快速鉴定鲂鲫杂种、评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率的方法

摘要

本发明公开了一种快速鉴定鲂鲫杂种的方法，将团头鲂卵子和红鲫精子进行受精，于受精后36‑48h内出现眼色素的后代，即鉴定为鲂鲫杂种。还公开了一种快速评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率的方法，采用紫外照射后的红鲫精子对团头鲂卵子进行雌核发育，根据后代出现眼色素的时间区分杂交后代和雌核发育后代，然后评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率。该方法利用鲂鲫杂种与团头鲂后代在眼色素形成时间的差异，可在后代个体发育早期评估雌核发育效率，从而有助于精准设置雌核发育技术参数，进而快速实现高效制备雌核发育团头鲂的育种目标，对鱼类遗传改良和育种实践具有指导意义及重要经济价值。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种快速鉴定鲂鲫杂种、评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率的方法。

背景技术

团头鲂(Blunt snoutbream)肉质鲜美，含肉率高，是我国重要的草食性经济鱼类之一。但团头鲂不耐低氧，对水体溶氧的变化比较敏感，很大程度上制约了其养殖的推广与发展，培育耐低氧团头鲂新品种对团头鲂养殖产业的发展具有重要意义。鲫(cruciancarp)是我国常见的淡水鱼类之一，也是目前已知最耐低氧的鱼类物种之一。在鱼类育种技术领域中，雌核发育是鱼类种质纯化、良种选育的重要技术手段。人工诱导鱼类雌核发育一般采用遗传灭活的异源精子来激活卵子发育。一方面通过紫外照射使异源精子的遗传物质失去遗传活性；另一方面紫外照射也导致精子活力下降，直接影响“受精率”。如何在保证异源精子遗传物质灭活、避免形成杂种的前提下，维持精子的“受精”能力，提高雌核发育效率是鱼类雌核发育育种实践中存在的技术瓶颈。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种快速鉴定鲂鲫杂种、快速评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率的方法，在后代胚胎发育早期就可评估雌核发育效率、精准设置雌核发育技术参数，从而快速实现高效制备雌核发育团头鲂的育种目标。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

一种快速鉴定鲂鲫杂种的方法，将团头鲂卵子和红鲫精子进行受精，于受精后36-48h内出现眼色素的后代，即鉴定为鲂鲫杂种。

上述的方法，优选的，所述受精的具体操作包括如下步骤：选取体征良好、身体健壮的雌性团头鲂和雄性红鲫作为亲鱼，对所述亲鱼注射黄体素释放激素类似物8-10μg/kg与绒毛膜促性腺激素400-500IU/kg的混合催产剂进行人工催产，然后采用挤压法对雌性团头鲂与雄性红鲫进行干法受精。

一种快速评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率的方法，采用紫外照射后的红鲫精子对团头鲂卵子进行雌核发育，然后根据后代出现眼色素的时间区分杂交后代和雌核发育后代，其中，于受精后36-48h内(胚胎期)出现眼色素的后代为杂交后代，于受精后60-72h内(鱼苗期)出现眼色素的后代为雌核发育后代，然后评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率。

优选的，所述红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育包括如下步骤：取人工催产后雄性红鲫，挤出精液用Hank’s液按体积比1:200稀释，在置于冰块上的培养皿中铺上精液，然后置于转速60r/min的摇床中，紫外灯照射2-5min；紫外照射后的红鲫精子与团头鲂卵子混合后平铺于培养皿中，3min后转入冰水中浸泡22-26min，然后在常温下静水孵育。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明利用鲂鲫杂种与团头鲂后代在眼色素形成时间的差异，建立了一种快速鉴定鲂鲫杂种的方法，可在后代个体发育早期评估雌核发育效率，从而有助于精准设置雌核发育技术参数。将该方法应用于团头鲂雌核发育技术中，可快速评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率，进而快速实现高效制备雌核发育团头鲂的育种目标，对鱼类遗传改良和育种实践具有指导意义及重要经济价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是受精后52h红鲫精子制备的雌核发育团头鲂(右)和鲂鲫杂种(左)外形图；

图2是红鲫精子诱导的雌核发育团头鲂外形图；

图3是红鲫精子诱导的雌核发育团头鲂染色体图；

图4是红鲫(a)、普通团头鲂(b)、红鲫精子诱导的雌核发育团头鲂(c)的DNA含量图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。

除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。

除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。

实施例1：

一种快速鉴定鲂鲫杂种的方法，包括如下步骤：

(1)杂交：选取体征良好、身体健壮的团头鲂和红鲫作为亲鱼，对所述亲鱼注射黄体素释放激素类似物(8-10μg/kg)与绒毛膜促性腺激素(400-500IU/kg)的混合催产剂进行人工催产，采用挤压法对雌性团头鲂与雄性红鲫进行干法受精，同时以团头鲂自交作为对照；

(2)鲂鲫杂种的早期鉴定：在胚胎发育过程中团头鲂眼色素开始出现于受精后60-72h，而团头鲂与红鲫杂种后代的眼色素开始出现于36-48h，根据早期眼色素发育即可有效鉴定鲂鲫杂种。

实施例2：

一种快速评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率的方法，包括如下步骤：

(1)人工催产：选取体征良好、身体健壮的团头鲂和红鲫作为亲鱼，对所述亲鱼注射黄体素释放激素类似物(8-10μg/kg)与绒毛膜促性腺激素(400-500IU/kg)的混合催产剂进行人工催产；

(2)红鲫精子遗传灭活：取雄性红鲫，挤出精液用Hank’s液按体积比1:200稀释，在置于冰块上的培养皿中铺上薄薄的一层精液，用15W紫外灯，距离培养皿10-15cm，摇床转速60r/min，照射2-5min；

(3)倍性操作：将遗传灭活后的红鲫精子覆盖在卵子上，受精卵平铺于玻璃培养皿底，受精3min后将受精卵转入0-4℃的冰水混合物中处理22-26min，在常温静水孵化；

(4)鉴定后代：根据后代出现眼色素的时间可以快速鉴定杂交后代和雌核发育后代，如图1所示，经过处理的胚胎在受精后36-48h内出现眼色素的后代为杂交后代，在受精后60-72h内出现眼色素的后代为雌核发育后代，统计数量后即可评估红鲫精子诱导的团头鲂雌核发育效率。

本实施例的方法在早期即可评估雌核发育效率，从而快速建立红鲫精子高效制备雌核发育团头鲂的方法。

本实施例得到的雌核发育后代外形如图2所示，染色体图如图3所示。红鲫(a)、普通团头鲂(b)、红鲫精子诱导的雌核发育团头鲂(c)的DNA含量如图4所示。