用于制备生物学、细胞学、组织学和解剖学样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物

摘要

本发明的主题是用于制备生物学、细胞学、组织学和解剖学样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物。本发明的主题还涉及用本文所述组合物固封的样品。

说明书

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发明概述

本发明的主题是用于制备生物学、细胞学、组织学和解剖学(autopsical)样品的方法以及用于固封显微镜载玻片的组合物。本发明的主题还涉及用本文所述组合物固封的样品。

发明背景

在组织细胞病理学诊断中，生物样品的显微镜观察用于诊断的制定。

生物样品(即，组织和细胞)的制备是多阶段过程，其利用自动技术和/或手动方案使样品本身适合于显微镜观察。

如本领域已知的，样品经历几个过程，其在“固封”在显微镜载玻片上之前为显微镜分析提供固定、透明化(diaphanization)和染色。

“固封”包括用盖玻片覆盖显微镜载玻片上的样品，所述盖玻片通常具有小于1毫米的厚度。通过使用折射率与显微镜载玻片相似的固封介质，实现了盖玻片与显微镜载玻片的稳定粘附。

固封介质是粘性物质，通常可溶于有机溶剂，其作为粘合剂，并且一旦干燥能确保样品的良好保存。而且，基本要求是用于固封的所有材料都是超透明的，以便允许来自光源的光定量地到达物镜。最常见的固封介质是加拿大香脂(Canada balsam)(也称为加拿大松脂)。

然后，固封的显微镜载玻片在光学显微镜下进行观察，以制定诊断。

显微镜载玻片的固封是一种组织细胞病理学样品的包装，并且显著影响其随时间流逝的抗老化和可读性。

因此，固封的目的是允许待分析样品在具有合适折射率的介质内，即，类似于玻璃的折射率，以避免在显微镜观察期间可能的图像变形。

固封的另一目的是保护样品，并且允许其长期保存。

在固封显微镜载玻片的实践过程中，在进行用水溶性物质染色(例如，典型的苏木精和曙红染色)后，需要进行样品脱水，包括以增加的醇尺度浸泡显微镜载玻片，最后通过二甲苯。由于上述固封介质不能与水或其溶液混合，因此脱水是必要的。在适当脱水后，通过一次性移液管将等份试样的固封介质沉积在显微镜载玻片上，观察任何过量的固封介质。紧接着，将薄的盖玻片放置在显微镜载玻片上。

可以手动或者通过使用自动盖玻器自动进行该过程。

标准的自动盖玻器可以将盖玻片依次施加在载有样品切片的显微镜载玻片上，通过直接将它们从用于染色的篮(basket)中取出来进行。在染色结束后，将篮放置在自动盖玻器的托盘中，随后夹具从篮中一次取出显微镜载玻片，并将其置于供应固封介质的喷嘴下方的水平位置。

在供应固封介质的等分试样后，用吸盘将盖玻片放在显微镜载玻片上，从而完成制备物制备。

这些自动盖玻器中的一些不使用盖玻片，而是使用在用二甲苯适当浸泡之后显微镜载玻片表面上所释放的膜，以允许适当的粘附。

然而，上文简要描述的正确使用的样品固封过程具有若干缺点。

当采用手动固封过程时，需要使用通风橱。事实上，它用于限制因使用有毒物质(如二甲苯)而产生的风险，这些有毒物质(如二甲苯)用于切片处理和作为固封介质的稀释剂。

此外，存在盖玻片在显微镜载玻片上正确定位的关键问题(在手动和自动固封的情况下)。可能发生盖玻片从显微镜载玻片的边缘略微伸出，并且在未对准更严重的情况下，盖玻片必须由使用者重新固封。然而，一旦固封介质变干，该操作就变得不可逆。如果使用干燥的固封介质进行操作，固封的显微镜载玻片在某些情况下应在二甲苯中保留长达3-4天，然后才能移除未对准的盖玻片，以便再次固封另一个。此外，显微镜有一个钩在移动托盘上的金属夹，可用于在观察期间保持显微镜载玻片固定。在将显微镜载玻片定位在透镜下方期间，金属夹剧烈地撞击固封的显微镜载玻片，从而导致显微镜载玻片边缘的小碎片破碎。盖玻片在显微镜载玻片上的错误定位会使固封在显微镜上的显微镜载玻片的碎裂显著恶化，因为所产生的碎片会积聚在显微镜灯上(放置在显微镜载玻片下方)并且另外留下固封显微镜载玻片的危险碎裂边缘。

