使用Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂治疗胸部癌症的组合疗法

摘要

本发明的目的在于提供一种使用检查点抑制剂与Ad‑REIC/Dkk‑3组合治疗胸部癌症的方法。本发明是一种用于治疗胸部癌症的药物组合物，其包含REIC/Dkk‑3和检查点抑制剂的组合，以及通过对胸部癌症患者施用Ad‑REIC/Dkk‑3和检查点抑制剂来治疗胸部癌症的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及使用Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂治疗胸部癌症的组合疗法。

背景技术

已知REIC/Dkk-3基因是与细胞永生化相关的基因。据报道，该基因的表达在癌细胞中受抑制。还已经报道了REIC/Dkk-3基因用于癌症治疗(专利文献1)。

已知诸如抗PD-1(程序化细胞死亡1)抗体、抗PD-L1(程序性细胞死亡配体1)等检查点抑制剂对于各种恶性肿瘤是有用的。

引用列表

专利文献

PTL 1：国际专利公开WO01/038528

发明内容

技术问题

本发明的目的在于提供一种组合使用检查点抑制剂与Ad-REIC/Dkk-3来治疗胸部癌症的方法。

技术方案

本发明人已经研究了REIC/Dkk-3和检查点抑制剂的组合使用用于治疗胸部癌症的效果。

本发明人发现，REIC/Dkk-3和检查点抑制剂的组合使用增强了全身性T细胞应答和抗肿瘤应答。这表明REIC/Dkk-3和检查点抑制剂的组合使用是治疗胸部癌症的有用方法。

具体地，本发明如下。

[1]一种用于治疗胸部癌症的药物组合物，其包含与检查点抑制剂组合的Ad-REIC/Dkk-3，其中，Ad-REIC/Dkk-3是具有通过从5'末端侧连接以下而制备的DNA构建体的腺病毒载体：

(i)CMV启动子；

(ii)以下REIC/Dkk-3 DNA：

(a)包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的DNA，

(b)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的DNA，

(iii)polyA添加序列；和

(iv)通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子而制备的增强子。

[2]如[1]所述的药物组合物，其中，所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

[3]如[1]所述的药物组合物，其中，所述胸部癌症是间皮瘤。

[4]通过对胸癌患者施用Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂来治疗癌症的方法，其中，所述Ad-REIC/Dkk-3是具有通过从5'末端侧连接以下而制备的DNA构建体的腺病毒载体：

(i)CMV启动子；

(ii)以下REIC/Dkk-3 DNA：

(a)包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的DNA，

(b)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的DNA，

(iii)polyA添加序列；和

(iv)通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子而制备的增强子。

[5]如[4]所述的治疗癌症的方法，其中，所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

[6]如[4]所述的治疗癌症的方法，其中，所述胸部癌症是间皮瘤。

[7]一种将Ad-REIC/Dkk-3与检查点抑制剂组合来治疗胸部癌症的方法。

[8]如[7]所述的方法，其中，所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

[9]如[7]所述的方法，其中，所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体。

[10]如[7]所述的方法，其中，所述检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。

[11]抗PD-1和抗PD-L1抗体操纵免疫系统的用途，以使胸部癌症在细胞表面表达PD-1和PD-L1，使其对REIC/Dkk-3基因易感(REIC/Dkk-3诱导的抗肿瘤免疫；由REIC/Dkk-3诱导的CTL)。

[12]一种在制造用于治疗胸部癌症的药物中将Ad-REIC/Dkk-3与检查点抑制剂组合的方法，其中，所述Ad-REIC/Dkk-3是具有通过从5'末端侧连接以下而制备的DNA构建体的腺病毒载体：

(i)CMV启动子；

(ii)以下REIC/Dkk-3 DNA：

(a)包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的DNA，

(b)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的DNA，

(iii)polyA添加序列；和

(iv)通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子而制备的增强子。

[13]如[12]所述的方法，其中，所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

[14]一种用于治疗胸部癌症的药物，其包含REIC/Dkk-3作为有效成分，并与检查点抑制剂组合使用，其中，所述Ad-REIC/Dkk-3是具有通过从5'末端侧连接以下而制备的DNA构建体的腺病毒载体：

