绿原酸在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中的用途

摘要

本发明公开了绿原酸在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中的用途。实验结果表明，施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后，患犬细小病毒病的幼犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善，本发明的药物对犬细小病毒病痊愈率为67％，显效率为33％，总有效率为100％；施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后，患犬瘟热的病犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善，本发明的药物对对犬瘟热的痊愈率为58％，显效率为25％，总有效率为83％。绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中具有良好的应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/ 或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中的用途。

背景技术

随着宠物行业的蓬勃发展，养犬人数一直在激增。近几年来，犬细小病毒病和犬瘟热的肆虐给养犬业和养犬人士带来了巨大的伤害。高致病率和高致死率让犬细小病毒病和犬瘟热成为威胁犬科动物健康的可怕疾病。

犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)属于细小病毒科(Parvoviridae)，细小病毒亚科(Parvovirinae)，原细小病毒属(Protoparvovirus)，该属还包括猫细小病毒(FPV)、水貂肠炎病毒(MEV)等其他病毒。犬细小病毒病(Canine Parvovirus Infection，CP)是由犬细小病毒引起的烈性传染性疾病，对2～6月龄幼犬危害最大，呕吐、腹泻和出血性肠炎为主要临床表现。

犬瘟热(Canine Distemper，CD)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus，CDV)引起的一种高度接触性传染病，传染性强，死亡率可高达80％以上。犬瘟热症状初期狗的体温高达39.5～41摄氏度，食欲不振，精神沉郁，眼鼻流出水样分泌物，打喷嚏，有腹泻。在以后2～14天内再次出现体温升高，咳嗽，有脓性鼻涕、脓性眼屎，同时继发胃肠道疾病，呕吐、拉稀，食欲废绝。精神高度沉郁，嗜睡。犬瘟热发病后期就会出现典型的神经症状，口吐白沫，抽搐，死亡率高达80％。

目前，针对犬细小病毒病和犬瘟热的防治没有特别有效的药物，主要还是考虑免疫接种，一般使用生产成本较低的灭活疫苗和弱毒疫苗。我国主要使用的抗犬细小病毒疫苗是CPV-2b型，但已被证实该型疫苗对幼犬无法起到完全免疫作用；抗犬瘟热病毒的疫苗是CDV-11株或联合疫苗，对犬瘟热只能起到一定预防作用，不能用于治疗该类疾病。

因此，亟需开发能够有效治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物。目前，还未见将绿原酸作为唯一活性成分用来制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中的用途。

本发明提供了绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗细小病毒病和/或瘟热病的药物或饲料添加剂中的用途。

本发明还提供了中药提取物在制备预防和/或治疗细小病毒病和/或瘟热病的药物或饲料添加剂中的用途，所述中药提取物中，绿原酸的含量为20.00wt.％-100.00wt.％。

进一步地，所述中药提取物中，绿原酸的含量为21.36wt.％-98.00wt.％。

进一步地，所述中药提取物为杜仲叶提取物或金银花提取物。

进一步地，所述杜仲叶提取物或金银花提取物的制备方法包括以下步骤：取杜仲叶或金银花，加水煎煮，过滤，取滤液，浓缩，干燥，即得。

进一步地，所述杜仲叶或金银花与水的质量比为1：10～1：15；所述煎煮时间为0.5～1.0小时，煎煮次数为2～3次。

进一步地，所述浓缩后，还包括提纯步骤，提纯方法选自沉淀、萃取、层析柱吸附解吸、结晶中的一种或两种以上；

优选的，所述提纯的方法为依次沉淀、萃取、结晶，或依次沉淀、层析柱吸附解吸、结晶。

进一步地，所述沉淀采用的试剂为乙醇，所述萃取采用的试剂为乙酸乙酯，所述结晶采用的试剂为乙酸乙酯，所述层析柱采用的大孔吸附树脂为 HPD-100或D-101。

进一步地，所述细小病毒病为犬细小病毒病或鸡细小病毒病，优选为犬细小病毒病；

或，所述瘟热病为犬瘟热。

进一步地，所述药物或饲料添加剂每单位制剂中含绿原酸10mg-100mg；

和/或，所述药物或饲料添加剂为注射剂或固体制剂。

实验结果表明，施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后，患犬细小病毒病的幼犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善，本发明的药物对犬细小病毒病痊愈率为67％，显效率为33％，总有效率为100％；施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后，患犬瘟热的病犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善，本发明的药物对对犬瘟热的痊愈率为 58％，显效率为25％，总有效率为83％。本发明绿原酸治疗犬细小病毒病和犬瘟热的效果非常突出，单独使用就可以治疗犬细小病毒病和犬瘟热，且有效率高。绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中具有良好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