此外，最常见的问题是在盖玻片和样品之间可能形成气泡。在固封过程期间，由于使用者的操作，容器的简单移动或用移液管收集固封介质(当沉积了过量固封介质时)会形成气泡。所有这些操作都引起盖玻片在显微镜载玻片上滑动，导致固封介质中包含小气泡。由于固封介质的高粘度，这些气泡仍然被困在其中，因此导致难以进行适当的显微镜观察。自动固封系统(盖玻器)也会出现同样的问题。

另一个缺点是固封介质的不准确和可能的大量输送。当该情况发生时，将需要除去从已固封的显微镜载玻片泄漏的多余固封介质，因为其具有强粘合力，因此明显使用户难以操作。去除多余的固封介质是精细的操作，因为盖玻片上可能的液体污迹会损害显微镜观察。

制备物的“脱固封”是另一重要问题。事实上，在那些需要从长时间固封的显微镜载玻片中回收生物样品的情况下(为了进行进一步的测试)，为了能够移除盖玻片，如上所述，已固封的显微镜载玻片必须在二甲苯浴中保持至少3天。随时间流逝，实际上，固封介质变得不易溶于二甲苯(用于溶解和/或稀释最常见固封介质的特定溶剂)。此外，如果没有适当进行固封介质的再溶解过程，则盖玻片的移除会导致样品与显微镜载玻片分离或部分样品被去除，从而无法补救地破坏样品本身用于所需进一步测试。

因此，显然固封是非常耗时的，与待固封的显微镜载玻片数量成比例，并且也是由于施加固封介质和盖玻片所要求的高精度。完成已固封的显微镜载玻片干燥所需的时间应加入该时间。因此，为了加速干燥过程，使已固封的显微镜载玻片在60℃烘箱中孵育约30分钟。

关于自动过程，存在相对于手动过程的其他缺点。其中，存在仪器的精细校准。因为固封过程需要非常精确，因此设备需要毫米级校准，以避免宏观制备错误。例如，移动夹具的机构校准不准确会导致显微镜载玻片破裂；类似地，盖玻片的偏心(off-cencer)定位迫使使用者脱固封并再次固封制备物。此外，抽吸固封介质的设备的所有部件必须非常稳固，以避免形成气泡。

还存在自动盖玻器，其使用膜代替盖玻片；该盖玻器需要精确校准，以确保膜均匀铺展并且不会在显微镜载玻片上产生伪影。

此外，由于其是高精度仪器，因此，必须放置在专用隔震台上，并且也可以放置在抗震地板上。此外，有利的是将仪器置于护罩下完全水平的位置，并且清洁操作通常用二甲苯进行。

另外，仪器的清洁过程需要每天进行。在结束使用自动盖玻器时，必须从分配器单元、扣钩(clasp)和传送带以及从递送固封介质的喷嘴去除固封介质的残留物。该清洁过程是用浸有二甲苯的抹布进行的，二甲苯对使用者是有毒的，如果仪器没有放在通风橱下面则尤为如此。还应特别注意避免液体渗透到仪器和电触点内。此外，如果一些溶剂留在仪器内，则可能会出现溶剂蒸气。在没有通风橱的情况下使用设备，存在着火和中毒的风险。

因为小的显微镜载玻片碎片频繁破损，由于整个系统校准时的小瑕疵，必须从传送带、收集显微镜载玻片的篮、装载篮、真空杯和仪器的内部隔室去除上述碎片。另外，显然需要对所用仪器进行多个维护过程。

最后，用于免疫组织化学分析的显微镜载玻片通常在生物样品定位之前在磨砂端具有条形码标签。为了进行识别所需的这种标签可能是自动盖玻器扣钩的故障源，因为来自标签的胶水残留物常常积聚在扣钩上，因此需要二甲苯清洁。