(i)CMV启动子；

(ii)以下REIC/Dkk-3 DNA：

(a)包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的DNA，

(b)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的DNA，

(iii)polyA添加序列；和

(iv)通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子而制备的增强子。

[15]如[14]所述的药物，其中，检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

[16]如[14]所述的药物，其中，所述胸部癌症是间皮瘤。

发明的有益效果

Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂在治疗胸部癌症中具有协同作用。

附图说明

[图1]图1显示了Ad-REIC/Dkk-3的结构的实例。

[图2]图2显示了Ad-REIC/Dkk-3的序列。

[图3]图3显示了MTG-201肿瘤负荷研究(SC注射模型)的研究方案。

[图4]图4显示了MTG-201SC模型中每只小鼠的肿瘤体积变化。

[图5]图5显示了MTG-201SC模型中五只小鼠的平均肿瘤体积变化。

[图6]图6显示了MTG-201SC模型中的五只小鼠的解剖的肿瘤重量。

[图7]图7显示了已建立的AB1 MM肿瘤对PD-1阻断的抗性。

[图8]图8显示了小鼠AB1细胞中REIC蛋白表达的剂量依赖性增加。

[图9]图9显示了REIC蛋白表达对细胞周期的S期停滞。

[图10]图10显示了Ad-REIC和抗PD-1抗体的组合治疗对肿瘤生长的抑制(照片)。

[图11]图11显示了Ad-REIC和抗PD-1抗体的组合治疗对肿瘤生长的抑制(图表)。

[图12]图12显示了Ad-REIC加抗PD-1抗体引起的CD8 T细胞的增加和与肿瘤相关的巨噬细胞的减少。

[图13]图13显示了通过PD-1阻断使CD8 T细胞恢复活力。

[图14]图14显示了通过Ad-REIC加抗PD-1抗体的效应记忆CD8 T细胞的增加和Treg细胞(调节性T细胞)的减少。

[图15]图15显示了组合使用Ad-SGE-REIC制剂和抗PD-1抗体的抗肿瘤作用。

本说明书结合了在美国临时申请62/754,226号和62/831,108号的说明书和附图中描述的内容，基于这些内容要求本申请的优先权。

具体实施方式

本发明的组合疗法使用检查点抑制剂与Ad-REIC/Dkk-3组合。

检查点抑制剂包括抗PD-1(程序性细胞死亡1)抗体、抗PD-L1(程序性细胞死亡配体1)等。

REIC/Dkk-3基因DNA的核苷酸序列示于序列表的SEQ ID NO:1中。此外，由REIC/Dkk-3 DNA编码的REIC的氨基酸序列示于序列表的SEQ ID NO:2中。当使用国家生物信息中心(NCBI)的BLAST(基本局部比对搜索工具)等进行计算时(例如，使用默认(即，初始)参数)，与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少85％，优选至少90％，进一步优选至少95％，特别优选至少97％的序列同一性的DNA包括在REIC/Dkk-3 DNA中。

也可以使用REIC/Dkk-3的片段核苷酸。在SEQ ID NO:1所示的REIC/Dkk-3DNA的核苷酸序列中，包含从第1个核苷酸到第117个至第234个核苷酸的任何单个核苷酸的核苷酸序列的核苷酸的实例包括第1至第117个核苷酸的多核苷酸(SEQ ID NO:3)和第1至第234个核苷酸的多核苷酸(SEQ ID NO:4)。

可以根据常规技术将REIC/Dkk-3基因引入受试者中。

可以通过将REIC/Dkk-3 DNA插入pShuttle载体(Clonetech)中来获得用于构建表达盒的技术实例，该载体包含在商业CMV启动子下游的外源基因插入位点和在插入位点下游的BGA polyA序列，然后将hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子依次连接到BGA polyA序列下游的位点。

可以根据WO2011/062298、US2012-0309050、WO2012/161352和US2014-0147917的描述来制备DNA构建体，其整体上通过引用并入本文。

根据本发明，包含REIC/Dkk-3 DNA的腺病毒载体被称为“Ad-REIC”或“Ad-REIC/Dkk-3”。包含上述DNA构建体的载体系统称为SGE(超基因表达)系统。例如，将含有包含REIC/Dkk-3 DNA的DNA构建体的腺病毒载体称为“Ad5-SGE-REIC/Dkk-3”。图1显示了Ad-REIC/Dkk-3的结构实例，图2显示了Ad-REIC/Dkk-3的序列。