实施例一 本发明杜仲叶提取物制法一

药材：杜仲叶，绿原酸含量为3.58wt.％。

制法：取杜仲叶，加10倍重量的水煎煮两次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积5倍量的乙醇，静置，滤过，滤液浓缩回收乙醇，喷雾干燥，得杜仲叶提取物，其中绿原酸含量为21.36～26.75wt.％。

实施例二 本发明杜仲叶提取物制法二

药材：杜仲叶，绿原酸含量为3.58wt.％。

制法：取杜仲叶，加10倍重量的水煎煮两次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积5倍量的乙醇，静置，滤过，滤液减压浓缩回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05-1.15(25℃)，加浓缩液15倍体积的乙酸乙酯萃取5次，保留乙酸乙酯相，浓缩，低温挥干，得杜仲叶提取物，其中绿原酸含量为55.81～63.47wt.％。

实施例三 本发明杜仲叶提取物制法三

药材：杜仲叶，绿原酸含量为3.58wt.％。

制法：取杜仲叶，加10倍重量的水煎煮两次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积5倍量的乙醇，静置，滤过，滤液减压浓缩回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05-1.15(25℃)，加浓缩液15倍体积的乙酸乙酯萃取5次，保留乙酸乙酯相，浓缩，0-10℃放置12h结晶，滤过，结晶体低温干燥，得杜仲叶提取物，其中绿原酸含量为 80.24～86.09wt.％。

实施例四 本发明杜仲叶提取物制法四

药材：杜仲叶，绿原酸含量为3.58wt.％。

制法：取杜仲叶，加10倍重量的水煎煮两次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积5倍量的乙醇，静置，滤过，滤液减压浓缩回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05-1.15(25℃)，加浓缩液15倍体积的乙酸乙酯萃取5次，保留乙酸乙酯相，浓缩，0-10℃放置12h结晶，滤过，结晶体用乙酸乙酯70℃饱和溶解，0-10℃放置12h重结晶，滤过，低温干燥，得杜仲叶提取物，其中绿原酸含量≥98wt.％。

实施例五 本发明金银花提取物制法

药材：金银花，绿原酸含量为2.88％。

制法：取金银花，加15倍重量的水煎煮三次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积8倍量的乙醇，静置，滤过，滤液浓缩回收乙醇，喷雾干燥，得金银花提取物，其中绿原酸含量为15.78～20.52wt.％。

实施例六 本发明金银花提取物制法

药材：金银花，绿原酸含量为2.88％。

制法：取金银花，加15倍重量的水煎煮三次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积8倍量的乙醇，静置，滤过，滤液浓缩回收乙醇，上HPL-100大孔吸附树脂层析柱吸附，60％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩回收乙醇，喷雾干燥，得金银花提取物，其中绿原酸含量为43.21～48.77wt.％。

实施例七 本发明金银花提取物制法

药材：金银花，绿原酸含量为2.88％。

制法：取金银花，加15倍重量的水煎煮三次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积8倍量乙醇，静置，滤过，滤液浓缩回收乙醇，上HPL-100大孔吸附树脂层析柱吸附，60％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩回收乙醇，浓缩液上D-101大孔吸附树脂层析柱吸附，10％、30％、50％乙醇依次梯度洗脱，收集50％洗脱液，浓缩回收乙醇，喷雾干燥，得金银花提取物，其中绿原酸含量为72.35～80.13wt.％。

