一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料及其应用

摘要

本发明属于水产养殖的技术领域，具体涉及一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料及其应用。所述低蛋白饲料的组分包括核苷酸，所述低蛋白饲料用于改善凡纳滨对虾对饲料营养物质的消化和吸收能力，提高对虾的生长性能，改善虾体组成和血清生化指标，提高免疫力。所述核苷酸包括5′‑胞苷酸、5′‑腺苷酸、5′‑肌苷酸二钠、5′‑尿苷酸二钠、5′‑鸟苷酸二钠和5′‑胸苷酸二钠，主要用于改善凡纳滨对虾虾体粗脂肪含量、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶、肝胰腺谷丙转氨酶、血细胞数量、血清PO活力、胃和肠道总蛋白含量。

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖的技术领域，具体涉及一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料及其应用。

背景技术

我国是水产养殖大国，养殖产量多年位居全球首位。饲料蛋白质是水产动物的主要能源物质。我国水产饲料工业使用的蛋白质资源(如鱼粉)较长时间处于短缺状态，依赖进口程度高，这制约着我国水产饲料工业和养殖业的可持续发展。但是，随着我国水产养殖的高速发展，产业模式逐渐向高密度、集约化精养转变，养殖过程废水增多，易造成水体污染，破坏生态环境，不利于生态文明建设。“节能减排”一直是水产养殖业关注的方向。低蛋白质饲料(也称平衡氨基酸饲料)技术具有减少蛋白质原料的添加量，减少氮排放，甚至改善动物生长性能的优势，是一种“节能减排”的有效手段。

低蛋白饲料技术已经在畜禽养殖，特别是猪生产中有了较深入的研究，在禽类也有进一步的研究。在水产养殖中，低蛋白饲料技术也有一定的开展，在水产中的应用有待进一步研究。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料及其应用，提供一种改善凡纳滨对虾对饲料营养物质的消化和吸收能力，改善虾体组成和血清生化指标，提高免疫力的低蛋白饲料。

本发明的技术内容如下：

本发明提供了一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料的应用，所述低蛋白饲料用于改善凡纳滨对虾对饲料营养物质的消化和吸收能力，改善虾体组成和血清生化指标，提高免疫力；

所述低蛋白饲料用于改善凡纳滨对虾虾体增重率、体粗脂肪和灰分含量、血清谷草转氨酶活力、谷丙转氨酶活力和尿酸含量、肝胰腺谷丙转氨酶活力、血细胞数量、胃和肠道总蛋白含量；

所述低蛋白饲料用于改善凡纳滨对虾生长性能、体成分、血清生化和免疫抗氧化作用。

本发明还提供了一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料，所述低蛋白饲料包括核苷酸、鱼粉、乌贼膏、虾壳粉、大豆浓缩蛋白、血粉、花生麸、豆粕、面粉、鱼油、大豆磷脂油、胆固醇、35％VC酯、磷酸二氢钙、沸石粉、氯化胆碱、维生素预混料、矿物质预混料、羧甲基纤维素钠、纤维素以及晶体蛋氨酸；

所述核苷酸包括15～25％5′-胞苷酸、15～25％5′-腺苷酸、15～25％5′-肌苷酸二钠、15～25％5′-尿苷酸二钠、15～25％5′-鸟苷酸二钠和15～25％5′-胸苷酸二钠；

所述低蛋白饲料中蛋白的含量占比为30～40％。

本发明的有益效果如下：

本发明的提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料，所述低蛋白饲料含有核苷酸原料，与高、低蛋白水平饲料相比，在低蛋白饲料中添加核苷酸混合物具有改善凡纳滨对虾对影响物质的消化和吸收的能力，有助于促进凡纳滨对虾的生长情况；

本发明的含有核苷酸的低蛋白质饲料对于凡纳滨对虾的生长性能、饲料利用效率、虾体组成和血清生化指标和免疫力都有改善作用，尤其是对虾体粗脂肪含量、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶、肝胰腺谷丙转氨酶、血细胞数量、血清PO活力、胃和肠道总蛋白含量作用显著。

具体实施方式

以下通过具体的实施案例对本发明作进一步详细的描述，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定。

若无特殊说明，本发明的所有原料和试剂均为常规市场的原料、试剂。

实施例

一种提高凡纳滨对虾生长性能的低蛋白质饲料：

1)所述低蛋白质饲料的成分包括：核苷酸(5′-胞苷酸、5′-腺苷酸、5′-肌苷酸二钠、5′-尿苷酸二钠、5′-鸟苷酸二钠和5′-胸苷酸二钠按质量比为1:1:1:1:1:1混合而成，比例可按实际调整，各个核苷酸使用量控制在15～25％)、鱼粉、乌贼膏、虾壳粉、大豆浓缩蛋白、血粉、花生麸、豆粕、面粉、鱼油、大豆磷脂油、胆固醇、35％VC酯、磷酸二氢钙、沸石粉、50％氯化胆碱、维生素预混料、矿物质预混料、羧甲基纤维素钠、纤维素以及晶体蛋氨酸；