通过将CMV(巨细胞病毒)启动子连接到REIC/Dkk-3 DNA上游的位点，并将polyA添加序列(聚腺苷酸化序列，polyA)连接到REIC/Dkk-3 DNA的下游位点，来制备包含在Ad-REIC/Dkk-3中的DNA构建体。此外，将通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV(巨细胞病毒)增强子制备的增强子(3×enh)连接到polyA添加序列下游的位点。具体而言，通过从5'末端侧连接(i)CMV启动子，(ii)REIC/Dkk-3 DNA，(iii)polyA添加序列和(iv)通过依次连接hTER(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子而制备的增强子来制备DNA构建体。

缺少CMV启动子的含有本发明的REIC/Dkk-3 DNA的DNA构建体的一部分的结构示于图2，其序列示于SEQ ID NO:5。在图2中，BGA polyA序列包含在REIC/Dkk-3 DNA和3x enh之间。包含本发明的REIC/Dkk-3 DNA的DNA构建体具有在SEQ ID NO:5中所示的序列的CMV启动子上游(5′侧)。SEQ ID NO:6显示了包含BGH poly A和三个增强子(包含在以上构建体中)的区域的核苷酸序列。在图2中，核苷酸序列中用框包围的部分(1)和(2)分别表示编码REIC/Dkk-3蛋白的DNA和三个增强子(3×enh)。

以上元件应相互功能上相关(连接)。本文中使用的表达“相互功能上相关(连接)”是指元件彼此相关或连接，使得每个元件可以显示其功能，从而增强要表达的基因的表达。

也就是说，“Ad-REIC/Dkk-3”的DNA构建体是：

[1]用于表达REIC/Dkk-3 DNA的DNA构建体，其是通过从5'末端侧连接以下而制备的：

(i)CMV启动子；

(ii)以下REIC/Dkk-3 DNA：

(a)包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的DNA，

(b)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少90％，95％，97％或98％序列同一性的DNA，

(iii)polyA添加序列；和

(iv)通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子而制备的增强子；

[2]如以上[1]所述的DNA构建体，其中polyA添加序列是衍生自牛生长激素基因的polyA添加序列(BGA polyA)；和

[3]如以上[1]或[2]所述的DNA构建体，其包含SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，其中，连接(ii)REIC/Dkk-3 DNA，(iii)polyA添加序列，和(iv)通过依次连接hTERT(端粒酶逆转录酶)增强子、SV40增强子和CMV增强子制备的增强子。

通过将DNA构建体引入腺病毒载体中来制备重组腺病毒，从而获得上述含有DNA构建体的腺病毒载体。例如，可以通过将含有本发明的DNA构建体的pShuttle载体中的DNA构建体引入腺病毒中，来将DNA构建体引入腺病毒中。

腺病毒载体的特征在于：(1)它能够使基因转移到许多类型的细胞中；(2)在稳定期能够有效地将基因转移到均匀细胞中；(3)可以通过离心浓缩，从而获得高滴度病毒(10-11PFU/ml以上)；(4)并且适合于将基因直接转移到体内组织细胞中。

作为用于基因疗法的腺病毒，已开发出通过缺失E1/E3区域制备的第一代腺病毒载体(Miyake，S.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，93，1320，1996)，通过除E1/E3区域外还缺失E2或E4区域来制备的第二代腺病毒载体(Lieber，A.，等，J.Virol.，70，8944，1996；Mizuguchi，H.&Kay，M.A.,Hum.Gene Ther.，10，2013，1999)，和通过几乎完全缺失腺病毒基因组(GUTLESS)制备的第三代腺病毒载体(Steinwaerder，D.S.，等，J.Virol.，73，9303，1999)。可以使用这些腺病毒载体中的任何一种，而对根据本发明的基因转移没有特别限制。

将包含含有REIC/Dkk-3 DNA的DNA构建体的重组腺病毒载体施用于人受试者或作为另一种哺乳动物的受试者，从而将用于癌症治疗的基因递送至该受试者的癌细胞，该基因在癌细胞中表达，并且肿瘤细胞的生长受抑制，从而表现出对癌症的治疗作用。

本发明的腺病毒载体可以通过基因疗法领域中可以使用的方法来施用，例如通过血管内施用(例如，静脉内施用和动脉内施用)、经口施用、腹膜内施用、气管内施用、支气管内施用、皮下施用或经皮施用。特别是，本发明的腺病毒载体对特定组织或细胞具有强导向性，因此能够有效地将靶基因递送至特定组织或细胞。因此，即使通过血管内施用腺病毒载体也可以进行有效的诊断和治疗。

