一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液及乳酸菌剂制备方法

摘要

一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液，按照质量份数包括：2～3份的醋酸钠，10～20份的葡萄糖或麦芽糖，0.15～3份的天门冬氨酸，5～10份的牛肉膏，1.5～2份的碳酸钙，15～20份的氢氧化钙，100～200份的番茄汁，3～5份的无机盐，0.5～1份的胰蛋白胨以及2～5份的酵母提取物。本发明提供的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液及乳酸菌剂制备方法，培养液的制备原料成本不高，容易获取，且能缩短无盐酸菜发酵周期；相对于直投式乳酸菌菌剂，本发明的的乳酸菌剂的制作过程更为简便，成本更低，便于操控，能够适用于大多数的工业生产。

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体的说是一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液及乳酸菌剂制备方法。

背景技术

酸菜的发酵过程伴随着以乳酸菌为主的微生物的生长代谢活动，但传统的自然发酵工艺的周期长、产品质量不稳定，因此人工接种乳酸菌发酵酸菜技术逐渐取代自然发酵生产技术。相对于传统的自然发酵生产技术，人工接种乳酸菌发酵酸菜发酵周期更短、安全性更高、产品质量更加稳定。人工接种乳酸菌发酵酸菜技术已成为目前研究的一个热点。随着无盐酸菜逐渐兴起，低盐度蔬菜人工接种乳酸菌强化发酵的生产方式取代自然发酵生产方式，逐渐成为多数酸菜企业的发展趋势。

近年来，直投式乳酸菌菌剂开始逐渐被应用于无盐酸菜发酵生产中，直投式乳酸菌菌剂有使用简便、保存时间长、产品质量好等优点，但其制作过程繁琐、成本较高，在无盐酸菜工业中未能形成较大的规模，一般无盐酸菜的市场价格相对偏低，制作成本不高，使用直投式乳酸菌菌剂会造成无盐酸菜的制作成本变高，因此直投式乳酸菌菌剂不适用于大多数的工业生产，其实际应用并不广泛。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明提供一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液及乳酸菌剂制备方法，相对于直投式乳酸菌菌剂的生产制造，本发明提供的制备方法更加简单且便于操控，能够适用于大多数的工业生产。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液，按照质量份数包括：2～3份的醋酸钠，10～20份的葡萄糖或麦芽糖，0.15～3份的天门冬氨酸，5～10份的牛肉膏，1.5～2份的碳酸钙，15～20份的氢氧化钙，100～200份的番茄汁，3～5份的无机盐，0.5～1份的胰蛋白胨以及2～5份的酵母提取物。

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液的进一步优化：还包括20～25份的啤酒液。

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液的进一步优化：按照质量份数包括：3份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.2份的天门冬氨酸，10份的牛肉膏，16份的碳酸钙，15份的氢氧化钙，150份的番茄汁，3份的无机盐，1份的胰蛋白胨以及3份的酵母提取物。

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液的进一步优化：按照质量份数包括：2份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.15份的天门冬氨酸，8份的牛肉膏，20份的碳酸钙，15份的氢氧化钙，200份的番茄汁，5份的无机盐，1份的胰蛋白胨，2份的酵母提取物以及20份的啤酒液。

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液的进一步优化：按照质量份数包括：2.5份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.3份的天门冬氨酸，10份的牛肉膏，15份的碳酸钙，15份的氢氧化钙，200份的番茄汁，3份的无机盐，0.8份的胰蛋白胨，5份的酵母提取物以及25份的啤酒液。

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液的进一步优化：按照质量份数包括：2份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.15份的天门冬氨酸，10份的牛肉膏，20份的碳酸钙，20份的氢氧化钙，100份的番茄汁，3份的无机盐，1份的胰蛋白胨，3份的酵母提取物以及20份的啤酒液。

一种工业化无盐酸菜用乳酸菌剂制备方法，包括以下步骤：

S1、菌种活化：将保存的菌株接种于MRS培养基中，在37℃下厌氧培养24h，得到活化菌种；

S2、活化菌种培养：将活化菌种放入装有如权利要求1～6中任意一项所述的培养液的瓶中，于32～40℃的条件下摇床培养12～24h，每4小时测一次pH值，通过氢氧化钙调节pH至4.5～6.5，得到一级菌种，从一级菌种中初筛得到初级菌种；

S3、初级菌种培养：将初级菌种放入装有所述的培养液的缸中，于32～40℃的条件下静置培养12～24h，每4小时测一次pH值，通过氢氧化钙调节pH至4.5～6.5，得到二级菌种，从二级菌种中复筛得到次级菌种；

S4、次级菌种培养：将次级菌种放入装有所述的培养液的罐中，于32～40℃的条件下静置培养24～48h，每4小时测一次pH值，通过氢氧化钙调节pH至4.5～6.5，得到乳酸菌剂。