本实施案例以低蛋白组和高蛋白组饲料分别设置了实验组和对照组(共4组)，实验组为在对照组的饲料基础上添加核苷酸混合物，4组试验的饲料按照等脂的方式配制；

将所有饲料原料粉碎过80目筛，微量成分采用逐级扩大法混匀后，再加入油和水，用双螺杆压机(SLX-80型)制得直径2.0mm颗粒料，经55℃烘干7-8h，自然冷却，过筛装袋，室温保存备用；

各试验组饲料配比如表1所示，并体现营养水平、氨基酸和脂肪酸的组成。

表1 对虾基础饲料配方组成及营养水平(风干基础)

其中，维生素预混料为每千克饲料提供VA 8000IU、VD3 4000IU、VE 60mg、VK320mg、VB1 10mg、VB2 30mg、VB6 16mg、泛酸钙50mg、叶酸5mg、生物素0.16mg、烟酸60.3mg、VB12 0.03mg、肌醇300mg；

矿物质预混料为每千克饲料提供MgSO

2)凡纳滨对虾饲养

购自广东省中山市合一虾苗场的凡纳滨对虾，先用商品饲料在室内循环水养殖系统进行2周暂养，每天分别在8:00、14:00和20:00分3次投喂；

所述室内循环水养殖系统由玻璃纤维桶构成；

挑选体质健康、个体重量约1.0g的凡纳滨对虾苗480尾，随机分为4组，每组分别投喂表1中的4种饲料。

采用饱食投喂法，每天在8:30、14:30和20:30分三次投喂，投喂量为体重的4～6％，投饲后30min吸出残饵，同时根据摄食情况及时调整投饲量。

凡纳滨对虾的饲养环境为海水和自来水混合后的咸淡水，经过沙滤、消毒后添入，盐度为4.0～5.0‰，自然光照，水温20～26℃，pH7.0～8.0，溶氧>6.0mg/L，氨氮浓度≤0.1mg/L，亚硝酸盐浓度≤0.01mg/L；

饲养期56d，每周测定水质情况。

饲养期结束之后，禁食12h，对凡纳滨对虾的生长情况、体型指标、饲料利用情况、虾体成分、虾血清生化指标、虾组织酶活力、虾免疫指标等结果进行检测和结果分析，实验结果用平均值±标准差(Mean±SD)表示，采用Spss17.0软件进行双因素方差分析，利用Duncan’s多重比较组间显著差异分析，差异显著水平为P<0.05。

1.2种蛋白水平饲料中添加核苷酸对凡纳滨对虾生长性能的影响

称终末体重，统计对虾存活尾数，计算对虾的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、摄食量(FI)、饲料系数(FC)和存活率(SR)，结果如下表所示：

表2 凡纳滨对虾生长性能情况

其中，增重率(WGR，％)＝(末均重－初均重)×100/初均重；

特定生长率(SGR，％/d)＝[ln(末均重)-ln(初均重)]×100/饲养天数；

存活率(SR，％)＝(试验结束时虾尾数/试验开始时放虾尾数)×100；

饲料系数(FC)＝投喂量/(终末虾体重+试验中死亡虾体重－初始虾体重)。

由表2可见，饲料中低蛋白水平及其基础上添加混合核苷酸能够提高凡纳滨对虾的末均重、存活率、增重率和特定生长率，降低饵料系数，饲料中的蛋白水平和核苷酸水平显著影响对虾的末均重、增重率和特定生长率。

2.2种蛋白水平饲料中添加核苷酸对凡纳滨对虾形体指标和饲料利用情况的影响

表3 凡纳滨对虾形体指标和饲料利用情况

其中，肝胰指数(HSI，％)＝(肝胰腺重/体重)×100；

肥满度(CF，g/cm

摄食量(FI，g/shrimp)＝投饵总量/[(试验开始时放虾尾数+试验结束时虾尾数)/2]；

蛋白质保留率(PDR，％)＝100×(试验终末虾体蛋白量－试验初始虾体蛋白量)/摄入蛋白量。

由表3所示，低蛋白水平能显著提高对虾的摄食量和蛋白质保留率，添加核苷酸组能提高对虾摄食量和蛋白质保留率。

3.2种蛋白水平饲料中添加核苷酸对凡纳滨对虾体成分的影响

每组选取尾虾用于测定全虾干物质、粗蛋白、粗脂肪和灰分，结果如下表所示：

表4 凡纳滨对虾体成分情况(干重，％)