腺病毒载体可以以治疗有效剂量施用，该剂量可以由基因治疗领域的技术人员容易地确定。此外，可以根据受试者的病理状况的严重程度、性别、年龄、体重、生活方式等适当地改变剂量。例如，腺病毒载体可以以0.5×10

诸如抗PD-1(程序性细胞死亡1)抗体和抗PD-L1(程序性细胞死亡配体1)抗体等检查点抑制剂可以增强T细胞应答并介导抗肿瘤活性。众所周知，包括胸部癌症和恶性间皮瘤在内的各种肿瘤细胞都能够上调PD-L的表达，这导致在PD-1与配体结合后细胞毒性T细胞无反应。因此，使用抗PD-1和抗PD-L1抗体阻断PD-1途径可以重新建立针对肿瘤细胞的免疫反应。PD-1通路的阻断被称为PD-1阻断。

检查点抑制剂可以已知方式施用。例如，剂量根据症状、年龄、体重和其他状况而变化。可以通过皮下注射、肌内注射或静脉内注射以几天、几周或几个月的间隔施用0.001mg至100mg的剂量。

腺病毒载体或检查点抑制剂包含通常在制剂领域中使用的载体、稀释剂和赋形剂。例如，乳糖、硬脂酸镁等用作片剂的载体或赋形剂。水溶液用于注射，如生理盐水或含有右旋糖或另一种佐剂的等渗溶液，并且这可以与适当的增溶剂(例如，醇、多元醇，如丙二醇、和非离子表面活性剂)组合使用。作为油状流体，可以使用芝麻油、大豆油等。作为增溶剂，也可以与其组合使用苯甲酸苄酯、苯甲醇等。

REIC/Dkk-3基因编码的Ad-REIC/Dkk-3可通过上调抗癌免疫系统来治疗或预防胸部癌症。此外，它诱导胸部癌症细胞的凋亡。具体而言，Ad-REIC/Dkk-3诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞)，并且CTL系统性地攻击胸部癌症细胞。受CTL攻击的胸部癌症细胞表现出防御功能，胸部癌症细胞表达PD-L1。检查点抑制剂抑制胸部癌症细胞的防御功能。

单独Ad-REIC/Dkk-3增强了全身性CD8 T细胞的启动。此外，单独Ad-REIC/Dkk-3在浸润的CD8 T细胞中诱导PD-1，并可能在所注射的微环境中诱导PD-L1。这起到抑制CD8(和肿瘤特异性)T细胞扩增的作用。此外，单独Ad-REIC/Dkk-3会导致更高水平的CD4记忆T细胞衰竭。将Ad-REIC/Dkk-3与抗PD-1或抗PD-L1组合可增强全身性T细胞应答和抗肿瘤应答。

Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂在治疗胸部癌症中具有协同作用。抗PD-1和抗PD-L1抗体操纵免疫系统，从而使癌症在细胞表面表达PD-1和PD-L1，使其对REIC/Dkk-3基因易感(REIC/Dkk-3诱导的抗肿瘤免疫性；由REIC/Dkk-3诱导的CTL)。与单独Ad-REIC/Dkk-3或单独检查点抑制剂相比，组合使用Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂对胸部癌症的治疗更为有效。

Ad-REIC/Dkk-3可以与检查点抑制剂同时、分别或依次施用。Ad-REIC/Dkk-3也可以在检查点抑制剂施用之前或之后施用。优选地，Ad-REIC/Dkk-3在施用检查点抑制剂之前施用。当单独施用检查点抑制剂时，在Ad-REIC/Dkk-3施用之前或之后1至24小时，1至30天施用检查点抑制剂。此外，检查点抑制剂可以以与Ad-REIC/Dkk-3间隔相同的时间施用。当多次施用Ad-REIC/Dkk-3时，一次施用检查点抑制剂。作为另一种选择，当多次施用检查点抑制剂时，一次施用Ad-REIC/Dkk-3。