实施例八 本发明金银花提取物制法

药材：金银花，绿原酸含量为2.88％。

制法：取金银花，加15倍重量的水煎煮三次，每次0.5小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至原液体积的1/10，搅拌加入浓缩液体积8倍量乙醇，静置，滤过，滤液浓缩回收乙醇，上HPL-100大孔吸附树脂层析柱吸附，60％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩回收乙醇，浓缩液上D-101大孔吸附树脂层析柱吸附，10％、30％、50％乙醇依次梯度洗脱，收集50％洗脱液，浓缩回收乙醇并浓缩至浸膏，加乙酸乙酯60℃加热溶解，冷却至室温，结晶，过滤，干燥，得金银花提取物，其中绿原酸含量≥95wt.％。

实施例九 本发明药物粉针剂制法一

处方一

制法：按照处方称取杜仲叶提取物、葡萄糖，加注射用水溶解，滤过，喷雾干燥，无菌分装成1000瓶。

实施例十 本发明药物粉针剂制法二

处方二

制法：按照处方称取杜仲叶提取物、葡萄糖、氯化钠，加注射用水溶解，滤过，喷雾干燥，无菌分装成1000瓶。

实施例十一 本发明药物粉针剂制法三

处方三

制法：按照处方称取杜仲叶提取物、甘露醇，加注射用水溶解，滤过，喷雾干燥，无菌分装成1000瓶。

实施例十二 本发明药物粉针剂制法四

处方四

制法：称取杜仲叶提取物无菌分装成1000瓶。

实施例十三 本发明药物粉针剂制法五

处方五

制法：按照处方称取杜仲叶提取物、葡萄糖、亚硫酸氢钠，加注射用水溶解，滤过，罐装成1000瓶。

实施例十四 本发明药物粉针剂制法六

处方6

制法：按照处方称取杜仲叶提取物、维生素C，加注射用水溶解，滤过，罐装成1000瓶。

实施例十五 本发明药物粉针剂制法七

处方7

制法：按照处方称取金银花提取物、葡萄糖、亚硫酸氢钠，加注射用水溶解，滤过，罐装成1000瓶。

以下通过实验例证明本发明的有益效果。

实验例1绿原酸对犬细小病毒病的疗效测试

1.试验材料

1.1药物

绿原酸，含量99.2wt.％，由四川九章生物科技有限公司提供。使用前，用生理盐水溶解配制成每1mL中约含绿原酸15mg。

生理盐水，由四川科伦药业股份有限公司。

1.2动物

Beagle犬12只，雄雌兼用(雌性未孕)，年龄5～6月龄，体重6.0～7.0kg，由四川省医学科学院实验动物研究所犬养殖场提供。

1.3病毒

犬细小病毒，由青岛动植物检疫局提供。

2.试验方法

2.1模型建立

对健康未免疫犬用犬细小病毒强毒攻击，6天后，均出现典型犬细小病毒病临床症状：体温升高至40.1～41.0℃，精神沉郁，食欲废绝，呕吐，腹泻、拉血便等，分别采用血凝试验和血凝抑制试验、犬细小病毒快速诊断试纸检测，确诊为患犬细小病毒病。

2.2动物给药

将患犬细小病毒病的Beagle犬12只，随机分2组，每组6只，分别为绿原酸药物治疗组和阴性对照组。

绿原酸药物治疗组按2mg/kg肌肉注射绿原酸的生理盐水溶液，每天一次，连续给药10天；阴性对照组肌肉注射同等体积生理盐水。

2.3临床症状观察

每天早晚测量体温1次，观察犬的排便、精神状态、摄食及饮水情况并记录。判定和比较各组患病犬的临床症状、病程进展和治疗效果。分析整理结果，将痊愈和显效者列为有效病例，统计出有效率。

2.4疗效评判标准

(1)痊愈用药后临诊症状：体温、精神、食欲恢复正常、血便停止、粪便成形，小便正常等。

(2)显效用药后临诊症状：体温、精神、食欲恢复正常，但粪便尚未成形或体温、精神恢复正常，但食欲不振和粪便未成形等。

(3)无效用药后临诊症状无改善或恶化、死亡者。

3.试验结果

表1给药后第10天的临床症状观察结果

注：“/”表示已死亡。

表2绿原酸药物治疗组的疗效有效率

与阴性对照组相比，患犬细小病毒病的Beagle犬在肌肉注射绿原酸溶液后体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善。