由表4可见，饲料中蛋白水平显著影响虾体粗脂肪含量，低蛋白组虾体粗脂肪含量显著低于高蛋白组。饲料中添加核苷酸能提高虾体粗蛋白含量，显著提高虾体干物质、粗脂肪和灰分含量。蛋白水平和核苷酸水平在虾体粗脂肪含量上存在交互作用。

4.2种蛋白水平饲料中添加核苷酸对凡纳滨对虾血清生化指标的影

从每组取虾，制备血清：1mL无菌注射器从围心腔取血，合并置于无菌Eppendorf管中，4℃冰箱静置过夜后10000r/min离心10min，移出血清分装，于-80℃冰箱中保存备用，检测血清中的生化指标；

匀浆上清总蛋白(TP)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)测定均采用南京建成试剂盒相对应的试剂盒说明书测定；

所述结果如下表所示：

表5 凡纳滨对虾血清生化指标情况

由表5可见，低蛋白水平组对虾血清中胆固醇含量显著升高，谷丙转氨酶活力显著降低。蛋白水平对对虾血清中谷草转氨酶、尿酸、血糖和总蛋白含量无显著性影响。饲料中添加核苷酸能显著降低对虾血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力，降低血清中总蛋白含量，对胆固醇、尿酸和血糖含量影响不显著。蛋白水平和核苷酸水平在谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力上存在交互作用。

5.2种蛋白水平饲料中添加核苷酸对凡纳滨对虾组织的AKP、AST和ALT活力的影响

从4组凡纳滨对虾中每组取15尾虾，剥离肝胰腺、胃、肠道，置于-80℃冰箱中保存备用；

肝胰腺、胃和肠道组织匀浆上清液制备：从-80℃或4℃冰箱中取出肝胰腺、胃或肠道样品，4℃解冻，然后称取0.3g左右剪碎的样品，放入玻璃匀浆器中，加入6倍样品重的预冷的生理盐水，在冰浴中匀浆(dY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司)，充分匀浆后，倒入离心管中，再加入3倍样品重的预冷生理盐水，冲洗匀浆器，倒入离心管，制成10％组织匀浆液，在4℃下3000r/min离心(eppendorf centrifuge 5804R)10min，取上清液，分装后于-80℃冰箱中保存备用。

酚氧化酶(PO)测定：参照Ashida(1971)方法进行，略加改进。以L-多巴为底物，把10μL血清(组织匀浆液)加入96孔酶标板中，然后向各孔中加入200μL浓度为0.1mol/L、pH为6.0的磷酸盐缓冲液，最后向各样品孔中加入10μL浓度为0.01mol/L的L-多巴液(购自sigma公司)，在酶标仪(550，Bio-Rad)中振荡4次，每隔4min读取490nm处的吸光值。酶活力以试验条件下，OD490值每分钟增加0.001为1个酶活力单位。

以上所述各个指标的测定结果如表6、表7所示：

表6 凡纳滨对虾AKP、AST和ALT活力情况

由表6可见，饲料中的蛋白水平能显著影响肝胰腺、胃和肠道总蛋白含量。低蛋白水平显著提高肠道总蛋白含量，显著降低肝胰腺和胃的总蛋白含量。饲料中添加核苷酸显著提高对虾血细胞数量、血清PO活力和肠道TP含量。蛋白水平和核苷酸水平在血细胞数量、血清PO活力、胃和肠道总蛋白含量上存在显著的交互作用。

表7 凡纳滨对虾免疫指标情况

由表7可见，饲料中的蛋白水平能显著影响肝胰腺、胃和肠道总蛋白含量。低蛋白水平显著提高肠道总蛋白含量，显著降低肝胰腺和胃的总蛋白含量。饲料中添加核苷酸显著提高对虾血细胞数量、血清PO活力和肠道TP含量。蛋白水平和核苷酸水平在血细胞数量、血清PO活力、胃和肠道总蛋白含量上存在显著的交互作用。

由上可见，低蛋白水平中添加核苷酸能显著提高对虾的生长性能、提高饲料利用效率、改善虾体组成和血清生化指标，提高免疫力。蛋白水平和核苷酸添加水平在虾体粗脂肪含量、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶、肝胰腺谷丙转氨酶、血细胞数量、血清PO活力、胃和肠道总蛋白含量存在显著的交互作用。

综上可见，本发明的含有核苷酸的低蛋白质饲料对于凡纳滨对虾的生长性能、饲料利用效率、虾体组成和血清生化指标和免疫力都有改善作用，尤其是对虾体粗脂肪含量、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶、肝胰腺谷丙转氨酶、血细胞数量、血清PO活力、胃和肠道总蛋白含量作用显著。