本文中待治疗的胸部癌症的实例包括但不限于间皮瘤，特别是恶性间皮瘤、肺癌、胸壁肿瘤、纵隔肿瘤、肺部(肺)结节、重症肌无力肿瘤、食道癌、胸腺癌或胸腺瘤。

本发明还包括包含Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂的组合、组合制剂或组合药物试剂盒。

本发明还包括在制造用于治疗胸部癌症的药物中将Ad-REIC/Dkk-3与检查点抑制剂组合的方法。

本发明还包括包含Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂的药物组合物。

本发明还包括包含与检查点抑制剂组合使用的Ad-REIC/Dkk-3的药物组合物。

本发明还包括与检查点抑制剂组合使用的Ad-REIC/Dkk-3。

实施例

在下文中，将通过实施例更具体地描述某些实施方式，但是所述实施方式不旨在限于以下实施例。

实施例1

1.概述

MTG-201(Ad5-SGE-REIC/Dkk-3)是一种癌症免疫疗法的制剂，其衍生自带有REIC/Dkk3基因的腺载体。我们使用小鼠皮下同种异体移植模型通过局部施用MTG-201评估了抗癌活性。该模型是具有BALB/c株免疫活性小鼠和AB1间皮瘤细胞系的同系模型。将5×10

2.方法

将AB1细胞(5×10

所述方案一目了然，如图3所示。

或者，当平均肿瘤体积超过5mm

3.结果

图4显示了五只小鼠中每只小鼠的肿瘤体积变化。图4A、图4B、图4C、图4D和图4E显示了分别施用仅Ad-LacZ，Ad-LacZ+抗PD1抗体，仅MTG-201，MTG-201+抗PD1抗体和抗PD-1的小鼠的肿瘤体积变化。图5显示了平均肿瘤体积变化。图6显示了五只小鼠的平均肿瘤重量。如图4、5和6所示，MTG-201与抗PD1抗体的组合施用抑制了癌症的生长。

实施例2：腺病毒介导的DKK3基因转移，以克服恶性间皮瘤中对PD-1阻断的抗性

目的：用PD-1阻断的免疫疗法是治疗恶性间皮瘤(MM)的一种有前途的治疗策略，但是早期试验的客观应答率仅为大约20％。我们假设，MM对PD-1抑制的抗性可以使用无复制能力的腺病毒载体(Ad-REIC)，通过DKK3基因的局部基因转移来刺激肿瘤内淋巴细胞浸润而克服，所述DKK3基因编码永生化细胞(REIC)蛋白、促凋亡蛋白和肿瘤抑制因子的减少表达。

方法：使用飞行时间质谱(CyTOF)在体外处理AB1小鼠MM细胞后评估REIC蛋白的表达。在良好建立的小鼠MM免疫活性模型中，在第0天将5×10

结果：已建立的AB1 MM肿瘤对PD-1阻断具有抗性(图7)。在体外用Ad-REIC处理后，小鼠AB1细胞中REIC蛋白的表达以剂量依赖性方式增加(图8)，并导致细胞周期的S期阻滞(图9)。用Ad-REIC和抗PD-1抗体组合治疗携带AB1 MM的小鼠，可显著抑制肿瘤的生长(图10和11)。对来自治疗过的AB1肿瘤的单细胞悬浮液进行的CyTOF表明，Ad-REIC加上抗PD-1抗体导致CD8 T细胞数量增加，与肿瘤相关的巨噬细胞(CD45+F4/80+CD64+CD3-CD19-)数量减少(图12)。Ad-REIC治疗后，部分衰竭的CD8 T细胞(CD8+PD1+CTLA-4)的比例从22％增加至39％，组合治疗导致部分衰竭的CD8 T细胞的频率降低(1.5％)，并增加效应CD8 T细胞(CD8+CD44+CD62L-)的频率，暗示通过PD-1阻断使CD8 T细胞恢复活力(图13)。

对T细胞群体的更深层表征显示，在Ad-REIC和抗PD-1组合治疗后，效应记忆CD8(EM CD8)T细胞大量募集。此外，效应CD8 T细胞(CD62L-CD44-CD8)和原初CD4 T细胞增加，而Treg细胞(调节性T细胞)减少(图14)。

结论：我们的结果表明，腺病毒介导的REIC基因转移可以克服对小鼠MM中抗PD-1抗体免疫疗法的耐药性。该策略作为对间皮瘤患者的一种新颖的免疫治疗方法具有有前景的潜力，并将在我们机构的II期临床试验中进行测试。

实施例3：Ad-SGE-REIC和抗PD-1抗体的组合使用在EGFR突变型肺癌模型中的作用

方法：将体内传代培养的肿瘤细胞皮下移植到C57BL/6J小鼠的背部区域，并在移植后7天，在第1天和第3天瘤内施用Ad制剂(Ad-LacZ、Ad-SGE-REIC)1.0×10

结果：结果显示在图15中。与单独使用Ad制剂或组合使用Ad阴性对照制剂(Ad-LacZ)和抗PD-1抗体相比，Ad-SGE-REIC制剂和抗PD-1抗体的组合使用显示出明显更强的抗肿瘤作用。