鉴于上述情况，显然需要找到用于固封显微镜载玻片的系统，该系统可以解决与生物样品的常规固封过程相关的多个缺点。

发明目的

本发明的目的是提供固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的快速有效方法。

本发明的另一目的是提供一种新型组合物，该组合物特别适合用于固封本发明显微镜载玻片以用于细胞学、组织学和解剖学样品分析的本发明方法。

本发明还有另一目的是提供一种组合物，该组合物允许获得没有气泡和瑕疵的固封的显微镜载玻片，并且同时提供其它优点，例如，对显微镜载玻片本身的适当保护。

本发明的又一个目的是提供一种组合物，该组合物使得固封的载玻片不随时间流逝而变黄，并且对于人类健康是安全的。

本发明的另一目的是提供所述组合物用于制备用于显微镜观察的生物学、细胞学、组织学和解剖学样品的用途。

最后，本发明的一个目的是，提供用本发明方法和本发明组合物固封的生物样品。

发明详述

根据本发明的一个方面，本发明的主题是一种固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的方法，所述方法包括将所述显微镜载玻片浸入至少一种流体组合物中，所述流体组合物包含：

a)至少一种选自以下的液体组分：二甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯；和

b)一种或多种选自以下的聚合物：二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、丙酸纤维素和乙酸丁酸纤维素，其量为5％-80％([聚合物(b)的克数/100ml最终组合物])，优选为10-30％。

根据一个实施方式，本发明的主题是一种固封用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品分析的显微镜载玻片的方法，所述方法包括：

(i)将所述显微镜载玻片浸入至少一种流体组合物中，该流体组合物包含：

a’)至少一种选自以下的液体组分：二甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯；和

b’)一种或多种选自以下的聚合物或共聚物：二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、丙酸纤维素和乙酸丁酸纤维素，其量为5％-80％([聚合物(b)的克数/100ml最终组合物])，优选为10-30％；

(ii)从组合物中取出所述显微镜载玻片；

(iii)任其滴液；

(iv)任选地重复(i)至(iii)的步骤；以及

(v)任其空气干燥，或用合适的手段对其进行干燥。

从(i)到(iii)的步骤可以重复两次或更多次；通常，两次浸渍就足够了。当进行两次或更多次浸渍时，组合物的组分和浓度可以彼此相同或不同。

根据一个实施方式，在两种相同的组合物中进行两次浸渍，所述组合物优选具有浓度约为20％的组分(b)。

根据一个实施方式，在两种不同的组合物中进行两次浸渍，所用第一组合物的组分(b)的浓度为约30％，所用第二组合物的组分(b)的浓度为约20％。

然而，其他实施方式也是可能的，并且它们都在本发明的范围内。

在本发明的方法中，浸渍和滴液仅需要几秒/分钟，如其将在本说明书和实施例中更详细描述的。

干燥步骤(v)可以用本领域已知的任何合适的方法进行，例如，在通风橱下、烘箱中等进行。

除非明确说明，否则本发明中表示的所有百分比均指质量/体积百分比浓度([g/100ml])，即，组分(b)重量相对于100体积单位的最终组合物。在实践中，例如，根据本发明，20％组合物表明在组合物中有20g聚合物(b)，其中，已加入合适量的液体组分(a)以达到100ml的总体积。

根据本发明，“浸渍”或“进行浸渍”(或派生的动词变形)表示将显微镜载玻片大体垂直地引入流体组合物中以覆盖显微镜载玻片。

根据一个优选的实施方式，液体组分(a)是乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯。

根据一个优选的实施方式，组分(a)是乙酸丁酸纤维素(CAB)。

根据一个优选的实施方式，液体组分(a)为乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯，组分(a)为乙酸丁酸纤维素(CAB)，其用量优选为10-30％(如上所定义)。

根据本发明的另一个方面，本发明的主题是一种用于固封显微镜载玻片的组合物，该显微镜载玻片用于生物学、细胞学、组织学和解剖学样品的分析，所述组合物包含：

a')选自以下的液体组分：乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和它们的混合物，优选是乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯；和

b’)一种或多种选自以下的聚合物或共聚物：二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、丙酸纤维素和乙酸丁酸纤维素，其量为5％-80％([聚合物(b’)的克数/100ml最终组合物])，优选是乙酸丁酸纤维素。

