一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂片及其胰腺疾病诊断的应用

摘要

本发明公开了一种尿胰蛋白酶原‑2检测试剂片及其胰腺疾病诊断的应用，包括检测试剂片，以及装载有检测试剂片的试剂盒，检测试剂片包括试剂本体，试剂本体由检测卡和IC卡组成，所述检测卡由塑料载板和试纸条组成，试纸条由PVC胶板、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、羊抗鼠多克隆抗体、TG‑2单克隆抗体1和荧光标记的TG‑2单克隆抗体2组成，且试剂盒在室温下可以存储。本发明通过定量测定尿液中胰蛋白酶原2（TG‑2）的含量，来进行胰腺疾病的辅助诊断。

说明书

技术领域

本发明属于胰腺疾病诊断技术领域，具体涉及一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂片及其胰腺疾病诊断的应用。

背景技术

在正常情况下，胰液在其腺体组织中含有无活性的胰酶原。胰液沿胰腺管道不断地经胆总管奥狄氏括约肌流入十二指肠，由于十二指肠内有胆汁存在，加上十二指肠壁黏膜分泌一种肠激酶，在二者的作用下，胰酶原开始转变成活性很强的消化酶。如果流出道受阻，排泄不畅，即可引起胰腺炎。

目前现有的胰腺炎检测主要通过检测尿液作为检测胰腺疾病的方法，通过检测尿液羧肽酶活化肽(CAPAP)和淀粉酶(AMS)结果比较,探讨羧肽酶对急性胰腺炎早期诊断的临床意义.方法羧肽酶采用免疫层析胶体金法.淀粉酶采用硝基苯麦芽三糖苷法.结果急性胰腺炎组30例,CAPAP检测阳性率73.3％,AMS检测阳性率33.3％.腹痛组95例,CAPAP检测阳性率16.8％,AMS检测阳性率5.3％.对照组179例,CAPAP检测阳性率2.2％,AIdS检测阳性率3.4％.两种方法一致性为3.0％,82.2％,10.9％,3.9％,其中急性胰腺炎组同时阳性有8例,同时阴性有6例，该检测方法数据需要两种物质进行，且只能通过百分比来对比胰腺炎的临床诊断。

发明内容

本发明提出了一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂片及其胰腺疾病诊断的应用，通过定量测定尿液中胰蛋白酶原2(TG-2)的含量，来进行胰腺疾病的辅助诊断。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂片，其包括检测试剂片，以及装载有检测试剂片的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂片包括试剂本体，所述试剂本体由检测卡和IC卡组成，所述检测卡由塑料载板和试纸条组成。

在本发明的尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中，所述试纸条由PVC胶板、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、羊抗鼠多克隆抗体、TG-2单克隆抗体1和荧光标记的TG-2单克隆抗体2组成。

在本发明的尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中，所述试剂盒保存于4℃～30℃，所述检测卡铝箔袋开封后有效期为1小时。

在本发明的尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中，所述PVC胶板上设有样品垫、结合垫和吸水部件，所述硝酸纤维素膜位于结合垫与吸水材料之间。

在本发明的尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中，所述样品垫上设有加样区，所述硝酸纤维索膜上设有T线和C线，所述T线与结合垫的距离大于C线与结合垫的距离。

在本发明的尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中，所述试剂本体适用于定量测定尿液中胰蛋白酶原2的含量，所述试剂本体的检测范围为20～2000ng/mL。

在本发明的尿胰蛋白酶原-2检测试剂片在胰腺疾病诊断的应用中，所述试剂片的使用步骤如下；

1)检测前将检测卡、样本恢复至室温；

2)确定IC卡与试剂盒的批号相匹配，并将IC卡放在仪器读卡区，读取信息；

3)打开检测卡内包装，取出检测卡；将样本吸取100μL样本垂直滴加至检测卡的加样处，开始计时；

4)加入样本后，点击荧光免疫分析仪屏幕上开始测试，检测卡室温反应10分钟；

5)将检测卡插入荧光免疫分析仪的测试卡槽中，仪器将自动对检测卡进行测试；

6)最后，从荧光免疫分析仪的显示屏幕上可以看到检测结果，点击屏幕上打印，可将结果打印出来。

实施本发明的这种尿胰蛋白酶原-2检测试剂片及其胰腺疾病诊断的应用，具有以下有益效果：本案设置检测试剂片，以及装载有检测试剂片的试剂盒，并将试剂片上设有PVC胶板、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、羊抗鼠多克隆抗体、TG-2单克隆抗体1和荧光标记的TG-2单克隆抗体2，并在检测时将样本中的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)可与荧光垫上的荧光标记尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2发生结合，并被游离的荧光标记尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2在质控线处与羊抗鼠IgG多克隆抗体发生结合而发光，这就实现了能通过定量测定尿液中胰蛋白酶原2(TG-2)的含量，来进行胰腺疾病的辅助诊断。