本文引用的所有出版物、专利和专利申请通过引用整体上并入本文。

序列表

<110> 桃太郎源株式会社

<120> 使用Ad-REIC/Dkk-3和检查点抑制剂治疗胸部癌症的组合疗法

<130> PH-7646-PCT

<150> US 62/754,226

<151> 2018-11-01

<150> US 62/831,108

<151> 2019-04-08

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1053

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1053)

<400> 1

atg cag cgg ctt ggg gcc acc ctg ctg tgc ctg cta ctg gcg gcg gcg 48

Met Gln Arg Leu Gly Ala Thr Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ala Ala Ala

1 5 10 15

gtc ccc acg gcc ccc gcg ccc gct ccg acg gcg acc tcg gct cca gtc 96

Val Pro Thr Ala Pro Ala Pro Ala Pro Thr Ala Thr Ser Ala Pro Val

20 25 30

aag ccc ggc ccg gct ctc agc tac ccg cag gag gag gcc acc ctc aat 144

Lys Pro Gly Pro Ala Leu Ser Tyr Pro Gln Glu Glu Ala Thr Leu Asn

35 40 45

gag atg ttc cgc gag gtt gag gaa ctg gtg gag gac acg cag cac aaa 192

Glu Met Phe Arg Glu Val Glu Glu Leu Val Glu Asp Thr Gln His Lys

50 55 60

ttg cgc agc gcg gtg gaa gag atg gag gca gaa gaa gct gct gct aaa 240

Leu Arg Ser Ala Val Glu Glu Met Glu Ala Glu Glu Ala Ala Ala Lys

65 70 75 80

gca tca tca gaa gtg aac ctg gca aac tta cct ccc agc tat cac aat 288

Ala Ser Ser Glu Val Asn Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Tyr His Asn