所述组合物在本文中还称为“本发明组合物”。

另一方面，术语“本文所述的组合物”是指本发明组合物以及与本发明方法一起在上文所述的组合物。

根据一个优选的实施方式，本发明组合物的液体组分(a’)选自乙酸丁酯、乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和它们的混合物。

根据一个优选的实施方式，本发明组合物的聚合物或共聚物(b’)是乙酸丁酸纤维素。

根据一个优选的实施方式，在本发明组合物中，所述一种或多种聚合物(b’)的量为10-50％，更优选20-40％或10-30％，有利地为约25％。

根据一个优选的实施方式，在本发明的组合物中包含乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和乙酸丁酸纤维素，其量优选为10-50％，更优选为10-30％，例如约20％。

本发明的组合物，特别是优选的包含乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯和乙酸丁酸纤维素的组合物，相对于已知的固封组合物表现出有趣的性质。

除了下面将要揭示的优点外，乙酸丁酸纤维素还可以容易地溶解在溶剂(a)和(a’)中，特别是溶解在乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯中，这使得溶液的处理和加工非常快速且工业上方便。

优点之一是该组合物和用乙酸丁酸纤维素作为固封聚合物固封的载玻片是抗紫外的，并且不会随时间流逝而变黄。

另一个重要的优点是，不需要其他成分(例如拉伸剂)即可在样品上形成光滑均匀的固封剂层。

另一个重要的优点是，相对于已知的固封剂而言，危险性低，这是非常有价值的特性。

此外，根据本发明固封的载玻片，特别是根据本发明的优选实施方式固封的载玻片，显示出高的抗性和硬度以及低的吸湿性，因此提供了持久的固封载玻片。

根据本发明的另一个方面，本发明的主题是使用本发明组合物的如上所述的方法。

本发明的主题还涉及本发明组合物用于制备生物学、细胞学、组织学和解剖学样品(在下文中也简单称为生物样品)的显微镜载玻片的用途。

本文所述的组合物可基本上类似于树脂，并可用于在光学显微镜下固封样品，该样品通常为生物样品。

在本发明中，“树脂”是指液体粘性材料，其可以在特定条件下硬化，如下文所述。

在本发明中，“固封”是指在制备常规生物样品如组织学或细胞学样品以及其它类型样品的过程中，为了进行显微镜分析，通常在显微镜载玻片上进行的最后步骤，这是本领域技术人员所熟知的。

根据一些实施方式，本文所述的组合物还可包含除上文所提及的那些之外的其它组分。

制备本文所述组合物的方法不需要严苛的条件或过程。事实上，该方法完全可以在室温下发生，并且可以在配有盖子或其他类型封闭物的容器(优选是不透明或琥珀色的)中进行，以避免液体组分的蒸发。向该容器中添加液体组分，然后在机械或磁力搅拌下，添加构成本文所述组合物或其优选实施方式之一的其它成分。最后，使其继续搅拌直至获得澄清的均匀混合物。在实验部分中提供了一些说明性实施方式的制备方法的实际实施例。

如下文广泛解释，本文所述的组合物可以有效地保护生物样品并且不会在显微镜下产生变形，因为所述组合物是超透明的，并且额外再现了盖玻片的所有功能特征。此外，本文所述组合物的特征在于：对显微镜载玻片的粘附性高，抗机械应力，并且随时间的稳定性高。另外，就其性质而言，本文所述的组合物不会干扰材料，不会在结构中产生改变或伪影或使样品染色。

构成本文所述组合物的聚合物的独特组合同时赋予材料以柔韧性和刚性。显然，需要一定程度的柔韧性才能在显微镜载玻片的整个区域上形成平坦且均匀的层，其均匀地覆盖显微镜载玻片约3-6微米，而没有组合物完全干燥后在切片边缘处破裂的风险。同时，必须使本文所述的组合物具有刚性，以便形成保护屏障，例如，其能抵抗机械应力，从而有效地保护样品。