附图说明

图1为本发明尿胰蛋白酶原-2检测试剂片在胰腺疾病诊断的应用的流程示意图。

图中：加样区1、结合垫2、T线3、C线4、硝酸纤维索膜5、PVC胶板6、吸水材料7、样品8、样品垫9。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

(一)尿胰蛋白酶原-2检测试剂片的性状

1.产品规格及其划分说明

1.1规格：1人份/盒、5人份/盒、25人份/盒、50人份/盒、100人份/盒。

1.2每人份检测卡包装在单独铝箔袋中。

2.外观性状

2.1检测卡外封铝箔袋，应无破损，封口严密，不漏气。

2.2检测卡外壳及内部试纸条应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染.

2.3试纸条的宽度

试纸条宽度应不小于2.5mm。

2.3.1液体移行速度

液体移行速度应不低于10mm/min。

2.4准确度

2.4.1相对偏差(B)应不超过±15.0％。

2.4.2回收率应在85.0％～115.0％范围内。

2.5空白限

空白限应不高于20.0ng/mL。

2.6线性范围

试剂盒在(20～2000)ng/mL的范围内，相关系数r应不小于0.9900。

2.7重复性

变异系数(CV)应不大于15.0％。

2.8批间差

相对极差(R)应不大于15.0％

2.9稳定性

取保存至超过有效期的试剂盒进行2.3-2.7中的检测，结果应符合2.3-2.7的要求

3.尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中试剂本体的组成成分；

3.1本试剂主要由检测卡、IC卡、说明书组成。其中检测卡由塑料载板和试纸条组成，试纸条由PVC胶板、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、羊抗鼠多克隆抗体、TG-2单克隆抗体1和荧光标记的TG-2单克隆抗体2等组成，且不同批号的上述各组份不能混用和互换。

4.尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中试剂盒的存储条件；

试剂盒保存于4℃～30℃，有效期18个月，测试卡铝箔袋开封后有效期为1小时，本试剂盒可以常温条件下运输。

5.本发明的适用仪器；

适用于本公司生产的LD1800干式荧光免疫分析仪、LD1800S干式荧光免疫分析仪；广州蓝勃生物科技有限公司生产的AFS-1000干式荧光免疫分析仪、AFS2000A干式荧光免疫分析仪、AFS3000B干式荧光免疫分析仪。

6样本的要求

6.1用于人尿液样本，其他体液和样本可能得不到准确结果。

6.2样本不需特殊处理，按常规临床医学技术采集样本。若不能及时检测，尿液样本可在室温(18℃-28℃)存放4小时或在2℃-8℃可保存48小时。

6.3检测前样本必须恢复至室温并混匀后方可使用，建议采用新鲜样本。

6.4不得使用明显溶血、黄疸和脂浊样本。当样品中胆红素浓度≤200μmol/L，血红蛋白浓度≤4.0g/L、甘油三酯浓度≤10mmol/L时对测定结果无明显影响。

6.5.超过线性范围上限的样本，不建议作稀释处理。

(二)尿胰蛋白酶原-2检测试剂片在胰腺疾病诊断的应用步骤

7外观性状

在自然光下以矫正视力目视检查，结果应符合2.1的要求。

7.2试纸条宽度

随机抽取一人份检测卡，取出卡内试纸条，用游标卡尺测量其宽度，测量1次，结果应符合2.2的要求。

7.3液体移行速度

按说明书进行操作，随机抽取一人份检测卡在加样孔中加入样本液后，以液体滴入加样孔时开始用秒表计时，直至液体走完检测窗口时停止计时，所用的时间记为(t)，用游标卡尺测量液体移行的长度(不含吸水纸)，记为(L)，则计算L/t即为液体移行速度，结果应符合2.3的要求。