在对人工感染发病犬细小病毒病的Beagle犬治疗中，通过肌肉注射给药绿原酸10天的治疗统计，4只痊愈，2只显效，无一例动物死亡，痊愈率为 67％，显效率为33％，总有效率为100％，说明以绿原酸为唯一活性成分的注射剂，对治疗犬细小病毒病具有良好的临床应用前景。

实验例2绿原酸对犬瘟热的疗效测试

1.试验材料

1.1药物

绿原酸，含量99.2wt.％，由四川九章生物科技有限公司提供。使用前，用生理盐水溶解配制成每1mL中约含绿原酸15mg。

生理盐水，由四川科伦药业股份有限公司提供。

犬五联血清，由军事医学科学院军事兽医研究所提供。

1.2动物

由成都华西宠物医院提供的已确诊犬瘟热的病犬36只，雄雌各半，年龄 1岁～2岁，体重12～14kg，

2.试验方法

2.1模型建立

将36只已确诊的病犬随机分成3组，每组12只，分别为：阳性药物组，绿原酸药物治疗组和阴性对照组，观察并记录病犬的生理指标和临床表现。

2.2动物给药

按照实验分组进行给药：

(1)阳性药物组：肌肉注射五联血清，1ml/kg/次，每日一次，连续给药15天；

(2)绿原酸药物组：肌肉注射绿原酸的生理盐水溶液，2mg/kg/次，每日一次，连续给药15天；

(3)阴性对照组：肌肉注射与组(2)同等体积生理盐水，每日一次，连续给药15天。

2.3临床症状观察

每天早晚测量体温1次，观察犬的排便、精神状态、摄食及饮水情况并记录。判定和比较各组患病犬的临床症状、病程进展和治疗效果。分析整理结果，将痊愈和显效者列为有效病例，统计出有效率。

2.4疗效评判标准

(1)痊愈用药后临诊症状：病犬体温降至38.5℃或以下，不再出现精神萎靡、腹泻等临床症状，食欲恢复正常。

(2)显效用药后临诊症状：体温、精神、食欲和粪便中有2项及以上正常。

(3)无效用药后临诊症状：无改善或恶化、死亡者。

3.试验结果

表3给药后第15天的临床症状观察结果

注：“/”表示已死亡。

表4各给药组治疗效果

与阴性对照组相比，阳性药物和绿原酸对患犬瘟热的病犬的体温、精神、食欲和粪便状态均有明显改善。

由上表可知，在患犬瘟热的病犬治疗中，通过肌肉注射给药阳性药物的 15天的治疗，3只痊愈，4只显效，5只无效，痊愈率为25％，显效率为33％，总有效率为58％；统计绿原酸15天的治疗效果，7只痊愈，3只显效，2只无效，痊愈率为58％，显效率为25％，总有效率为83％；阴性对照组均无效。说明与阴性对照组相比，阳性药物和绿原酸对患犬瘟热的病犬的体温、精神、食欲和粪便状态均有明显改善；而以绿原酸为唯一活性成分的注射剂，相对阳性药物五联血清对犬瘟热有更好的治疗效果，具有良好的临床应用前景。

综上，本发明提供了绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中的用途。实验结果表明，施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后，患犬细小病毒病的幼犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善，本发明的药物对犬细小病毒病痊愈率为 67％，显效率为33％，总有效率为100％；施用本发明以绿原酸作为唯一活性成分制得的药物后，患犬瘟热的病犬体温、精神、食欲和粪便状态均明显改善，本发明的药物对对犬瘟热的痊愈率为58％，显效率为25％，总有效率为 83％。本发明绿原酸治疗犬细小病毒病和犬瘟热的效果非常突出，单独使用就可以治疗犬细小病毒病和犬瘟热，且有效率高。绿原酸作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗犬细小病毒病和犬瘟热的药物或饲料添加剂中具有良好的应用前景。