此外，本文所述的组合物具有非常接近显微镜载玻片折射率的折射率(1.48-1.50)，因此对肉眼是超透明的(如图2，3和6所示)。

本文所述的组合物、优选根据本发明的组合物特别适用于固封用于显微镜观察的显微镜载玻片，因为其不会使生物样品产生像差、变形和颜色变化；事实上，可以从描绘用本文所述组合物固封的生物样品的显微镜图像的图7和图8中注意到，该样品看起来超透明，完全适合观察，并且没有任何变形或像差。

可以精确调节本文所述组合物的粘度，以避免引入气泡，同时促进显微镜载玻片上合适厚度的层的粘附和在施加该组合物后自动平坦化。通过改变聚合物和液体组分之间的比例可以实现粘度的调节；如本领域技术人员所清楚的，通过增加本文所述组合物中液体组分的量，粘度将降低，反之亦然。

此外，本文所述组合物与水的完全不混溶使得其成为不能被空气湿气改变的材料。另一方面，其结果可溶于乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯，乙酸乙酯，乙酸丁酯及其混合物。

在那些需要使已固封的显微镜载玻片脱固封的情况下，例如，为了进一步分析组织细胞学材料，通过将样品简单浸入到上述溶剂中的一种溶剂中，可以从显微镜载玻片上除去本文所述的组合物。组合物再溶解和样品脱固封的操作需要很少的时间，即，几分钟(5-7分钟)，明显短于使用常规固封的显微镜载玻片(即，利用封固介质和盖玻片)的情况下相同过程所需的时间，后者需要几天的时间。

因此很清楚，本文所述组合物在显微镜载玻片表面上的应用导致相对于常规固封方法的多个优点。事实上，如上所述，该应用产生均匀、平坦、超透明、无气泡的膜，并且不需要采用如已知和常规技术那样的盖玻片，并且能够快速脱固封并具有合适的刚性和柔韧性特征。

不需要采用盖玻片的事实是本发明提供的重要结果。

本发明方法和本文所述组合物的另一个优点在于，在将组合物本身施加于一个或多个显微镜载玻片上之后能够使本文所述组合物(其类似于树脂)固化的条件。事实上，这些条件不需要UV照射，而是简单地暴露在空气中或约50℃的温度下，在后一种情况下，相对于单独的空气暴露节省了时间。

因此，本文所述组合物的固化条件导致与生物样品的稳定性限制相关的显著优点，所述稳定性限制不能以可接受的方式容忍长时间的热应力或持续的UV照射。由于这些应力，存在样品的各种特征被改变的真实可能性，例如，由于DNA、整体生物结构和染色的干扰，因此在样品结构中产生改变或伪影。

另一方面，通过UV的聚合过程需要显微镜载玻片相对于UV源的明确限定的取向，并且次优取向会延长照射时间，从而损坏生物样品。另一方面，如果使用普通的自动染色机，将显微镜载玻片放入篮中，为了实现显微镜载玻片相对于UV源的最佳取向，使用者将被迫进行干预以将其从篮中移出并放置在合适的表面上，这是一个需要花费时间并弱化了自动处理优点的操作。

不同的是，本发明允许使用者通过单个简单的过程将显微镜载玻片直接固封到用于染色的篮中，而无需移除/重新调整显微镜载玻片。

由本文所述组合物提供的另一个优点是固化所述组合物所需的时间短，但在任何情况下留给使用者或自动仪器的时间足以方便地操作待固封的显微镜载玻片。

事实上，本文所述组合物的固化时间是允许使用者或自动仪器适当操作待固封的显微镜载玻片的理想时间，因此同时允许迅捷且快速的固封操作并显著减少生物样品的制备时间，从而优化工作流程。

由于一个或多个显微镜载玻片(通常以垂直位置)简单快速地浸入所述组合物中，因此本文所述的组合物可适当地施加到待固封的显微镜载玻片上。根据树脂的所需厚度，可以进行多次浸渍。因此显然，组合物的粘度也影响浸渍期间施加到显微镜载玻片上的树脂厚度。

例如，可以进行双重浸渍，其提供了将显微镜载玻片引入含有20％本发明组合物的两个工位中。根据一个实施方式，可以提供如下全部过程：在约20％的第一树脂中浸渍约1.5分钟，滴液约1分钟，在20％树脂中进行约1.5分钟的第二次浸渍，最后滴液约1分钟，并空气干燥或烘箱干燥。