85 90 95

gag acc aac aca gac acg aag gtt gga aat aat acc atc cat gtg cac 336

Glu Thr Asn Thr Asp Thr Lys Val Gly Asn Asn Thr Ile His Val His

100 105 110

cga gaa att cac aag ata acc aac aac cag gct cga caa atg gtc ttt 384

Arg Glu Ile His Lys Ile Thr Asn Asn Gln Ala Arg Gln Met Val Phe

115 120 125

tca gag aca gtt atc aca tct gtg gga gac gaa gaa ggc aga agg agc 432

Ser Glu Thr Val Ile Thr Ser Val Gly Asp Glu Glu Gly Arg Arg Ser

130 135 140

cac gag tgc atc atc gac gag gac tgt ggg ccc agc atg tac tgc cag 480

His Glu Cys Ile Ile Asp Glu Asp Cys Gly Pro Ser Met Tyr Cys Gln

145 150 155 160

ttt gcc agc ttc cag tac acc tgc cag cca tgc cgg ggc cag agg atg 528

Phe Ala Ser Phe Gln Tyr Thr Cys Gln Pro Cys Arg Gly Gln Arg Met

165 170 175

ctc tgc acc cgg gac agt gag tgc tgt gga gac cag ctg tgt gtc tgg 576

Leu Cys Thr Arg Asp Ser Glu Cys Cys Gly Asp Gln Leu Cys Val Trp

180 185 190

ggt cac tgc acc aaa atg gcc acc agg ggc agc aat ggg acc atc tgt 624

Gly His Cys Thr Lys Met Ala Thr Arg Gly Ser Asn Gly Thr Ile Cys

195 200 205

gac aac cag agg gac tgc cag ccg ggg ctg tgc tgt gcc ttc cag aga 672

Asp Asn Gln Arg Asp Cys Gln Pro Gly Leu Cys Cys Ala Phe Gln Arg

210 215 220

ggc ctg ctg ttc cct gtg tgc ata ccc ctg ccc gtg gag ggc gag ctt 720

Gly Leu Leu Phe Pro Val Cys Ile Pro Leu Pro Val Glu Gly Glu Leu

225 230 235 240

tgc cat gac ccc gcc agc cgg ctt ctg gac ctc atc acc tgg gag cta 768

Cys His Asp Pro Ala Ser Arg Leu Leu Asp Leu Ile Thr Trp Glu Leu

245 250 255

gag cct gat gga gcc ttg gac cga tgc cct tgt gcc agt ggc ctc ctc 816

Glu Pro Asp Gly Ala Leu Asp Arg Cys Pro Cys Ala Ser Gly Leu Leu

260 265 270

tgc cag ccc cac agc cac agc ctg gtg tat gtg tgc aag ccg acc ttc 864

Cys Gln Pro His Ser His Ser Leu Val Tyr Val Cys Lys Pro Thr Phe

275 280 285

gtg ggg agc cgt gac caa gat ggg gag atc ctg ctg ccc aga gag gtc 912

Val Gly Ser Arg Asp Gln Asp Gly Glu Ile Leu Leu Pro Arg Glu Val

290 295 300

ccc gat gag tat gaa gtt ggc agc ttc atg gag gag gtg cgc cag gag 960

Pro Asp Glu Tyr Glu Val Gly Ser Phe Met Glu Glu Val Arg Gln Glu

305 310 315 320

ctg gag gac ctg gag agg agc ctg act gaa gag atg gcg ctg ggg gag 1008

Leu Glu Asp Leu Glu Arg Ser Leu Thr Glu Glu Met Ala Leu Gly Glu

325 330 335

cct gcg gct gcc gcc gct gca ctg ctg gga ggg gaa gag att tag 1053

Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Gly Gly Glu Glu Ile

340 345 350

<210> 2

<211> 350

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 2

Met Gln Arg Leu Gly Ala Thr Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ala Ala Ala

1 5 10 15

Val Pro Thr Ala Pro Ala Pro Ala Pro Thr Ala Thr Ser Ala Pro Val

20 25 30

Lys Pro Gly Pro Ala Leu Ser Tyr Pro Gln Glu Glu Ala Thr Leu Asn

35 40 45

Glu Met Phe Arg Glu Val Glu Glu Leu Val Glu Asp Thr Gln His Lys

50 55 60

Leu Arg Ser Ala Val Glu Glu Met Glu Ala Glu Glu Ala Ala Ala Lys

65 70 75 80

Ala Ser Ser Glu Val Asn Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Tyr His Asn

85 90 95

Glu Thr Asn Thr Asp Thr Lys Val Gly Asn Asn Thr Ile His Val His

100 105 110

Arg Glu Ile His Lys Ile Thr Asn Asn Gln Ala Arg Gln Met Val Phe

115 120 125

Ser Glu Thr Val Ile Thr Ser Val Gly Asp Glu Glu Gly Arg Arg Ser

130 135 140

His Glu Cys Ile Ile Asp Glu Asp Cys Gly Pro Ser Met Tyr Cys Gln

145 150 155 160

Phe Ala Ser Phe Gln Tyr Thr Cys Gln Pro Cys Arg Gly Gln Arg Met

165 170 175

Leu Cys Thr Arg Asp Ser Glu Cys Cys Gly Asp Gln Leu Cys Val Trp

180 185 190

Gly His Cys Thr Lys Met Ala Thr Arg Gly Ser Asn Gly Thr Ile Cys

195 200 205

Asp Asn Gln Arg Asp Cys Gln Pro Gly Leu Cys Cys Ala Phe Gln Arg

210 215 220

Gly Leu Leu Phe Pro Val Cys Ile Pro Leu Pro Val Glu Gly Glu Leu

225 230 235 240

Cys His Asp Pro Ala Ser Arg Leu Leu Asp Leu Ile Thr Trp Glu Leu

245 250 255

Glu Pro Asp Gly Ala Leu Asp Arg Cys Pro Cys Ala Ser Gly Leu Leu

260 265 270

Cys Gln Pro His Ser His Ser Leu Val Tyr Val Cys Lys Pro Thr Phe

275 280 285

Val Gly Ser Arg Asp Gln Asp Gly Glu Ile Leu Leu Pro Arg Glu Val

290 295 300

Pro Asp Glu Tyr Glu Val Gly Ser Phe Met Glu Glu Val Arg Gln Glu

305 310 315 320

Leu Glu Asp Leu Glu Arg Ser Leu Thr Glu Glu Met Ala Leu Gly Glu

325 330 335

Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Gly Gly Glu Glu Ile

340 345 350

<210> 3

<211> 117

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 3

atgcagcggc ttggggccac cctgctgtgc ctgctactgg cggcggcggt ccccacggcc 60

cccgcgcccg ctccgacggc gacctcggct ccagtcaagc ccggcccggc tctcagc 117

<210> 4

<211> 234

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 4

atgcagcggc ttggggccac cctgctgtgc ctgctactgg cggcggcggt ccccacggcc 60

cccgcgcccg ctccgacggc gacctcggct ccagtcaagc ccggcccggc tctcagctac 120

ccgcaggagg aggccaccct caatgagatg ttccgcgagg ttgaggaact ggtggaggac 180

acgcagcaca aattgcgcag cgcggtggaa gagatggagg cagaagaagc tgct 234

<210> 5

<211> 2355

<212> DNA

<213> 人工的(Artificial)