7.4准确度

7.4.1测定国家标准物质(GBW)或其他可用于评价常规测量程序的参考物质(RM)或高低两个水平浓度的企业参考品或商品化质控物，重复测定3次，取测试结果均值

式中：B为相对偏差；

7.5空白限

以参考品基质作为样本进行检测，重复检测20次，计算20次检测结果的均值及标准差，均值+2倍标准差即为空白限，结果应符合2.5的要求。

7.6线性范围

用接近线性范围上限的高值样本和接近线性范围下限的低值样本，混合成5个稀释浓度(xi)，用试剂盒分别进行测试，每个稀释浓度至少测试2次，分别求出测定结果的平均值(yi)。以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。按式(3)计算线性回归的相关系数(r)，结果应该符合2.6的要求。

7.7重复性

以高低两个水平浓度的参考样本或质控品进行检测，每个水平重复检测10次，计算检测结果的平均值

7.8批间差

用3个不同批号的试剂盒分别对高低两个水平浓度的参考样本或质控品进行检测，每个水平每个批号检测5次，分别计算平均值i(i＝1,2,3)，按式(7)、式(8)计算3个批号试剂盒测定均值的相对极差(R)，结果应符合2.8的要求。

式中：

7.9稳定性

取保存至超过有效期的试剂盒按照3.3-3.7所示方法，进行2.3-2.7中的检测，结果应符合2.9的要求。

8.0检验原理

本试剂盒采用双抗体夹心法，在硝酸纤维素膜的检测线处包被来源于小鼠的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体1，在质控线处包被羊抗鼠IgG多克隆抗体，在荧光垫上固定荧光标记来源于小鼠的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2。检测时，样本中的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)可与荧光垫上的荧光标记尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2发生结合，形成免疫复合物，并在层析作用下沿膜移动，经过检测线时与包被的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体1发生结合而发光，游离的荧光标记尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2在质控线处与羊抗鼠IgG多克隆抗体发生结合而发光。荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及已拟定的标准曲线自动转化检测出样本中的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)。

9.0检验方法

使用前请仔细阅读试剂说明书以及荧光免疫分析仪操作手册，需严格按照试剂说明书执行有关操作，否则无法保证可靠的结果。

1.检测前将检测卡、样本恢复至室温(15-30℃)。

2.确定IC卡与试剂盒的批号相匹配，并将IC卡放在仪器读卡区，读取信息。

3.打开检测卡内包装，取出检测卡；将样本吸取100μL样本垂直滴加至检测卡的加样处，开始计时；

4.加入样本后，点击荧光免疫分析仪屏幕上“开始测试”，检测卡室温反应10分钟；将检测卡插入荧光免疫分析仪的测试卡槽中，仪器将自动对检测卡进行测试；从荧光免疫分析仪的显示屏幕上可以看到检测结果，点击屏幕上“打印”，可将结果打印出来。

实施例2

(一)尿胰蛋白酶原-2检测试剂片的性状

1.产品规格及其划分说明

1.1规格：1人份/盒、5人份/盒、25人份/盒、50人份/盒、100人份/盒。

1.2每人份检测卡包装在单独铝箔袋中。

2.外观性状

2.1检测卡外封铝箔袋，应无破损，封口严密，不漏气。

2.2检测卡外壳及内部试纸条应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染.

2.3试纸条的宽度

试纸条宽度应不小于2.5mm。

2.3.1液体移行速度

液体移行速度应不低于10mm/min。

2.4准确度

2.4.1相对偏差(B)应不超过±15.0％。

2.4.2回收率应在85.0％～115.0％范围内。

2.5空白限

空白限应不高于20.0ng/mL。

2.6线性范围

试剂盒在(20～2000)ng/mL的范围内，相关系数r应不小于0.9900。

2.7重复性

变异系数(CV)应不大于15.0％。

2.8批间差

相对极差(R)应不大于15.0％

2.9稳定性

取保存至超过有效期的试剂盒进行2.3-2.7中的检测，结果应符合2.3-2.7的要求

3.尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中试剂本体的组成成分；

3.1本试剂主要由检测卡、IC卡、说明书组成。其中检测卡由塑料载板和试纸条组成，试纸条由PVC胶板、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、羊抗鼠多克隆抗体、TG-2单克隆抗体1和荧光标记的TG-2单克隆抗体2等组成，且不同批号的上述各组份不能混用和互换。

4.尿胰蛋白酶原-2检测试剂片中试剂盒的存储条件；

试剂盒保存于4℃～30℃，有效期18个月，测试卡铝箔袋开封后有效期为1小时，本试剂盒可以常温条件下运输。

5.本发明的适用仪器；

适用于本公司生产的LD1800干式荧光免疫分析仪、LD1800S干式荧光免疫分析仪；广州蓝勃生物科技有限公司生产的AFS-1000干式荧光免疫分析仪、AFS2000A干式荧光免疫分析仪、AFS3000B干式荧光免疫分析仪。

