肉纤维面积(表11)。
总之，单独的LEPR拮抗剂抗体治疗增加体重、食物摄入和肥胖，并且与抗ActA和/或抗MSTN阻断抗体的组合分别诱导肌肉纤维面积或数目的额外增加。
表8A.体重(g)
表8B.累积食物摄入(g)
表8C.瘦质量(相对于基线的差异g)
表8D.脂肪质量(相对于基线的差异g)
表9.TA肌纤维面积和数目
表10.GA肌纤维面积和数目
表11.比目鱼肌纤维面积和数目
特异性拮抗剂抗LEPR抗体(H4H18457P2)以及抗MSTN(也称为GDF8)和抗INHBA(也称为活化素A)阻断抗体(分别为H4H1657N2(REGN1033)和H4H10446P2(REGN2477))对食物摄入、体重、身体组成、单独组织重量和离体肌力量生成的作用在表达瘦素受体的单独饲养的经基因工程改造的12到14周龄雄性LEPR
在第-8天与第0天之间测量基线每日食物摄入。在第-1天，通过NMR定量基线全身瘦质量和脂肪质量。在第0天，基于从第-1天起的身体组成以及从第0天起的体重，将小鼠分层为六组，每组7到8只小鼠。从第0天开始，每个组通过皮下注入接受对应的抗体治疗剂量。以10mg/kg一周两次给药REGN1033、REGN2477和对应的IgG4
a)IgG4P对照(10mg/kg+10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)，数目＝7
b)REGN1033(10mg/kg，2×/周)，数目＝7
c)REGN1033+REGN2477(10mg/kg+10mg/kg，2×/周)，数目＝7
d)H4H18457P2(30mg/kg，1×/周)，数目＝7
e)REGN1033+H4H18457P2(10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)，数目＝8
f)REGN1033+REGN2477+H4H18457P2(10mg/kg+10mg/kg，2×/周；30mg/kg，1×/周)，数目＝8
测量每只动物在研究期间的食物摄入和体重。在第6、13和20天定量身体组成。在第21或22天，对动物进行安乐死，对单独器官和骨骼肌组织进行称重并收集用于额外分析，包括肝甘油三酯定量和骨骼肌纤维数目和横截面纤维面积。
肝甘油三酯含量的定量显露，在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用单独或与REGN1033组合的H4H18457P2治疗的小鼠显示增加的肝甘油三酯含量(表12)。相比之下，在与施用有同型对照抗体的小鼠相比时，用H4H18457P2以及REGN1033和REGN2477治疗的小鼠中的肝甘油三酯含量未增加(表12)。在与用H4H18457P2以及REGN1033治疗的小鼠相比时，用H4H18457P2以及REGN1033和REGN2477治疗的小鼠展示减少的肝甘油三酯含量(表12)。总之，LEPR拮抗剂抗体治疗增加了肝甘油三酯含量，在用LEPR拮抗剂、抗ActA和抗MSTN阻断抗体进行的组合治疗情况下，肝甘油三酯含量降低。
表12.肝甘油三酯
**7只小鼠中的2只不包括在所示值中的数据
*7只小鼠中的1只不包括在所示值中的数据
序列表
<110> 瑞泽恩制药公司
J·阿尔塔雷霍斯
J·科洛马达
<120> 使用针对瘦素受体、GDF8和活化素A的拮抗剂增加体重和瘦肌肉质量的组合物和方法
<130> 10547WO01
<140> TBD
<141> 2019-12-17
<150> 62/781226
<151> 2018-12-18
<160> 30
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Val Val Arg Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 4
<211> 3
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Ala Ala Ser
1
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 7
Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ile Thr
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 8
Ala Arg Ala Arg Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人
<400> 9
Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Ala Trp Lys Met Ser Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人
<400> 11
Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
1 5
<210> 12
<211> 3
<212> PRT
<213> 智人
<400> 12
Thr Thr Ser
1
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 13
Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Leu Thr
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 14
Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr Ala
1 5
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 15
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ala
1 5
<210> 16
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人
<400> 16
Ala Lys Asp Gly Ala Trp Lys Met Ser Gly Leu Asp Val
1 5 10
<210> 17
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Ser His
20 25 30
Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Leu Tyr Thr Gly Gly Thr Ser Phe Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Ser Met Ser Val Gly Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Ser Gly Ile Thr Phe Thr Gly Ile Ile Val Pro Gly Ser
100 105 110
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 18
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<400> 18
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 19
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 20
<211> 3
<212> PRT
<213> 智人
<400> 20
Gly Ala Ser
1
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 21
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 22
Gly Gly Ser Phe Ser Ser His Phe
1 5
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 23
Ile Leu Tyr Thr Gly Gly Thr
1 5
<210> 24
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 24
Ala Arg Ala Arg Ser Gly Ile Thr Phe Thr Gly Ile Ile Val Pro Gly
1 5 10 15
Ser Phe Asp Ile
20
<210> 25
<211> 444
<212> PRT
<213> 智人
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Val Val Arg Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 26
<211> 215
<212> PRT
<213> 智人
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 27
<211> 447
<212> PRT
<213> 智人
<400> 27
Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Ala Trp Lys Met Ser Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 28
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 29
<211> 453
<212> PRT
<213> 智人
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Ser His
20 25 30
Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Leu Tyr Thr Gly Gly Thr Ser Phe Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Ser Met Ser Val Gly Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Ser Gly Ile Thr Phe Thr Gly Ile Ile Val Pro Gly Ser
100 105 110
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly Lys
450
<210> 30
<211> 215
<212> PRT
<213> 智人
<400> 30
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
机译： 使用抗瘦素受体，GDF8和ACTIVIN A的拮抗剂增强身体重量和瘦肌肉质量的组合物和方法
机译： 使用拮抗剂对瘦蛋白受体，GDF8和Activin A增强体重和瘦肌肉肿块的组合物和方法
机译： 使用瘦蛋白受体，GDF8和Activin A改善体重和瘦肌肉肿块的组合物和方法