或者，可以在含有两种不同浓度树脂的两个工位中进行显微镜载玻片的双重浸渍；例如首先在30％树脂中浸渍约1.5分钟，滴液约1分钟，然后在20％树脂中进行10秒钟的第二次浸渍，然后滴液约1分钟。

就组合物的浸渍和/或滴液和/或定性-定量组成而言，其它可能的解决方案显然在本领域专家的能力范围内。

对于本文所述组合物的浸渍，显微镜载玻片可有利地容纳在如图9所示的篮中。

图11特别显示了适于放置显微镜载玻片的篮，其必须浸入本文所述的组合物中，以实施本发明的方法。

参见图9，所述篮由主体(1)制成，其特征在于具有狭槽(2)，可以将显微镜载玻片(3)插入其中。在该主体上连接有手柄(4)，该手柄允许借助自动染色机的移动臂进行拾取和运输过程。

如本文所述的篮及其在根据本发明的方法中的用途构成了本发明的另一主题。

显然，根据本发明的方法产生了所有上述优点以及许多其他优点。

在这些额外的优点中，存在进一步且显著的省时。事实上，如在本说明书的实验部分中所示，在本文所述组合物中的浸渍步骤可以同时涉及更多的显微镜载玻片，即，其可以在可变数量的显微镜载玻片上平行进行，例如，如果使用标准篮作为载体，则最多达30个。这导致相对于常规固封过程明显省时，常规固封提供固封介质和盖玻片，一次设置一个样品，即按顺序地设置。

在包含待固封/已固封的显微镜载玻片的篮内的本发明所述组合物可以通过用合适的溶剂(例如，乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯或其替代物，或乙酸乙酯/乙酸丁酯)快速洗涤篮而容易地去除。

此外，本发明所述的组合物允许使用者将显微镜载玻片直接固封到通常用于染色的篮中，使用一个简单的动作(篮的浸渍)而无需去除和重新定位显微镜载玻片，进一步节省了时间。例如，在实验部分中将对用于固封样品的手动方法(其包括使用本文所述的组合物和通常用于染色的篮)进行描述。

除了用于手动固封的常规过程之外，本文所述的组合物还可以容易地用于常规的自动染色机中，其通常用于制备生物样品并且是本领域技术人员明确已知的。这是非常有利的，因为自动染色机并不具有上文讨论的自动盖玻器所具有的所有关键问题，例如仪器的精确和精细校准，而且这将允许提供精确的固封过程而无需任何使用者的使用。

作为说明，自动染色机是包括各种容纳流体(通常是染色溶液)的罐和机械臂的仪器。机械臂可以自动抬起、定位和将待染色的包含显微镜载玻片的篮浸入各种罐中。可以对机械臂进行编程，以便限定各种罐中的浸渍顺序，以及各罐中的浸渍时间。

本文所述组合物的这种应用提供了相对于常规固封方法数倍的省时，并且例如，在实验部分中将描述包括自动染色机和本文所述组合物的固封方法。

此外，与用于固封显微镜载玻片的已知组合物和树脂不同，本文所述的组合物、特别是本发明的组合物特别适用于实现本发明的方法，其具有该目的所需的特征。事实上，对于已知的组合物和树脂，不可能通过将显微镜载玻片浸入组合物中的技术来进行显微镜载玻片的固封，这是因为所述已知组合物和树脂的粘度不适合这种技术。

显然，由于本文所述的组合物，固封过程的省时非常明显。实际上，常规固封过程(手动或自动)需要与显微镜载玻片的数量成比例的时间。将在实验部分中提供常规固封过程的比较例。

因此，本文所述的组合物可以摆脱针对一次制备一个样品的一系列精确步骤，通过用一次能对多个显微镜载玻片进行的单个程序代替上述一系列步骤来实现，并且没有不精确性，是高度可再现的。