6样本的要求

6.1用于人尿液样本，其他体液和样本可能得不到准确结果。

6.2样本不需特殊处理，按常规临床医学技术采集样本。若不能及时检测，尿液样本可在室温(18℃-28℃)存放4小时或在2℃-8℃可保存48小时。

6.3检测前样本必须恢复至室温并混匀后方可使用，建议采用新鲜样本。

6.4不得使用明显溶血、黄疸和脂浊样本。当样品中胆红素浓度≤200μmol/L，血红蛋白浓度≤4.0g/L、甘油三酯浓度≤10mmol/L时对测定结果无明显影响。

6.5.超过线性范围上限的样本，不建议作稀释处理。

(二)尿胰蛋白酶原-2检测试剂片在胰腺疾病诊断的应用步骤

7外观性状

在自然光下以矫正视力目视检查，结果应符合2.1的要求。

7.2试纸条宽度

随机抽取一人份检测卡，取出卡内试纸条，用游标卡尺测量其宽度，测量1次，结果应符合2.2的要求。

7.3液体移行速度

按说明书进行操作，随机抽取一人份检测卡在加样孔中加入样本液后，以液体滴入加样孔时开始用秒表计时，直至液体走完检测窗口时停止计时，所用的时间记为(t)，用游标卡尺测量液体移行的长度(不含吸水纸)，记为(L)，则计算L/t即为液体移行速度，结果应符合2.3的要求。

7.4准确度

7.4.1在人源基质样品中加入一定体积标准溶液或纯品进行测试，各样品重复测定3次，取测试结果均值，按式(2)计算回收率，结果应符合2.4.2的要求。

式中：R为回收率；V为加入标准溶液的体积；V

7.5空白限

以参考品基质作为样本进行检测，重复检测20次，计算20次检测结果的均值及标准差，均值+2倍标准差即为空白限，结果应符合2.5的要求。

7.6线性范围

用接近线性范围上限的高值样本和接近线性范围下限的低值样本，混合成5个稀释浓度(xi)，用试剂盒分别进行测试，每个稀释浓度至少测试2次，分别求出测定结果的平均值(yi)。以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。按式(3)计算线性回归的相关系数(r)，结果应该符合2.6的要求。

7.7重复性

以高低两个水平浓度的参考样本或质控品进行检测，每个水平重复检测10次，计算检测结果的平均值

7.8批间差

用3个不同批号的试剂盒分别对高低两个水平浓度的参考样本或质控品进行检测，每个水平每个批号检测5次，分别计算平均值i(i＝1,2,3)，按式(7)、式(8)计算3个批号试剂盒测定均值的相对极差(R)，结果应符合2.8的要求。

式中：

7.9稳定性

取保存至超过有效期的试剂盒按照3.3-3.7所示方法，进行2.3-2.7中的检测，结果应符合2.9的要求。

8.0检验原理

本试剂盒采用双抗体夹心法，在硝酸纤维素膜的检测线处包被来源于小鼠的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体1，在质控线处包被羊抗鼠IgG多克隆抗体，在荧光垫上固定荧光标记来源于小鼠的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2。检测时，样本中的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)可与荧光垫上的荧光标记尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2发生结合，形成免疫复合物，并在层析作用下沿膜移动，经过检测线时与包被的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体1发生结合而发光，游离的荧光标记尿胰蛋白酶原-2(TG-2)单克隆抗体2在质控线处与羊抗鼠IgG多克隆抗体发生结合而发光。荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及已拟定的标准曲线自动转化检测出样本中的尿胰蛋白酶原-2(TG-2)。

9.0检验方法

使用前请仔细阅读试剂说明书以及荧光免疫分析仪操作手册，需严格按照试剂说明书执行有关操作，否则无法保证可靠的结果。

1.检测前将检测卡、样本恢复至室温(15-30℃)。

2.确定IC卡与试剂盒的批号相匹配，并将IC卡放在仪器读卡区，读取信息。

3.打开检测卡内包装，取出检测卡；将样本吸取100μL样本垂直滴加至检测卡的加样处，开始计时；

4.加入样本后，点击荧光免疫分析仪屏幕上“开始测试”，检测卡室温反应10分钟；将检测卡插入荧光免疫分析仪的测试卡槽中，仪器将自动对检测卡进行测试；从荧光免疫分析仪的显示屏幕上可以看到检测结果，点击屏幕上“打印”，可将结果打印出来。至此，本发明发明目的得以完成。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。