S2中，对一级菌种进行初筛，筛选出不小于3m

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌剂制备方法的进一步优化，还包括以下步骤：

S5、菌种保存：将甘油高压灭菌，灭菌后的甘油与三级菌种1:1充分混合，将混合后的菌种放置冰箱中保存。

作为上述的一种工业化无盐酸菜用乳酸菌剂制备方法的进一步优化，所述甘油的终浓度为10～30％。

有益效果：本发明提供了一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液及乳酸菌剂制备方法，培养液的制备原料成本不高，容易获取，且能缩短无盐酸菜发酵周期；相对于直投式乳酸菌菌剂，本发明的的乳酸菌剂的制作过程更为简便，成本更低，便于操控。

附图说明

图1是乳酸菌剂制备方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种工业化无盐酸菜用乳酸菌培养液，按照质量份数包括：2～3份的醋酸钠，10～20份的葡萄糖或麦芽糖，0.15～3份的天门冬氨酸，5～10份的牛肉膏，1.5～2份的碳酸钙，15～20份的氢氧化钙，100～200份的番茄汁，3～5份的无机盐，0.5～1份的胰蛋白胨以及2～5份的酵母提取物。

乳酸菌培养液的成分还包括20～25份的啤酒液；无机盐可使用钠盐等。

在各成分中，醋酸钠抑制部分细菌生长；葡萄糖或麦芽糖提供碳源；牛肉膏提供碳源、维生素、核苷酸和微量元素；碳酸钙通过对生成的乳酸量进行性能鉴定，中和产生的酸，乳酸能溶解碳酸钙形成透明钙圈；氢氧化钙调节pH；番茄汁提供维生素、碱性元素、抑制细菌生长；无机盐用于提供微量元素；胰蛋白胨提供氮源和维生素；酵母提取物提供氮源、维生素、生长因子等。

实施例1

本实施例中的菌种采用肠膜明串珠菌，肠膜明串珠菌的培养液成分按照质量份数包括：3份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.2份的天门冬氨酸，10份的牛肉膏，16份的碳酸钙，15份的氢氧化钙，150份的番茄汁，3份的无机盐，1份的胰蛋白胨以及3份的酵母提取物。

实施例2

本实施例中的菌种采用戊糖片球菌，戊糖片球菌的培养液成分按照质量份数包括：2份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.15份的天门冬氨酸，8份的牛肉膏，20份的碳酸钙，15份的氢氧化钙，200份的番茄汁，5份的无机盐，1份的胰蛋白胨，2份的酵母提取物以及20份的啤酒液。

实施例3

本实施例中的菌种采用乳酸链球菌，乳酸链球菌的培养液成分按照质量份数包括：2.5份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.3份的天门冬氨酸，10份的牛肉膏，15份的碳酸钙，15份的氢氧化钙，200份的番茄汁，3份的无机盐，0.8份的胰蛋白胨，5份的酵母提取物以及25份的啤酒液。

实施例4

本实施例中的菌种采用乳酸乳球菌乳酸亚种，乳酸乳球菌乳酸亚种的培养液成分按照质量份数包括：2份的醋酸钠，10份的葡萄糖或麦芽糖，0.15份的天门冬氨酸，10份的牛肉膏，20份的碳酸钙，20份的氢氧化钙，100份的番茄汁，3份的无机盐，1份的胰蛋白胨，3份的酵母提取物以及20份的啤酒液。

一种工业化无盐酸菜用乳酸菌剂制备方法，适用于以上四个实施例，包括以下步骤：

S1、菌种活化：将保存的四种菌株接种于MRS培养基中，在37℃下厌氧培养24h，得到活化菌种。

根据四种菌种的不同，配制出相应的培养液并分别放入四个瓶中、四个缸中以及四个罐中，培养过程中，肠膜明串珠菌的温度条件为40℃，戊糖片球菌的温度条件为35℃，乳酸链球菌温度条件为40℃，乳酸乳球菌乳酸亚种温度条件为37℃。

S2、活化菌种培养：将四种活化菌种按3％的接种量放入装有相应培养液的瓶中，于相应的温度条件下摇床培养12～24h，每4小时测一次pH值，通过氢氧化钙调节pH至4.5～6.5，得到四种一级菌种，从四种一级菌种中初筛得到四种初级菌种。

S3、初级菌种培养：将四种初级菌种按3％的接种量放入装有相应的培养液的缸中，于相应的温度条件下静置培养12～24h，每4小时测一次pH值，通过氢氧化钙调节pH至4.5～6.5，得到四种二级菌种，从四种二级菌种中复筛得到四种次级菌种。

S4、次级菌种培养：将四种次级菌种按3％的接种量放入装有相应的培养液的罐中，于相应的温度条件下静置培养24～48h，每4小时测一次pH值，通过氢氧化钙调节pH至4.5～6.5，得到四种乳酸菌剂。

pH值可采用0.5％的溴甲酚紫进行检测，根据检测到的结果选择是否需要添加氢氧化钙调节酸碱度。

S2中，对一级菌种进行初筛，比较菌落的形态，根据菌落的生长速率，筛选出不小于3m

乳酸菌剂制备方法还包括以下步骤：

S5、菌种保存：将甘油高压灭菌，灭菌后的甘油与三级菌种1:1充分混合，将混合后的菌种放置冰箱中保存。

S5中，甘油的终浓度为10～30％，这里采用25％。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。