根据本发明的用途提供了制备用于显微镜分析的样品、特别是用于样品制备的固封步骤的上述所有优点，其中，例如生物样品的显著省时、更精确以及可再现的加工。

最后，本发明的主题是用本文所述组合物固封的生物学、细胞学、组织学和解剖学样品，有利地是使用本发明的组合物和使用该组合物的本发明方法和所述样品，特征在于其不包括盖玻片。

附图简要说明

图1显示了载玻片的均匀且光滑的涂层：镜面效果表示组织切片的完美覆盖。

图2和3描绘了在固封过程结束时干燥后的本文所述组合物。

图4和5显示了本文所述组合物的超高透明度。

图7和8示出了显示用本文所述组合物固封的生物样品的显微镜图像。

图5和6显示了可用于本发明方法的篮。

实验部分

在合适的容器(优选不透明或琥珀色)中装入750ml乙酸1-甲基-2-甲氧基乙酯。容器优选具有盖，使得不会因为蒸发而损失溶剂。

将250克乙酸丁酸纤维素(CAB)添加到溶剂中，并将混合物在搅拌下放置约30分钟，直到获得均匀的澄清混合物。该过程完全在室温下进行，仅当获得无颗粒物质的均匀、澄清混合物时，才停止机械搅拌。

在以醇洗涤结束的常见手动染色过程结束时，30个显微镜载玻片中的每一个经历以下步骤：(I)将显微镜载玻片水平放置在工作台上；(II)将适量固封介质递送至显微镜载玻片上(约2滴)；(III)放置盖玻片；和(IV)调整盖玻片。固封每个显微镜载玻片所需的总时间：约12秒；乘以每个显微镜载玻片：约360秒(即，约6分钟)。

对于所有显微镜载玻片的常规固封所花费的总时间，应该增加固封介质的干燥时间，其花费约20分钟进行可接受地干燥，总固封时间为约26分30秒。

与上面所描述的不同，利用根据本发明的方法并考虑两次浸渍可以节省时间，如下文实施例中可见。

此外，如从刚刚描述的实施例可见，除了花费大量时间之外，常规固封所需的上述四个步骤绝对不可能没有不精确或误差，这些是特别重要的特征。因此，在下列情况下，上述步骤的总时间进一步增加：(1)在显微镜载玻片上过量添加固封介质，并且需要除去该过量的固封介质；和(2)固封介质从显微镜载玻片漏出，并且需要等待其完全和彻底干燥以实现工作流程的实际管理。

最后，需要在固封过程之后至少等待一天以有效存储如此固封的显微镜载玻片，因为需要等其完全干燥。

在以二甲苯洗涤(或类似溶剂)结束的常规手动染色方法之后，将含有25个显微镜载玻片的篮手动浸入含有实施例7的组合物的罐中约1.5分钟，之后通过滴液1分钟去除过量的组合物，并且在相同的组合物中进行约1.5分钟的第二次浸渍，然后滴液约1分钟。最后，已固封的显微镜载玻片在50℃下干燥15分钟，总工作时间为20分钟。

或者，可将25个已固封的显微镜载玻片置于65℃的烘箱中约5分钟，从而提供总体时间为约10分钟的固封过程。

以这种方式固封的显微镜载玻片显示在图7和8中。

在通过自动染色机进行以二甲苯洗涤结束的常规染色处理之后，通过自动臂取出25个显微镜载玻片(刚染色的)并在自动染色机的含有实施例8的组合物的罐中浸渍1.5分钟。然后，自动染色机的自动臂将显微镜载玻片转移到空罐中，以便去除过量的组合物，持续1分钟，然后将显微镜载玻片浸入含有实施例7的组合物的罐中10秒，然后将其转移到空罐中，以便去除过量的组合物，持续1分钟，并彻底空气干燥，或者将其放入烘箱中进行短时间干燥。

显微镜载玻片的该简化固封过程在染色后立即开始，并在几分钟内完成，而不以任何方式影响使用者。

显然，考虑使用本文所述组合物的固封过程(即，实施例2.2和2.3)提供了相对于常规固封(如实施例9.1中所述)所需时间的重要的时间节省，因此减少了用于制备生物样品的总时间，优化了工作流程，并且还消除了由于使用者操作导致的气泡、平坦化和可能的不准确性的问题。