<220>

<223> 合成的

<400> 5

tctagagcac catgcagcgg cttggggcca ccctgctgtg cctgctgctg gcggcggcgg 60

tccccacggc ccccgcgccc gctccgacgg cgacctcggc tccagtcaag cccggcccgg 120

ctctcagcta cccgcaggag gaggccaccc tcaatgagat gttccgcgag gttgaggaac 180

tgatggagga cacgcagcac aaattgcgca gcgcggtgga agagatggag gcagaagaag 240

ctgctgctaa agcatcatca gaagtgaacc tggcaaactt acctcccagc tatcacaatg 300

agaccaacac agacacgaag gttggaaata ataccatcca tgtgcaccga gaaattcaca 360

agataaccaa caaccagact ggacaaatgg tcttttcaga gacagttatc acatctgtgg 420

gagacgaaga aggcagaagg agccacgagt gcatcatcga cgaggactgt gggcccagca 480

tgtactgcca gtttgccagc ttccagtaca cctgccagcc atgccggggc cagaggatgc 540

tctgcacccg ggacagtgag tgctgtggag accagctgtg tgtctggggt cactgcacca 600

aaatggccac caggggcagc aatgggacca tctgtgacaa ccagagggac tgccagccgg 660

ggctgtgctg tgccttccag agaggcctgc tgttccctgt gtgcacaccc ctgcccgtgg 720

agggcgagct ttgccatgac cccgccagcc ggcttctgga cctcatcacc tgggagctag 780

agcctgatgg agccttggac cgatgccctt gtgccagtgg cctcctctgc cagccccaca 840

gccacagcct ggtgtatgtg tgcaagccga ccttcgtggg gagccgtgac caagatgggg 900

agatcctgct gcccagagag gtccccgatg agtatgaagt tggcagcttc atggaggagg 960

tgcgccagga gctggaggac ctggagagga gcctgactga agagatggcg ctgggggagc 1020

ctgcggctgc cgccgctgca ctgctgggag gggaagagat ttagggggta ccccggctag 1080

atgactaacg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct 1140

gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt 1200

tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg 1260

ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg 1320

gatgcggtgg gctctatggc ggagtactgt cctccgcttc ccacgtggcg gagggactgg 1380

ggacccgggc acccgtcctg ccccttcacc ttccagctcc gcctcctccg cgcggacccc 1440

gccccgtccc gacccctccc gggtccccgg cccagccccc tccgggccct cccagcccct 1500

ccccttcctt tccgcggccc cgccctctcc tcgcggcgcg agttttggaa agtccccagg 1560

ctccccagca ggcagaagta tccaaagcat ccatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg 1620

aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatccaaagc atccatctca attagtcagc 1680

aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca 1740

ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc 1800

ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggccaaggct tttgcaaaaa 1860

gctccgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 1920

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac 1980

gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 2040

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 2100

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 2160

ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 2220

ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgg caccaaaatc 2280

aacgggactt tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc 2340

gtgttgccgg aattc 2355

<210> 6

<211> 1285

<212> DNA

<213> 人工的(Artificial)

<220>

<223> 合成的

<400> 6

gtttaaaccc gctgatcagc ctcgactgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc 60

ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa 120

aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg 180

gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg 240

ggctctatgg cggagtactg tcctccgctt cccacgtggc ggagggactg gtcctccgct 300

tcccacgtgg cggagggact ggggacccgg gcacccgtcc tgccccttca ccttccagct 360

ccgcctcctc cgcgcggacc ccgccccgtc ccgacccctc ccgggtcccc ggcccagccc 420

cctccgggcc ctcccagccc ctccccttcc tttccgcggc cccgccctct cctcgcggcg 480

cgagttttgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatccaaagc atccatctca 540

attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatccaaa 600

gcatccatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc 660

taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg 720

cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg 780

gaggccaagg cttttgcaaa aagctccgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc 840

tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg 900

ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg 960

gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa 1020

tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac 1080

atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg 1140

cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg 1200

agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca 1260

ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtg 1285